蔣興亮，凡瞿明，張曉嵐，劉素蘭，張 均，王光華

（川北醫(yī)學院附屬醫(yī)院 檢驗科，四川 南充 637000）

急性胰腺炎（acute pancreatitis，AP）病程兇險，并發(fā)癥多、死亡率高，其發(fā)生機制至今仍未完全闡明。已經(jīng)證實，氧自由基（oxygen free radical，OFR）在AP發(fā)病過程中大量產(chǎn)生，作為重要的炎癥介質(zhì)，涉及急性胰腺炎的病理過程中，與急性胰腺炎發(fā)生、發(fā)展及疾病的嚴重程度密切相關(guān)[1]。對氧磷酯酶1（paraoxonase1，PON1）是一種由肝臟合成的鈣離子依賴性血清酯酶，能通過多種途徑降低體內(nèi)的高氧化應激狀態(tài)和脂質(zhì)過氧化的抗氧化酶[2]。目前，對急性胰腺炎中PON1的變化、與其他氧化應激指標的關(guān)系以及在急性胰腺炎中的作用研究較少。本文對急性胰腺炎患者PON1活性及血脂、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平進行測定，以了解PON1活性在急性胰腺炎中的變化，以及與急性胰腺炎之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 急性胰腺炎（AP）組 53例急性發(fā)病期（24～48小時）AP患者，男性26例，女性27例，年齡18～71歲，平均51.2歲。膽源性AP 31例，酒精性AP 7例，其它病因15例。其中，輕癥急性胰腺炎（MAP）23例，男性11例，女性12例，平均年齡50.4歲，平均住院9.8d；重癥急性胰腺炎（SAP）30例，男性15例，女性15例，平均年齡52.5歲，死亡3例，重癥胰腺炎（不包括死亡病例）平均住院28.3d。MAP與SAP標準按中華醫(yī)學會消化病學會胰腺疾病學組制定的中國胰腺炎診治指南（草案）[3]進行分組?；颊呔懦韧悄虿?、肝、腎疾病、甲狀腺疾病史，長期服β受體阻滯劑史及利尿藥物史。

1.1.2 正常對照（NC）組 46例，男性22例，女性24例，年齡25～69歲，平均年齡48.5歲，為健康體檢者。排除心、肝、腎及其它感染性疾病。兩組的年齡和性別構(gòu)成比差異均無顯著性（P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 標本收集 所有受檢者禁食12 h，于清晨采集靜脈血液，肝素抗凝，靜置30 min后，4 000×g離心5 min，分離血漿，-20℃冰箱凍存?zhèn)錂z。

1.2.2 血漿PON1活性測定[4]速率法（自配試劑）。取試劑1（0.05 mol/L甘氨酸緩沖液，pH10.5，含1 mmol/L氯化鈣，1 mol/L氯化鈉）150μL，試劑 2（試劑1中含1mol/L對氧磷）50μL，標本8μL，測定350～500 s內(nèi)對硝基苯酚產(chǎn)生的速度，波長410/340 nm。對硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)為18.05×103。

1.2.3 血漿MDA水平和SOD活性測定 分別采用硫代巴比妥酸法及黃嘌呤氧化酶法。試劑盒由南京建成生物工程公司提供。

1.2.4 血脂測定 采用酶法測定甘油三酯（TG）、膽固醇（TC），一步酶法分別測定高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）及低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），透射免疫濁度法分別測定載脂蛋白A（apoA）、載脂蛋白B（apoB）和脂蛋白（a）[LP（a）]。試劑盒由浙江東甌生物工程公司提供。所有生化項目均在日立7170S生化分析儀上完成。

1.3 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 急性胰腺炎組與對照組血脂水平的比較

急性胰腺炎患者TC、TG和LDL-C均顯著高于對照組（P＜0.05），HDL-C和apoA均低于對照組（P＜0.01），LP（a）和 apoB與對照組無顯著性差異（P ＞0.05）（表1）。

