牛建清，李宏芬，沈志霞，張?zhí)N霞，代 琪，王 健，范淑英

（華北煤炭醫(yī)學院附屬開灤醫(yī)院 1.婦產(chǎn)科；2.檢驗科，河北 唐山 063000）

妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，發(fā)病率在我國約占9.4%，國外報道7%～12%。該病嚴重影響母嬰健康，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍產(chǎn)兒死亡的主要原因，但其確切的發(fā)病機制至今未明[1]。有研究表明，妊娠期高血壓疾病具有較高的遺傳傾向。有關(guān)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶（angiotensin converting enzyme，ACE）和醛固酮合成酶（aldosterone synthase，CYP11B2）基因與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)研究，鮮有報道。本文通過病例-對照研究，探討ACE基因I/D多態(tài)性及CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病患者的相關(guān)關(guān)系，有助于從遺傳學角度解釋妊娠期高血壓疾病的病因，為臨床早期預(yù)防、診斷和治療提供了分子遺傳學的依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇87例2000～2003年開灤醫(yī)院產(chǎn)科妊娠期高血壓疾病的住院患者，妊娠期高血壓疾病診斷標準參照樂杰主編的《婦產(chǎn)科學》第6版[2]。妊娠期高血壓疾病患者87例，平均年齡（27±6.5）歲，連續(xù)測量非同日血壓3次，平均值為SBP≥140mmHg和/或DBP≥90mmHg，經(jīng)詢問病史和化驗檢查排除原發(fā)性高血壓、糖尿病、腎病患者。對照組為年齡相匹配的175名同期住院分娩者，經(jīng)檢查孕期（既往）無高血壓、冠心病、腦血管病、糖尿病、腎病等病史。

1.2 方法

1.2.1 DNA的提取 抽取外周靜脈血5mL，乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）抗凝，采用氯仿/異戊醇經(jīng)典方法提取DNA。

1.2.2 ACE基因檢測 PCR擴增參照文獻[3]設(shè)計引物（上海生工合成）。上游：5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'；下游：5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。ACE基因檢測方法見參考文獻[4]。PCR擴增產(chǎn)物出現(xiàn)490 bp片段長度者為II純合型，出現(xiàn)190 bp片段長度者為DD純合型，出現(xiàn)190、490 bp兩條片段長度者，為ID雜合型。

1.2.3 CYP11B2基因型檢測 PCR擴增參照文獻[5]設(shè)計引物序列（上海生工）。上游：5'-CAGGAGGAGACCCCATGTGAC-3'；下游：5'-CCTCCACCCTGTTCAGCCC-3'。CYP11B2基因檢測方法見參照文獻[6]。PCR擴增產(chǎn)物為537 bp，在這個片段中存在2個自然的酶切位點，經(jīng)HaeⅢ內(nèi)切酶消化后產(chǎn)生273、138、126 bp長度的片段，若擴增片段中存在T-344C堿基替換，則產(chǎn)生新的HaeⅢ酶切點（GGCC），片段273 bp經(jīng)HaeⅢ內(nèi)切酶消化后產(chǎn)生202 bp和71 bp長度的2個片段，所以TT基因型有273、138、126 bp共 3個片段，TC基因型有 5個片段：273、202、71、138、126 bp，CC 基因型有4個片段：202、71、138、126 bp。

1.2.4 統(tǒng)計學分析 所得結(jié)果用SPSS 11.5軟件分析，基因型及等位基因風險率以比數(shù)比（OR）及95%可信區(qū)間（95%CI）表示。

2 結(jié)果

2.1 妊娠期高血壓ACE基因I/D多態(tài)性

妊娠期高血壓疾病組中ACE基因 I/D的ID和DD基因型頻率高于正常對照組，分別為41.4%和28.7%；相對于II基因型，攜帶ID和DD基因型人群患妊娠期高血壓疾病的OR值分別為1.981（95%CI 1.081～3.631）和 2.347（95%CI 1.191～4.627）；根據(jù)分離分析方法計算等位基因頻率，D等位基因頻率也高于正常對照組，為49.42%；相對于I等位基因，攜帶D等位基因患妊娠期高血壓疾病的OR值為 1.737（95%CI 1.202～2.512）（表1）。

2.2 妊娠期高血壓CYP11B2基因-344T/C位點多態(tài)性

妊娠期高血壓疾病組CYP11B2基因-344T/C位點TC和CC基因型頻率高于正常對照組，分別為40.2%和17.2%；相對于TT基因型，攜帶TC和CC基因型人群患妊娠期高血壓疾病的OR值分別為1.577（95%CI 0.903～2.754）和6.081（95%CI 2.300～16.078）；根據(jù)分離分析方法計算等位基因頻率，C等位基因頻率也高于正常對照組，為37.4%；相對于T等位基因，C等位基因患妊娠期高血壓疾病的 OR 值為 2.114（95%CI 1.420～3.147）（表2）。

表1 妊娠期高血壓疾病組與正常對照組ACE基因I/D多態(tài)性基因型和等位基因分析

表2 妊娠期高血壓疾病組與正常對照組CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性基因型和等位基因分析

