于文清， 劉曉輝

（河北民族師范學(xué)院 生物系，河北 承德 06700）

承德野生杏仁和杏葉蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

于文清， 劉曉輝

（河北民族師范學(xué)院 生物系，河北 承德 06700）

承德特產(chǎn)之一的苦杏仁，從現(xiàn)有文獻(xiàn)看，野生杏仁蛋白的加工研究集中在杏仁粉、杏仁露等相對(duì)較少的品種；杏葉的開(kāi)發(fā)近乎為零。蛋白質(zhì)在人體和動(dòng)物中擔(dān)負(fù)著各種重要而特殊的功能。作者運(yùn)用凱氏定氮法對(duì)承德本地區(qū)的野生杏仁和杏葉蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)杏仁和杏葉提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，從而促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。

杏仁；杏葉；蛋白質(zhì)；凱氏定氮；消化；蒸餾；滴定

野生杏仁是一種傳統(tǒng)的中藥，在我國(guó)使用已有上千年的歷史?！侗静菥V目》記載，杏仁有“潤(rùn)肺脾、消食積、散滯氣”三大好處，其本身含有豐富的蛋白質(zhì)，既是高級(jí)營(yíng)養(yǎng)品，又可供藥用。作為承德特產(chǎn)之一的苦杏仁，從現(xiàn)有文獻(xiàn)看，苦杏仁蛋白的加工研究集中在杏仁粉、杏仁露等相對(duì)較少的品種；杏葉的開(kāi)發(fā)近乎為零，沒(méi)有引起人們的重視。蛋白質(zhì)是構(gòu)成人體的物質(zhì)基礎(chǔ)。人體缺乏蛋白質(zhì)，不但抵抗力減弱，嚴(yán)重時(shí)往往出現(xiàn)四肢水腫、貧血、肝腎損壞及消化道潰瘍癥狀。本文運(yùn)用凱氏定氮法對(duì)承德地區(qū)的苦杏仁和杏葉蛋白質(zhì)含量進(jìn)行測(cè)定，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)杏仁和杏葉提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，從而促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。

氮在蛋白質(zhì)中的含量比較接近，平均為16%，即每克氮相當(dāng)于6.25克蛋白質(zhì)。因此，可以通過(guò)凱氏定氮的方法計(jì)算氮的含量，進(jìn)而計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)原理

凱氏定氮法原理：進(jìn)行消化時(shí)，含氮有機(jī)物與濃硫酸在消煮爐內(nèi)共熱，其中的C和H被氧化成二氧化氮和水，而N則被轉(zhuǎn)化成氨，并進(jìn)一步與濃硫酸作用生成硫酸銨（甘氨酸的消化過(guò)程可表示如下：

蒸餾時(shí)，濃堿使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨。反應(yīng)中釋放的氨與水蒸氣經(jīng)冷凝管進(jìn)入接收瓶的硼酸溶液中。硼酸溶液吸收氨后，溶液中的氫離子濃度減低，然后再用標(biāo)準(zhǔn)無(wú)機(jī)酸滴定，直至恢復(fù)溶液中原有的氫離子濃度為止，最后根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)酸的摩爾數(shù)計(jì)算出待測(cè)物中的含氮量。公式如下：

c為標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液摩爾濃度；V1為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)；V2為滴定空白消化液用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)；W為樣品質(zhì)量（g）；樣品中蛋白質(zhì)含量（%）=總氮量×6.25。

1.2 器材與試劑

1.2.1 主要儀器

DGG-9070B恒溫電熱鼓風(fēng)干燥箱、消化管、KXY-1010控溫消煮爐、DDY-2A凱氏定氮儀、微量滴定管。

1.2.2 試劑

消化液（H2O2：濃硫酸：水=3:2:1)

粉末硫酸鉀-硫酸銅混合物（催化劑）硫酸鉀與無(wú)水硫酸銅以3:1配比研磨混合

30%NaOH溶液

2%硼酸溶液

標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液（約0.01mol/L）

混合指示劑（田氏指示劑）

由50ml0.1%甲烯藍(lán)乙醇溶液與200ml0.1%甲基紅乙醇溶液混合，存于棕色瓶中備用。此指示劑酸性時(shí)為紫紅色，堿性時(shí)為綠色。變色范圍很窄、靈敏。

1.2.3 樣品

野生杏仁、常綠杏葉、常綠發(fā)酵杏葉、落葉。

1.3 樣品采集與制備

取野生杏仁、常綠杏葉、常綠發(fā)酵杏葉、落葉若干，分別曬干后用粉碎機(jī)粉碎，然后研磨成精細(xì)粉末，將其分別置于稱量瓶中，放在DGG-9070B型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中，在60℃下干燥約20小時(shí)，達(dá)恒重即可。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

