張 愷, 薛 娜, 李 林, 李 凡, 杜玉民＊

(1.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,河北石家莊050017;2.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河北石家莊050026)

高效液相色譜手性固定相法拆分阿折地平對映體

張 愷1, 薛 娜2, 李 林1, 李 凡1, 杜玉民1＊

(1.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,河北石家莊050017;2.河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院,河北石家莊050026)

建立了阿折地平對映體的高效液相色譜拆分方法。采用Chiralpak AD-H(250mm×4.6mm,5.0μm,D aicel公司)手性色譜柱在正相條件下直接拆分阿折地平對映體,考察了固定相種類、流動相組成及柱溫等對阿折地平對映體分離的影響。確定了最佳的拆分條件:流動相為正己烷-異丙醇(90∶10,v/v),流速為0.8mL/m in,檢測波長為254nm;柱溫為20℃;在此條件下阿折地平對映體的分離度為3.3。該法簡單快速,重現(xiàn)性好。

高效液相色譜法;手性固定相;手性拆分;阿折地平

Abstract:A high performance liquid Chromatographic(HPLC)method was established for the enantiomeric separation of azelnidipine.Baseline chiral separation of azelnidipine was achieved under normal-phase Chromatographic mode using the Chiralpak AD-H chiral column(250mm×4.6mm,5.0μm,Daicel).The influences of the nature of chiral stationary phase,form of the mobile phase,and column temperature on the enantiomeric separation were studied.The optimized Chromatographic conditions were hexane-isopropyl alcohol(90∶10,v/v)as the mobile phase with a flow rate of0.8mL/m in and detection at the wavelength of254nm.The column temperature was set at20℃.The resolution of3.3for azelnidipine was achieved under the above Chromatographic conditions.The method is simple,rap id and with good rep roducibility.

Key words:high performance liquid Chromatography(HPLC);chiral stationary phase;chiral sp lit;azelnidipine

阿折地平(azelnidipine)是由日本三共制藥研發(fā),2003年上市的一種新型的長效鈣拮抗劑,結(jié)構(gòu)屬于1,4-二氫吡啶類化合物[1],可以選擇性阻滯L型鈣通道,適用于緩解心衰和高血壓等癥狀。由于其藥效作用迅速,副作用小,所以是一種非常具有開發(fā)前途的抗高血壓藥物[2]。

目前應(yīng)用于臨床的阿折地平為外消旋體[3],其分子結(jié)構(gòu)中1,4-二氫吡啶環(huán)的4位碳原子為一個手性中心(見圖1),具有R、S型兩個對映異構(gòu)體。據(jù)報道,阿折地平對映體中,R體具有活性,S體無活性[4],并且此類藥物中已有左旋氨氯地平作為氨氯地平的替代產(chǎn)品成功上市[5],因此,研究阿折地平的手性拆分方法對其安全用藥和新藥研發(fā)具有重要意義。Kiyoshi等[6]采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法測定了人血漿中的阿折地平對映體,該方法靈敏度高,適用于血漿樣品的分析。為了直接拆分阿折地平對映體,我們采用Chiralpak AD-H手性色譜柱,以正己烷-異丙醇(90∶10,v/v)為流動相,結(jié)果顯示該方法對阿折地平對映體的分離度良好,簡便、快速、實用性強。

圖1 阿折地平的結(jié)構(gòu)Fig.1 S tructu re of aze ln id ip ine

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

W aters高效液相色譜儀515泵和2487紫外檢測器(W aters公司,美國),浙江大學(xué)N2000色譜工作站。阿折地平對照品(消旋體,純度99.46%),河北醫(yī)科大學(xué)藥物化學(xué)實驗室提供;正己烷、異丙醇均為色譜純,購于迪馬公司。

1.2 阿折地平供試品溶液的配制

取阿折地平對照品適量,精密稱定,用流動相正己烷-異丙醇(90∶10,v/v)溶解并稀釋配制成0.1 m g/mL的溶液,過0.45μm微孔濾膜過濾。

1.3 色譜條件

Chiralpak AD-H手性固定相色譜柱(250mm×4.6mm,5.0μm,D aicel公司);流動相:正己烷-異丙醇(90∶10,v/v);流速:0.8mL/m in;檢測波長:254nm;柱溫:20℃;進樣量:20μL。

1.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

取供試品溶液,以直鏈淀粉氨基甲酸酯為填充劑,以正己烷-異丙醇(90∶10,v/v)為流動相,檢測波長為254nm,記錄色譜圖,計算2個對映體的分離度。

2 結(jié)果與討論

2.1 手性固定相的選擇

我們分別用Chiralcel OD-R和Chiralpak ADH手性色譜柱進行了試驗,采用Chiralcel OD-R手性色譜柱,以乙腈-水為流動相,無法使兩個對映體達到基線分離。采用Chiralpak AD-H手性色譜柱,通過選擇與優(yōu)化,最終確定流動相為正己烷-異丙醇(90∶10,v/v),阿折地平異構(gòu)體達到了良好分離。Chiralpak AD-H為直鏈淀粉氨基甲酸酯類手性固定相,直鏈淀粉是D-葡萄糖以α-1,4-糖苷鍵相連而形成的線形聚合物[7]。該類手性柱應(yīng)用廣泛,尤其適用于含酰胺基、芳香基、羰基、羥基和羧酸基等基團的手性化合物的拆分。