2.3 妊娠期高血壓ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性的聯(lián)合基因型頻率

為探討ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病發(fā)病的相互關(guān)系，以每個個體的ACE基因I/D多態(tài)性基因型和CYP11B2基因-344T/C位點變異的基因型構(gòu)成，進行聯(lián)合分析：相對于II-TT聯(lián)合基因型，同時攜帶TC-DD聯(lián)合基因型患妊娠期高血壓疾病的OR值為 6.019（95%CI 2.089～17.336）；CC-II、CC-ID、CC-DD聯(lián)合基因型由于樣本量小，不具有代表性，應(yīng)加大樣本量；其余聯(lián)合基因型，差異均無顯著性（P＞0.05）（表3）。

表3 妊娠期高血壓疾病組與對照組ACE基因I/D及CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性的聯(lián)合基因型分析

3 討論

妊娠期高血壓疾病的基本病理生理變化是全身小動脈痙攣，血管內(nèi)皮損傷，血管對血管緊張素Ⅱ敏感性增強，血管內(nèi)皮及其基底膜受損，凝血反應(yīng)被激活，血管活性物質(zhì)比例失調(diào)，最終使小血管痙攣，子宮胎盤缺血，導(dǎo)致妊娠期高血壓疾病的發(fā)生[7]。

ACE是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS） 的關(guān)鍵酶，ACE基因位于人染色體17q23上，ACE的作用產(chǎn)物-血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）是RAAS作用于效應(yīng)器的關(guān)鍵成分。ACE可將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換成具有強烈血管收縮活性的血管緊張素Ⅱ，血管緊張素Ⅱ作用于血管緊張素受體Ⅰ，促進腎上腺皮質(zhì)釋放醛固酮，醛固酮再通過控制鹽平衡和血管內(nèi)容量調(diào)節(jié)血壓。醛固酮合成酶是體內(nèi)合成醛固酮的最后一步生化反應(yīng)的催化酶，具有11-β羥化酶、18羥化酶和18氧化酶的活性，屬于線粒體細胞色素P450酶超家族。醛固酮合成酶（CYP11B2）基因是編碼醛固酮生物合成終末階段的關(guān)鍵基因，精確定位在8q24.3。CYP11B2基因轉(zhuǎn)錄調(diào)空區(qū)存在-344C/T單核苷酸等位基因多態(tài)性，這個位點恰好是類固醇生成轉(zhuǎn)錄因子-1的部位[8]。有研究表明，CYP11B2基因的變異可致醛固酮分泌失調(diào)[9]。醛固酮過度分泌使體內(nèi)水電解質(zhì)平衡失調(diào)，水鈉潴留，血容量增加，通過非基因快速作用，使血管平滑肌細胞通透性增高，水鈉儲留于細胞內(nèi)，鈉氫交換增加，細胞內(nèi)鈣及三磷酸肌醇濃度增高，從而使血管對加壓物質(zhì)反映增強，血管平滑肌張力增高[10～12]。

在妊娠期高血壓疾病組中，D等位基因頻率高于正常對照組，因此導(dǎo)致ACE水平升高，AngⅠ轉(zhuǎn)變成AngⅡ增加，以致出現(xiàn)血管痙攣、血壓升高，導(dǎo)致妊高征的病理變化[13]。本研究結(jié)果顯示，攜帶ID和DD基因型的人群，患妊娠期高血壓疾病的風險性分別增加了1.981倍和2.347倍；攜帶D等位基因的危險性增加了1.737倍，提示妊娠期高血壓疾病的遺傳傾向與ACE基因的D等位基因有關(guān)，D等位基因可能是妊娠期高血壓疾病遺傳標志之一。但亦有結(jié)論不同的報道[14]。

BENETOS 等[15]發(fā)現(xiàn)，醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344C基因型的白人，其臥位血漿醛固酮水平高于醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344T基因型白人，提示醛固酮合成酶（CYP11B2）基因-344等位基因可能與原發(fā)性高血壓發(fā)病有關(guān)。本研究結(jié)果表明，妊娠期高血壓疾病組中CYP11B2基因-344T/C位點的TC基因型頻率，高于正常對照組，患病風險（增加了1.577倍）雖有增高的趨勢，但并無統(tǒng)計學差異；攜帶CC基因型人群患病風險增加了6.081倍；攜帶C等位基因的危險性增加了2.114倍，表明具有-334C位點突變的個體可能是妊娠期高血壓疾病發(fā)生中的高危人群。

本研究對ACE基因I/D和CYP11B2基因-344T/C多態(tài)性進行聯(lián)合基因型分析，發(fā)現(xiàn)相對于II-TT聯(lián)合基因型，同時攜帶DD-TC聯(lián)合基因型的個體患妊娠期高血壓疾病的危險性增加了6.019倍。上述結(jié)果提示，ACE基因缺失及CYP11B2基因點突變的多態(tài)性可能共同對妊娠期高血壓疾病的發(fā)生、發(fā)展起作用。

總之，妊娠期高血壓疾病的發(fā)病機理是極其復(fù)雜的，它可能是一種多基因決定和受多種因素影響的疾病。隨著分子遺傳學研究的不斷深入，ACE基因和CYP11B2基因在妊娠期高血壓疾病中的確切發(fā)病機制將進一步被闡明。

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