表1 急性胰腺炎組與對照組血脂水平的比較 （±s）

表1 急性胰腺炎組與對照組血脂水平的比較 （±s）

注：1）與正常對照組比較，P ＜0.01；2）與正常對照組比較，P ＜0.05；3）與 MAP 組比較，P ＜0.01；4）與MAP組比較，P＜0.05

組別 TG（mmol/L） TC（mmol/L） HDL-C（mmol/L） LDL-C（mmol/L） 載脂蛋白 A（g/L） 載脂蛋白 B（g/L） LP（a）（mg/L）對照組 1.13±0.52 4.68±0.81 1.30±0.30 2.45±0.98 1.21±0.21 0.82±0.17 132.8±21.2 AP 組 1.42±0.522） 5.00±0.842） 1.01±0.281） 2.70±1.032） 0.95±0.191） 0.88±0.18 137.1±28.1 MAP組 1.19±0.48 4.78±0.82 1.25±0.26 2.55±1.02 1.02±0.202） 0.85±0.17 135.1±25.1 SAP 組 1.62±0.621）4） 5.15±0.852）4） 0.84±0.241）3） 2.86±1.052）4） 0.78±0.181）3） 0.90±0.19 139.3±29.2

2.2 急性胰腺炎患者對PON1、SOD活性和MDA的水平

急性胰腺炎組患者PON1活性顯著低于對照組（P ＜0.01），SOD顯著低于對照組（P ＜0.05），丙二醛顯著高于對照組（P＜0.01）；SAP組PON1和SOD顯著低于MAP組（P＜0.05），而MDA顯著高于MAP組（P ＜0.01）（表2）。

表2 急性胰腺炎組與對照組PON1、SOD和MDA水平的比較 （±s）

表2 急性胰腺炎組與對照組PON1、SOD和MDA水平的比較 （±s）

注：1）與正常對照組比較，P ＜0.01；2）與正常對照組比較，P ＜0.05；3）與 MAP 組比較，P ＜0.01；4）與MAP組比較，P＜0.05

組別 PON1（kU/L） SOD（U/ml） MDA（μmol/L）對照組 168.3±72.1 91.2±10.2 10.1±3.1 AP 組 132.2±64.31） 79.2±11.11） 14.4±3.81）MAP 組 145.1±60.12） 83.1±10.02） 12.5±3.52）SAP 組 112.1±67.11）3） 72.5±12.31）4） 17.1±4.11）3）

2.3 急性胰腺炎患者PON1、SOD和MDA的關(guān)系

以PON1分別與SOD和MDA進行直線相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，PON1活性與SOD呈顯著正相關(guān)（r=0.411，P＜0.05），與 MDA 呈顯著負相關(guān)（r=-0.498，P＜0.01）。

3 討論

AP時腺泡細胞損傷、中性粒細胞和巨噬細胞的活化產(chǎn)生大量氧自由基，當超過機體抗氧化系統(tǒng)的清除能力時即發(fā)生氧化應激。氧化應激與細胞因子、脂類介導的炎癥反應程度決定了疾病的嚴重性。監(jiān)測AP時，氧化應激指標可望成為預測和評價治療效果的有用指標[1]。以往對PON1的研究大多集中于與動脈粥樣硬化有關(guān)的疾病如冠心病[2]、糖尿病[5]、高脂血癥[6]等。由于PON1是一種抗氧化酶，在急性胰腺炎時其活性是否發(fā)生變化，以及與其他氧化應激指標的關(guān)系，目前國內(nèi)這方面的研究較少。