凱氏定氮法。

1.5 實(shí)驗(yàn)操作

1.5.1 取樣

（1）取4個(gè)消化管并標(biāo)號(hào)，各加1顆玻璃珠。

（2）在1～3號(hào)管中各加樣品0.2g，催化劑0.4g，消化液10ml（直接將樣品送入瓶底，不要沾在瓶口和瓶頸上，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果），為實(shí)驗(yàn)組。

（3）在4號(hào)管中加0.2ml蒸餾水，0.4g催化劑和10ml濃硫酸為對(duì)照組。

1.5.2 消化

（1）將4個(gè)已取樣的消化管置于通風(fēng)櫥內(nèi)，放在消煮爐上消化，先在100℃預(yù)熱半小時(shí)（不要使液體沖到瓶頸）。

（2）預(yù)熱后，加大火力，迅速升溫至360℃繼續(xù)消化，直至消化液成淡綠色為止（約兩個(gè)半小時(shí)）。

（3）消化完畢，待管中溶物冷卻后，加10ml蒸餾水（慢加，隨加隨搖）。

（4）冷卻后，將溶物倒入100ml容量瓶中，定容備用。

1.5.3 蒸餾

（1）從冷水通水口通入冷水進(jìn)行水封，打開(kāi)開(kāi)關(guān)，預(yù)熱凱氏定氮儀。

（2）從容量瓶中量取60ml回收液倒入消化管，并將消化管固定到蒸餾頭下的橡膠塞上。

（3）量取30ml硼酸溶液置于錐形瓶中，滴入3～4滴指示劑，溶液呈紫紅色，固定在托盤上。

（4）按下加堿開(kāi)關(guān)，加堿后按下蒸餾開(kāi)關(guān)，開(kāi)始蒸餾。當(dāng)錐形瓶中加有指示劑的硼酸溶液由紫紅色變?yōu)闇\綠色，且不再有氣體產(chǎn)生時(shí)停止蒸餾。

（5）更換裝有蒸餾水的消化管和錐形瓶，對(duì)儀器進(jìn)行清洗。

（6）更換裝有新樣品的消化管，并換上新的裝有硼酸與指示劑的錐形瓶進(jìn)行下一次蒸餾，直至完成。

1.5.4 滴定

全部蒸餾完畢后，用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，直至硼酸指示劑溶液由淡綠色變?yōu)樽霞t色即為滴定終點(diǎn)。

記錄滴定時(shí)所耗標(biāo)準(zhǔn)鹽酸的量。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

公式如下：

將數(shù)據(jù)代入公式得：

表1 各種樣品蛋白質(zhì)含量的比較

2.1 結(jié)果

從表1可以看出蛋白質(zhì)含量最高的是野生杏仁，19.29%；從杏葉類型看常綠發(fā)酵杏葉蛋白質(zhì)含量最高，7.15%，落葉的含量最低1.00%；由此可以得出，苦杏仁含量高于杏葉含量，而發(fā)酵常綠杏葉高于普通落葉，說(shuō)明發(fā)酵后杏葉可以充分利用，進(jìn)行深加工，如作為青飼料利用，前景非常樂(lè)觀。

3 前景展望

承德是一個(gè)盛產(chǎn)野生杏仁的地方，有著豐富的杏仁和杏葉資源，合理的開(kāi)發(fā)進(jìn)行深加工有著廣闊的前景，充分發(fā)揮野生杏仁的優(yōu)勢(shì)，在原來(lái)生產(chǎn)杏仁露、杏仁粉的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，可以開(kāi)發(fā)美容杏仁蛋白面膜、杏仁膏；營(yíng)養(yǎng)保健的蛋白質(zhì)粉。杏葉有著豐富的資源，都大量浪費(fèi)在深山里，采摘后可以通過(guò)發(fā)酵后深加工作為青飼料，形成新的產(chǎn)業(yè)，為地方經(jīng)濟(jì)服務(wù)。

［1］北京大學(xué)生物系生物化學(xué)教研室．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M]．北京:人民教育出版社，1979．

［2］王秀奇,秦淑媛等．基礎(chǔ)化學(xué)實(shí)驗(yàn)（第 2 版）[M]．北京:高等教育出版社，1996．

［3］李建武．生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法[M]．北京:北京大學(xué)出版社，1999．

[4]聶劍初，吳國(guó)利等合編．生物化學(xué)基礎(chǔ)教程（第3版）[M]．北京:高等教育出版社，1999．06

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1005-1554（2011）02-0054-02

2010-12-08

于文清（1971-），女，河北豐寧人，河北民族師范學(xué)院生物系副教授，理學(xué)碩士。