2.2 流動相組成對阿折地平對映體分離的影響

通常,在以二元混合溶劑體系為流動相的正相色譜分離模式中,隨著流動相中極性組分的不斷減少,對映體分離因子值逐漸增大,分離因子值與流動相組成關(guān)系曲線一般呈線性[8]。本實驗以正己烷-異丙醇為流動相,考察了正己烷-異丙醇的比例對對映體分離的影響,結(jié)果見表1?？梢钥闯?流動相中異丙醇的含量對阿折地平的保留時間影響較大;隨著異丙醇比例的增大,不但使流動相極性增強,而且它與固定相之間的氫鍵作用抑制了對映體與固定相之間的相互作用,從而使對映體的保留時間明顯縮短,分離度也隨之下降。另外,隨著異丙醇含量的增加,它與對映體分子競爭作用于固定相手性位點的強度也相應(yīng)增強,從而可能會導(dǎo)致對映體分離因子的降低。但本實驗中發(fā)現(xiàn)隨著異丙醇比例的減小,分離因子并非一直增大,而是出現(xiàn)了拐點,這說明在該正相色譜分離體系中,流動相中的極性組分異丙醇以一種較為特殊的方式競爭與手性固定相分子或溶質(zhì)對映體分子之間形成氫鍵。因此,我們綜合考慮分離時間和分離效果,選擇正己烷與異丙醇的最佳體積比為90∶10,在該流動相配比條件下對映體分離效果良好。

表1 異丙醇含量對分離的影響Table1 Effects of isopropy lalcohol con ten t on the enantiomeric separation

2.3 柱溫對分離的影響

溫度對高效液相色譜分離不同手性化合物的影響不盡相同。一般而言,對映體分離的Van’t Hoff曲線呈線性。低溫條件下,對映體與手性固定相形成的絡(luò)合物比高溫度時穩(wěn)定,有利于提高分離因子。柱溫升高,使得溶質(zhì)與固定相之間的結(jié)合能力減弱,保留時間變短,分離度變差。本實驗在上述色譜條件下,考察了柱溫在20～35℃范圍內(nèi)變化對手性分離的影響,結(jié)果見表2。由表2可以看出,隨著分離溫度的升高,保留因子減少,樣品保留時間減少,分離因子和分離度大體上也是相應(yīng)減少的,Van’t Hoff曲線基本呈線性,這說明阿折地平對映體在該手性固定相上的保留行為隨色譜分離溫度的變化而改變,手性分離過程受吸附反應(yīng)熱影響。因此20℃為最佳柱溫。

表2 柱溫對分離的影響Table2 Effects of columntem perature on the enantiomeric separation

2.4 重現(xiàn)性

在優(yōu)化的色譜條件下,連續(xù)進樣6次,阿折地平對映體出峰時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為0.23%和0.46%,峰面積的RSD分別為1.4%和1.9%。實驗結(jié)果表明,該方法簡單、快速、重現(xiàn)性好,可用于阿折地平對映體的手性分離。

2.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

典型的系統(tǒng)適應(yīng)性試驗色譜圖見圖2,阿折地平對映體的分離度為3.3。

圖2 阿折地平對映體的分離色譜圖Fig.2 Chromatogram of azelnidipineenan tiomers

3 結(jié)語

本文采用Chiralpak AD-H手性色譜柱,在正相色譜分離條件下成功地拆分了阿折地平對映體,分離度達3.3。方法方便快速,為阿折地平對映體的進一步研究提供了有效的分離手段。由于應(yīng)用化學(xué)方法還未拆分出阿折地平單一對映體,因此今后還需要更深入的研究,進一步考察對實際樣品分析檢測的可行性,證明本方法的實用性。

[1] Zhang K,Xue N,Du YM,et al.Chinese Journal of Pharm aceuticals(張愷,薛娜,杜玉民,等.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志),2008,39(3):163

[2] He Y H.World Clinic D rugs,2004,25(10):636

[3] Chen A H,Wu R,Tao X.Chinese Journal of New D rugs and Clinical Rem edies(陳愛華,鄔蓉,陶霞.中國新藥與臨床雜志),2006,25(12):946

[4] W ellington K,Scott L J.D rugs,2003,63(23):2613

[5] Huang Z Y.Chinese Journal ofNew D rugs and Clinical Remedies(黃仲義.中國新藥與臨床雜志),2008,27(3):236

[6] Kiyoshi K,Naozum i S,Yoko U,et al.J Chromatogr B,2007,852:389

[7] D ing L.Chromatographic Analysis for D rugs.Beijing:Peop le’s M edical Publishing House(丁黎.藥物色譜分析.北京:人民衛(wèi)生出版社),2008

[8] Tang Q,Chen X Y.Chinese Journal of Analytical Chemistry(唐琴,陳先勇.分析化學(xué)),2007,35(2):240

Enantiomeric separation of azelnidipine by high performance liquid chromatography with chiral stationary phase

ZHANG Kai1,XU E N a2,L I L in1,L I Fan1,DU Yum in1＊
(1.School of Pharmacy,Hebei Medical University,Shijiazhuang 050017,China;2.Heibei Chemical and Pharmaceutical College,Shijiazhuang 050026,China)

O658

A

1000-8713(2010)02-0215-03

＊通訊聯(lián)系人:杜玉民,教授,從事藥物合成研究.Tel:(0311)86265624,E-m ail:yum indu@yahoo.com.cn.

2009-07-08

DO I:10.3724/SP.J.1123.2010.00215