俞 健，李赤翎

（長沙理工大學(xué)生物與食品科學(xué)學(xué)院，湖南長沙410007）

瓜蔞子油中天然抗氧化劑成分分析

俞 健，李赤翎

（長沙理工大學(xué)生物與食品科學(xué)學(xué)院，湖南長沙410007）

研究了瓜蔞子油中的天然抗氧化劑生育酚與β-胡蘿卜素的含量，以及其對瓜蔞子油抗氧化性的影響；瓜蔞子油本身的抗氧化性能一部分依賴于它本身含有的α-生育酚與δ-生育酚，但非完全依賴，所以添加β-胡蘿卜素可明顯提高其抗氧化性能，從而為開發(fā)瓜蔞子油提供理論依據(jù)。

瓜蔞子油，生育酚，β-胡蘿卜素，抗氧化性

瓜蔞子油中含有大量的不飽和脂肪酸，特別是亞油酸的含量較高。但瓜蔞子油中不飽和脂肪酸容易氧化，造成營養(yǎng)的損失和品質(zhì)下降，同時會產(chǎn)生一些對人體有害的物質(zhì)。雖然油脂的不飽和度直接影響著油脂的氧化穩(wěn)定性，但油脂本身是否含抗氧物質(zhì)，也是決定其氧化穩(wěn)定性的重要因素［1-2］。生育酚是大多數(shù)植物油脂中普遍含有的一種抗氧化劑，它是6-羥基苯并二氫吡喃的衍生物。自然界存在四種生育酚的取代結(jié)構(gòu)［3-4］。植物油脂所含生育酚主要為α-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚。除小麥胚芽油外，一般不含β-生育酚。生育三烯酚是生育酚的同系物，但種籽油中不含生育三烯酚［1］。各種生育酚生理功能活性依次為α＞β＞γ＞δ，而抗氧化效能的順序為δ＞γ＞β＞α［5］。生育酚以及其它許多酚類抗氧化劑可以迅速將一個氫原子提供給脂類化合物游離基。到目前為止，關(guān)于瓜蔞子油穩(wěn)定性能及其與抗氧化因素生育酚及β-胡蘿卜素的關(guān)系尚未見報道。為了研究該特有資源氧化穩(wěn)定性的影響因素，本研究借助HPLC法及紙色譜法對瓜蔞子油中生育酚和β-胡蘿卜素進行了分析測定，并比較它們對提高瓜蔞子油氧化穩(wěn)定性的作用效果，這對研究我國特有資源——瓜蔞子油的氧化穩(wěn)定性機理研究具有重要的意義。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

瓜蔞子油 本室自制；β-胡蘿卜素標(biāo)樣、δ-生育酚標(biāo)樣、苯并［e］芘內(nèi)標(biāo) Sigma公司；脫醛乙醇、無水乙醚、無水硫醇鈉、抗壞血酸、氫氧化鉀、硝酸銀、氨水、石油醚、氫氧化鈉、正已烷、三氯甲烷、冰乙酸、淀粉、碘化鉀、硫代硫酸鈉等 均為分析純，長沙華陽化工有限責(zé)任公司。

HPLC儀 包括2臺515泵、2487紫外檢測器、PCM泵控板、Millennium32色譜工作站、Novapak C18（150×3.9mmID、5μL）分析柱、7725i進樣器，Waters公司；679型Rancimat儀 瑞士Metrohm公司；DSY-1型電熱恒溫水浴鍋 北京愛琦商貿(mào)中心；78HW-1型磁力攪拌器 杭州儀表電機廠；紫外可見UV-120-02分光光度計 日本島津；R-201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海申生科技有限公司；FA1104型上皿電子天平 上海精天電子儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 β-胡蘿卜素的測定

1.2.1.1 預(yù)備試液 精確稱取5g油樣放入蒸餾瓶中，加30mL脫醛乙醇，10mL 50%KOH溶液，在90℃下回流皂化30min后，用冰水速冷。用石油醚提取皂化液，將提取液倒入250mL分液漏斗中，然后將皂化殘渣連續(xù)提洗三次，每次約10mL石油醚，提取液并入分液漏斗中。用蒸餾水洗滌提取液至中性，用約5mg無水硫酸鈉脫水，過濾。將分液漏斗及無水硫酸鈉中的色素用少許石油醚洗凈，洗滌液并入球形瓶中。