本研究在測定PON1活性的同時，對反映脂質(zhì)過氧化程度和反映抗氧化能力的MDA和SOD水平分別進行了檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，急性胰腺炎患者PON1和SOD活性顯著低于正常（P＜0.05），MDA水平均顯著高于正常組（P＜0.01）。SAP患者血漿PON1和SOD活性顯著低于MAP患者，而血漿MDA水平顯著高于MAP患者。對PON1活性與SOD、MDA進行的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，PON1活性與SOD呈正相關(guān)（P＜0.05），與 MDA 呈負相關(guān)（P ＜0.01），說明隨著病情的加重，氧自由基產(chǎn)生增多，超過了抗氧化系統(tǒng)的處理能力，導致過氧化脂質(zhì)蓄積于人體內(nèi)。ABU-HILAL等[7]也發(fā)現(xiàn)，重癥胰腺炎患者血漿MDA水平高于輕型者，而SOD活性卻低于輕型者，是早期預測AP嚴重程度的另外一個有效指標，與本研究結(jié)果基本一致。抗氧化酶及抗氧化劑在水解或中和這些氧化物質(zhì)的過程中被逐漸消耗，氧化與抗氧化防御體系之間的動態(tài)平衡被打破，導致氧自由基在人體內(nèi)聚積。這些高反應分子通過降解細胞間基質(zhì)中透明質(zhì)酸和膠原而破壞細胞外組織、通過結(jié)構(gòu)及功能上重要的脂類的過氧化而直接攻擊生物膜、能夠使酶及重要蛋白質(zhì)失活，并誘導多核白細胞在組織的聚積等，進而啟動和加速炎癥反應[8]。因此，了解急性胰腺炎患者體內(nèi)氧化及抗氧化指標的變化及規(guī)律、變化機制、在病程中的作用等，對于其診斷、治療、預防及病理闡釋具有重要意義。PON1作為一種抗氧化酶，與其他抗氧化酶或抗氧化劑協(xié)同作用，在水解脂質(zhì)過氧化物的過程中自身被消耗，使血中活性降低。

急性胰腺炎患者PON1活性降低的機制還不十分明晰，推測與下列因素有關(guān)：①自由基產(chǎn)生增加和脂質(zhì)過氧化增強，PON1在水解過氧化脂質(zhì)的過程中被消耗或修飾導致其活性下降[9]；②脂質(zhì)過氧化物可與PON1活性部位共價結(jié)合，其結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，易被蛋白酶識別及對蛋白水解酶特別敏感而被破壞，使PON1活性和濃度降低[10]；③某些致炎細胞因子如白細胞介素（IL-6）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等顯著增加，進而下調(diào)肝細胞表達PON1 mRNA，導致肝臟合成PON1減少，或IL-6和TNF-α直接降低PON1的活性[11]；④PON1與HDL的結(jié)合部位的構(gòu)型對PON1活性非常重要，急性胰腺炎患者的炎癥環(huán)境，產(chǎn)生大量急性反應性HDL，構(gòu)象發(fā)生了明顯的變化，直接影響PON1酶蛋白的活性部位，從而使血中PON1活性降低[12]。

同時本研究也顯示，急性胰腺炎組TC、TG和LDL-C均顯著高于對照組（P＜0.05），HDL-C和apoA均低于對照組（P＜0.01），LP（a）和 apoB與對照組無顯著性差異（P＞0.05）。HDL-C的降低可能減弱出現(xiàn)AP時自身抗炎癥和抗氧化應激能力，加重血管內(nèi)皮損傷，導致胰腺炎癥的加重。加之AP時胰脂酶的釋放可分解TG產(chǎn)生大量的游離脂肪酸（FFA），F(xiàn)FA的β氧化和ω氧化過程中又產(chǎn)生大量的氧自由基，通過氧化應激直接損傷胰腺腺泡細胞，導致胰腺炎癥的加重，造成惡性循環(huán)[9]。

綜上所述，急性胰腺炎患者由于種種原因使PON1活性顯著降低，體內(nèi)氧化與抗氧化平衡被打破，導致自由基蓄積，脂質(zhì)過氧化物產(chǎn)生增多，從而引發(fā)各種病理過程。當然，急性胰腺炎患者PON1活性下降的確切原因及對人體的危害還需進一步研究。PON1活性降低、氧化應激增強及脂代謝紊亂之間的相互作用，可能在急性胰腺炎的發(fā)展中起重要的作用。因此，PON1在評估AP嚴重程度以及更深層次探討氧化應激的作用機制方面具有一定的價值。

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