田銳 王瑞蘭 金衛(wèi) 胡家昌 俞康龍

腸源性內(nèi)毒素對急性壞死性胰腺炎大鼠腸道屏障功能的影響

田銳 王瑞蘭 金衛(wèi) 胡家昌 俞康龍

隨著對重癥急性胰腺炎(SAP)研究的深入，腸道屏障功能障礙在胰腺炎加重機(jī)制中的作用越來越受到重視。腸屏障功能障礙可引起腸道內(nèi)毒素易位，導(dǎo)致腸源性感染的發(fā)生[1-2]，而腸源性內(nèi)毒素本身，是否會對腸道屏障功能產(chǎn)生影響，尚需進(jìn)一步探討。本文通過動物實(shí)驗(yàn)，觀察腸源性內(nèi)毒素對腸道屏障功能的影響。

一、材料與方法

1．實(shí)驗(yàn)動物及分組：SD大鼠24只，雌雄各半，體重(250±25)g，購自上海西普爾-BK實(shí)驗(yàn)動物有限公司。按隨機(jī)數(shù)字法分為假手術(shù)組、急性壞死性胰腺(ANP)組、內(nèi)毒素組、ANP+內(nèi)毒素組，每組6只。以5%?；悄懰徕c0.1 ml/100 g體重制備ANP模型；內(nèi)毒素組于開腹后翻動膽胰管，并向結(jié)腸腔內(nèi)灌注生理鹽水稀釋的脂質(zhì)體5 mg/300 g體重；ANP+內(nèi)毒素組在制模后再向結(jié)腸腔內(nèi)灌注脂質(zhì)體(劑量同內(nèi)毒素組)；假手術(shù)組僅開腹翻動膽胰管后即關(guān)腹。術(shù)后8 h再次原切口打開腹腔，抽取腹主動脈血分離血清，并取胰腺及升結(jié)腸組織。

2．血清二胺氧化酶(DAO)檢測：采用改良分光光度法測定[3]。

3．胰腺、升結(jié)腸病理學(xué)檢查：大鼠胰腺及升結(jié)腸組織標(biāo)本常規(guī)行病理學(xué)檢查。胰腺組織從水腫、腺泡壞死、出血、炎細(xì)胞浸潤等方面作病理評分[4-7]，升結(jié)腸組織從黏膜細(xì)胞改變、黏膜結(jié)構(gòu)、間質(zhì)出血及炎細(xì)胞浸潤等方面作病理評分[4-7]。

二、結(jié)果

1．血DAO變化：對照組、內(nèi)毒素組、ANP組、ANP+內(nèi)毒素組的血DAO水平分別為(2.62±1.42)mg/ml、(2.88±0.86)mg/ml、(22.64±6.27)mg/ml、(64.85±7.58)mg/ml，ANP組、ANP+內(nèi)毒素組顯著高于對照組和內(nèi)毒素組(P<0.01)，ANP+內(nèi)毒素組又顯著高于ANP組(P<0.01)，對照組與內(nèi)毒素組間無顯著差異。

2．胰腺組織病理改變：對照組和內(nèi)毒素組大鼠胰腺組織未見明顯異常。ANP組大鼠胰腺肉眼見片狀出血、壞死、皂化斑，鏡下見片狀壞死、出血、炎癥細(xì)胞浸潤，腺泡細(xì)胞腫脹、間距增寬，胰腺結(jié)構(gòu)基本保存。ANP+內(nèi)毒素組大鼠胰腺肉眼可見大片壞死、皂化斑形成，鏡下見胰腺組織大片壞死，伴出血、炎癥細(xì)胞浸潤，殘余腺泡細(xì)胞腫脹、變形，呈散在分布。各組大鼠胰腺病理評分見表1。

3．腸組織病理改變：對照組大鼠光鏡下腸黏膜輕度充血，少許上皮細(xì)胞脫落。內(nèi)毒素組大鼠光鏡下腸黏膜充血、出血，伴炎癥細(xì)胞浸潤，少量上皮細(xì)胞脫落。ANP組大鼠腸黏膜充血、出血明顯，炎癥細(xì)胞浸潤，腺體萎縮，大量上皮細(xì)胞壞死、脫落，但腸黏膜結(jié)構(gòu)尚完整。ANP+內(nèi)毒素組大鼠腸黏膜壞死、炎癥反應(yīng)明顯，結(jié)構(gòu)破壞，大量炎癥細(xì)胞浸潤，充血、出血明顯，上皮細(xì)胞大量壞死、脫落。各組大鼠腸組織病理評分見表1。

表1 各組大鼠胰腺組織和腸組織的病理評分

注：與對照組比較，aP<0.01；與ANP組比較，bP<0.01

討論腸源性內(nèi)毒素易位對SAP的進(jìn)展起重要作用，其病理生理學(xué)基礎(chǔ)是腸黏膜血流減少，導(dǎo)致黏膜細(xì)胞缺血缺氧，致使腸道屏障功能障礙[8]。相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，內(nèi)皮素可減少腸道血流及內(nèi)臟器官葡萄糖的產(chǎn)生，導(dǎo)致腸黏膜細(xì)胞缺血缺氧；應(yīng)用內(nèi)皮素受體阻滯劑可以恢復(fù)腸道黏膜細(xì)胞氧供并逆轉(zhuǎn)腸黏膜細(xì)胞的壞死[9-10]。內(nèi)毒素可加速內(nèi)皮素的釋放，因此，腸源性內(nèi)毒素在胰腺炎患者腸道屏障功能損傷中可能起重要作用。

二胺氧化酶(DAO)是特異性存在于哺乳動物腸黏膜上皮細(xì)胞胞質(zhì)中、具有高度活性的細(xì)胞內(nèi)酶。正常情況下不會出現(xiàn)于血漿中，只有當(dāng)腸黏膜上皮細(xì)胞受損，胞內(nèi)釋放DAO并進(jìn)入腸細(xì)胞間隙、淋巴管和血循環(huán)，使血漿DAO升高。它是反映腸道屏障功能變化的可靠標(biāo)志物[11]。單純的內(nèi)毒素組血DAO濃度無明顯升高，腸道組織病理也沒有明顯改變，說明腸道內(nèi)內(nèi)毒素存在本身并不能造成腸黏膜屏障功能受損。而本結(jié)果顯示，ANP組及ANP+內(nèi)毒素組大鼠血DAO濃度均升高，后者升高更為明顯，且ANP+內(nèi)毒素組的結(jié)腸黏膜損傷較ANP組更為嚴(yán)重，提示胰腺炎時腸道內(nèi)毒素可導(dǎo)致腸黏膜屏障功能損害。因此，在胰腺炎早期，必須促進(jìn)腸道內(nèi)毒素的排出，保護(hù)腸道黏膜，以減少內(nèi)毒素易位。

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2009-08-06)

(本文編輯：屠振興)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.05.026

201620 上海，上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院危重病科

田銳，Email：thunder021@hotmail.com