1.2.1.2 紙色譜 將球形瓶中的提取液置于60℃水浴溫度的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中減壓濃縮至約2mL，再吹干，立即加入2mL石油醚定容，用微量注射器吸取200μL濃縮定容液，在層析紙的基線上迅速點樣，揮干后，將點樣紙置于用石油醚作展開液的層析缸中，進行層析。約2h后，取出濾紙，揮干。將位于展開劑前沿，與其它色素完全分開的胡蘿卜層析帶剪下，立即放入盛有5mL石油醚的具塞試管中，劇烈振搖。

1.2.1.3 比色 用分光光度計在波長為450nm處測定溶液顏色的強度，以石油醚作參比。β-胡蘿卜素的含量按下式計算：

式中：x為樣品中胡蘿卜素的含量，以β-胡蘿卜素計，mg/100g；m1為在標(biāo)準(zhǔn)曲線上所查得的β-胡蘿卜素的含量，μg；V1為點樣體積，mL；V2為樣品石油醚提取液濃縮后的定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g。1.2.2 生育酚測定 樣品中的生育酚經(jīng)皂化及提取處理，從不可皂化部分中提取分離出來，用HPLC法測定其含量。

精確稱取樣品5g置于干燥接收瓶中，加入0.5g抗壞血酸，30mL脫醛乙醇，2mL 10μg/mL苯并［e］芘標(biāo)準(zhǔn)液，10mL 50%KOH溶液，于95℃回流皂化30min，冷卻后，將皂化液過濾至250mL分液漏斗中，用100mL乙醚（除過氧化物）分二次沖洗皂化瓶，并入分液漏斗中。經(jīng)二次萃取后，合并乙醚層。用約5g無水硫酸鈉脫水，過濾后，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中濃縮至2mL，再用N2氣吹干，移入2mL脫醛乙醇溶解，待上HPLC儀。測定前，用0.5μm濾膜過濾。色譜條件如下：分析柱：Novapak C183.9mm×15cm；流動相：甲醇-水，97∶3（v/v），混勻，于臨用前超聲波脫氣；紫外檢測器波長：300nm，量程 0.02AUFS；進樣量：20μL；流速：1.0mL/min。

樣品中生育酚的含量按下式計算：

式中：C標(biāo)為標(biāo)樣中生育酚的濃度；A樣為樣品中生育酚的峰面積；A內(nèi)標(biāo)1為樣品中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；fis為相對校正因子；V為樣液的體積，mL；W為樣品的質(zhì)量，g；A標(biāo)為標(biāo)樣中生育酚的峰面積；A內(nèi)標(biāo)2為標(biāo)樣中內(nèi)標(biāo)物的峰面積；C內(nèi)標(biāo)為標(biāo)樣中內(nèi)標(biāo)物的濃度。

1.2.3 β-胡蘿卜素添加量對瓜蔞子油抗氧化性的影響 根據(jù)要求將分別添加0、0.02%、0.05%、0.08% β-胡蘿卜素的油脂50g于100mL燒懷中，用磁力攪拌器充分混合30min后，各稱取3.0g樣品置于預(yù)先加熱到110℃的Rancimat儀反應(yīng)池中，接好測量瓶，插上雙極鉑電極，調(diào)節(jié)空氣流量為20L/h，同時打開記錄儀進行記錄。以茶油為對照。

2 結(jié)果與分析

2.1 β-胡蘿卜素的測定結(jié)果

4.構(gòu)建產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟，共同提升發(fā)展。西部各省（區(qū)）應(yīng)抓住國家“一帶一路”倡議，充分發(fā)揮各自的優(yōu)勢，盡快搭建組成西部中藥產(chǎn)業(yè)聯(lián)盟，并以此為平臺，優(yōu)化內(nèi)外部環(huán)境，優(yōu)勢互補，抱團發(fā)展，做大做強。不定期舉辦各種交流會、學(xué)術(shù)會、貿(mào)易會，也可東西聯(lián)動，不斷改善軟環(huán)境條件，吸收東部經(jīng)驗和資金聯(lián)合發(fā)展。使西部中藥產(chǎn)業(yè)，由資源大省逐步成為產(chǎn)業(yè)大省，成為中國真正的植物藥王國和中藥藥都。

由各β-胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)液測定值確定回歸方程為：Y=-0.0029+0.0466X，r=0.9999

式中：Y為吸光度；X為β-胡蘿卜含量，μg。

用回歸方程計算β-胡蘿卜素含量，測定結(jié)果見表1。

圖1 β-胡蘿卜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線

表1 β-胡蘿卜素測定結(jié)果

由表1可見，瓜蔞子油中不含β-胡蘿卜素。

2.2 生育酚的測定結(jié)果

2.2.1 定性 依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物色譜圖對照法，以標(biāo)準(zhǔn)溶液中δ-生育酚及內(nèi)標(biāo)苯并［e］芘的保留值分別確定樣品色譜圖中生育酚和內(nèi)標(biāo)組分的色譜峰，進一步確證樣品中的總生育酚。瓜蔞子油中各生育酚含量很高。

