北京市朝陽(yáng)區(qū)藥品檢驗(yàn)所（100101） 許佳 岳福藝

中國(guó)藥品生物制品檢定所（100050） 孫磊

鋸葉棕片系鋸葉棕（沙巴棕）Serenoa repens（Bartram） Small成熟的干燥果實(shí)提取物制成的天然植物制劑，主治前列腺增生，β-谷甾醇是其有效成分之一。本試驗(yàn)在參考β-谷甾醇相關(guān)測(cè)定文獻(xiàn)[1～3]的基礎(chǔ)上，優(yōu)化建立了GC含量測(cè)定方法，為該制劑的質(zhì)控提供了參考。

1 儀器與試藥

Agilent7890A氣相色譜儀（FID檢測(cè)器），β-谷甾醇對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），甲醇、二氯甲烷、氫氧化鉀（分析純，北京化工廠），實(shí)驗(yàn)用水為Milli-Q系統(tǒng)制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 DB-5毛細(xì)管柱（30m×0.25mm×0.25μm）；程序升溫，初始溫度120℃保持2分鐘，以30℃·min-1速率升至300℃，保持12分鐘；分流比10：1；進(jìn)樣口溫度280℃；檢測(cè)器溫度300℃。β-谷甾醇的理論板數(shù)為70000，與相鄰成分分離度大于1.5。對(duì)照品、供試品及溶劑色譜圖見(jiàn)附圖。

附表 加樣回收率結(jié)果

2.2 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取β -谷甾醇對(duì)照品19.68mg，置10mL量瓶中，加二氯甲烷至刻度，搖勻。

2.3 供試品溶液 取供試品細(xì)粉2g置100ml圓底燒瓶中，精密稱(chēng)定，加入13%的甲醇制氫氧化鉀溶液20ml（13g 氫氧化鉀溶于20ml水中，加甲醇稀釋至100ml），回流2小時(shí)。放冷，將提取液轉(zhuǎn)移至150ml分液漏斗中，用水30ml洗滌圓底燒瓶，合并洗滌液。提取液用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液。用水洗滌乙醚液3次，每次30ml。乙醚液蒸干，殘?jiān)佣燃淄槿芙獠⑥D(zhuǎn)移至5ml量瓶中。

2.4 線性及范圍 精密量取對(duì)照品溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml分別置10ml量瓶中，加二氯甲烷至刻度，搖勻。精密量取上述溶液各1μl注入氣相色譜儀，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：y=471.2x-2.5，相關(guān)系數(shù)r=0.9996，線性范圍0.03936μg～0.3936μg。

2.5 精密度 照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液1份，連續(xù)進(jìn)樣6次，β-谷甾醇峰面積RSD為1.62%。

附圖 氣相色譜圖

2.6 穩(wěn)定性 照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液1份，在10h內(nèi)分別進(jìn)樣，β-谷甾醇峰面積RSD為2.83%。

2.7 重復(fù)性 照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份，測(cè)定，β-谷甾醇含量RSD為2.61%。

2.8 回收率 取供試品細(xì)粉1 g，精密稱(chēng)定，置100ml圓底燒瓶中，加入濃度為0.491mg·ml-1的β-谷甾醇對(duì)照品溶液1ml，揮干，后續(xù)照2.3項(xiàng)下方法操作，結(jié)果見(jiàn)附表。

2.9 供試品測(cè)定 按上法測(cè)定5批供試品，β-谷甾醇含量分別為0.035%、0.034%、0.039%、0.039%和0.038%。

3 討論

3.1 β-谷甾醇的常用含測(cè)方法有薄層掃描法、高效液相色譜法和氣相色譜法。其中，薄層掃描法準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性稍差；高效液相色譜法往往需要使用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器才有更好的靈敏度；本試驗(yàn)采用了較簡(jiǎn)便準(zhǔn)確的氣相色譜法。

此外，氣相色譜法測(cè)定β-谷甾醇多進(jìn)行衍生化，本試驗(yàn)結(jié)果表明，不衍生也有較好的靈敏度且方法簡(jiǎn)單、重現(xiàn)性良好。

3.2 由于β-谷甾醇在二氯甲烷溶解度好，故作為提取溶劑。前處理方法曾試驗(yàn)簡(jiǎn)單的超聲提取方法，但由于本品β-谷甾醇含量低且輔料干擾嚴(yán)重，導(dǎo)致無(wú)法準(zhǔn)確定量。因此，最終采用了堿液皂化再經(jīng)乙醚萃取、濃縮的前處理方法。