圖2 三種生育酚的光譜圖

2.2.2 定量 生育酚為色滿酚（二氫苯并吡喃-6-醇）的衍生物，在298nm附近有紫外吸收。由生育酚（δ-生育酚）系列標(biāo)準(zhǔn)液測定值確定回歸方程為：A=99.3006C+0.02807

其中：A為生育酚峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比。實驗結(jié)果見表2。

表2 生育酚的測定結(jié)果

由表2可見，瓜蔞子油中總生育酚含量較高，其中γ-生育酚含量最高，δ-生育酚次之。δ-生育酚及α-生育酚均能顯著增強瓜蔞油的氧化穩(wěn)定性效能。在這兩種生育酚中，δ-生育酚對瓜蔞油的抗氧化能力大大超過α-生育酚。目前，我國已批準(zhǔn)生育酚用作食品抗氧化劑。在國外，生育酚廣泛應(yīng)用為食品抗氧化劑，很多國家對其使用劑量無限制。我國一般在植物油、煎炸油等食用油中的生育酚允許添加量為0.02%～0.10%。

2.3 添加β-胡蘿卜素對瓜蔞子油氧化穩(wěn)定性的影響

表3可以看出，β-胡蘿卜素添加到瓜蔞子油中，0.08%β-胡蘿卜素的效果最好。本實驗研究表明，瓜蔞子油在存在生育酚這種天然抗氧化劑的同時，再加入少量的β-胡蘿卜素，則既可以抑制自動氧化又可防止光敏氧化。

表3 β-胡蘿卜素對瓜蔞子油氧化誘導(dǎo)時間的影響

3 討論

β-胡蘿卜素對植物油均有抑制氧化作用，但β-胡蘿卜素若含量較高，反而呈現(xiàn)出促氧化作用。生育酚是一種有效的抗脂質(zhì)氧化劑，在人體內(nèi)能預(yù)防血栓產(chǎn)生，改善動脈硬化，顯著降低患冠心病的幾率。生育酚是大多數(shù)植物油中天然存在的抗氧化劑。抗氧化成分的抗氧化效果，不但與抗氧化劑的結(jié)構(gòu)、被清除的自由基、油脂的結(jié)構(gòu)、作用的環(huán)境有關(guān)，還與抗氧化劑的劑量有關(guān)。

4 結(jié)論

α-生育酚及δ-生育酚對瓜蔞子油均有較好的提高氧化穩(wěn)定性效果，但β-胡蘿卜素添加到瓜蔞油中，抗氧化效果更好，瓜蔞子油中含有豐富的生育酚，但不含β-胡蘿卜素，瓜蔞子油本身的抗氧化性能一部分依賴于它本身含有的α-生育酚與δ-生育酚，但并非完全依賴，所以添加β-胡蘿卜素后抗氧化性能提高十分明顯。

［1］斯沃恩D主編，秦洪萬主譯.貝雷油脂化學(xué)與工藝學(xué)［M］.北京：輕工業(yè)出版社，1989.

［2］王鳳玲，孫麗芹，董新偉，等.脂類的催化氧化［J］.中國油脂，1998，23（4）：52-55.

［3］韓國麒.油脂化學(xué)［M］.鄭州：河南科學(xué)技術(shù)出版社，1995：105-113.

［4］漢密爾頓RJ，巴蒂A主編，胡熊飛主譯.油脂的化學(xué)和工藝［M］.北京：輕工業(yè)出版社，1988，231-241.

［5］李檳榔.天然食用抗氧化劑的研究進展［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，1992（4）：74-83.

Analysis on the natrure oxidant in Semen Trichosanthis oil

YU Jian，LI Chi-ling
（Nature Product Institute，Hunan Agriculture University，Changsha 410007，China）

The major nature oxidants in Semen Trichosanthis oil were studied，including the content and influences to antiocidation of Semen Trichosanthis oil of β-carotene and VE.The antioxidant properties of Semen Trichosanthis oil partly depend on its own α-tocopherol and δ-tocopherol，but not entirely dependent，so adding β-carotene can significantly improve its antioxidant properties.So the experiment provided a theoretical basis the development of Semen Trichosanthis oil.

Semen Trichosanthis oil；VE；β-carotene；anoxidation

TS225.1+9

A

1002-0306（2010）11-0153-03

2009-10-30

俞?。?965-），男，本科，研究方向：食品化學(xué)。

湖南省科技廳重點項目（2008NK2011）。