張志斌,張曉濱

(廣東光華化學(xué)廠有限公司,汕頭,515061)

凱氏定氮法測定 6-芐基氨基嘌呤的含量

張志斌,張曉濱

(廣東光華化學(xué)廠有限公司,汕頭,515061)

通過凱氏定氮法將 6-芐基氨基嘌呤中的氮轉(zhuǎn)變?yōu)榘?用硼酸溶液吸收,用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液滴定,測到 6-芐基氨基嘌呤的含量。用紫外分光光度法對凱氏定氮法測定樣品的可靠性進(jìn)行驗證。該法具有較高準(zhǔn)確度與精密度,適用性廣。

6-芐基氨基嘌呤;凱氏定氮法;紫外分光光度法

6-芐基氨基嘌呤是迄今為止人工合成細(xì)胞分裂素中較成功的一個,已廣泛用于組織培養(yǎng)中,在農(nóng)業(yè)和園藝上也有著廣闊的應(yīng)用前景[1-2]。目前對于 6-芐基氨基嘌呤含量的分析方法除了高效液相色譜法、還有已報道的紫外分光光度法[3]及電化學(xué)法,而對于一些不具有液相色譜儀、紫外分光光度計及示波極譜儀的實驗室,本文研究的用凱氏定氮法測定合成 6-芐基氨基嘌呤的含量是一個可行而低成本的方法。

1 實驗部分

1.1 儀器和試劑

1.1.1 儀器及裝置

1.1.1.1 美國熱電 Heliosα紫外可見分光光度計;

1.1.1.2 凱氏定氮裝置 (500mL凱氏定氮瓶、長 600mm冷凝管)。

1.2 試劑

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)樣品:標(biāo)識值 99.5%;

1.2.2 所用試劑均需分析純或指示劑以上;

1.2.3 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[c(HCl)=0.1mol/L]的配制及標(biāo)定參考GB/T 601-2002[5];

1.2.4 甲基紅 -亞甲基藍(lán)混合指示液 (臨用前配制) 稱取0.1g亞甲基藍(lán),溶于乙醇 (95%),用乙醇 (95%)稀釋至100mL(溶液 Ⅰ);另稱取0.1g甲基紅,溶于乙醇 (95%),用乙醇 (95%)稀釋至 100mL(溶液 Ⅱ)。取 50mL溶液 Ⅰ及100mL溶液Ⅱ,混勻。

1.3 測定方法 (參考 GB/T 608-1988) 精確0.15g樣品于 500mL凱氏定氮瓶中,加0.5g粉狀的硫酸銅,10g粉狀的硫酸鉀,沿瓶壁加入 20mL硫酸,并使瓶壁的粉末洗至瓶中,瓶口置于一個玻璃漏斗,然后將凱氏定氮瓶以 45°角斜置裝好,緩緩加熱,使溶液溫度保持在沸點以下。泡沫停止發(fā)生后,強熱使其沸騰,溶液由黑色逐漸轉(zhuǎn)為透明,再繼續(xù)加熱30min。冷卻,緩緩加入 200mL水,搖勻,冷卻,沿瓶壁慢慢加入 120mL氫氧化鈉溶液 (300g/L)流至瓶底,自成一液層,再加 2g鋅粒。裝好冷凝器開始蒸餾。輕輕搖動凱氏定氮瓶,使內(nèi)容物混合,加熱蒸出 2/3液體,用盛有 50mL硼酸溶液(20g/L)及 8滴甲基紅 -亞甲基藍(lán)混合指示液的500mL錐形瓶吸收,用水淋洗冷凝管,用鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液由綠色變?yōu)榛易仙?。同時做空白實驗。

6-芐基氨基嘌呤的質(zhì)量分?jǐn)?shù) w,數(shù)值以“%”表示,按下式計算:

式中:V--樣品試驗消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液用量的準(zhǔn)確數(shù)值,單位為毫升 (mL);V0--空白試驗消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液用量的準(zhǔn)確數(shù)值,單位為毫升(mL);c--鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液濃度的準(zhǔn)確數(shù)值,單位為摩爾每升(mol/L);M--6-芐基氨基嘌呤摩爾質(zhì)量的數(shù)值,單位為克每摩爾 (g/mol)[M(C12H11N5)=45.05];m--樣品質(zhì)量的準(zhǔn)確數(shù)值,單位為克 (g)。

2 結(jié)果和討論

2.1 實驗結(jié)果 按凱氏定氮法及已報道紫外吸收分光光度法[3]對同一批 6-芐基氨基嘌呤進(jìn)行測定。測定結(jié)果如表1。

表1 6-芐基氨基嘌呤含量測定比較

2.2 結(jié)果討論

2.2.1 實驗要點

2.2.1.1 本方法要求樣品應(yīng)是均勻的,應(yīng)預(yù)先研細(xì)混勻。

2.2.1.2 操作過程中,樣品放入凱氏定氮瓶內(nèi)時,不要沾附瓶頸上,萬一沾附可用少量水沖下,以免被檢樣消化不完全,結(jié)果偏低。

2.2.1.3 在消化過程中,需保持和緩的沸騰,以免樣液沾附壁上,在無硫酸存在的情況下,造成氮有損失。

2.2.2 可靠性、精密度 對紫外吸收分光光度法及凱氏定氮法的測定結(jié)果進(jìn)行 F檢驗,兩組測定值的標(biāo)準(zhǔn)偏差差異不顯著,再進(jìn)行 t檢驗,兩種方法測定值的平均值無顯著差異。說明凱氏定氮法測定 6-芐基氨基嘌呤的含量是可行。由以上檢驗數(shù)據(jù) ＞ ,R1＞R2,S1＞S2,說明用凱氏定氮法比用紫外吸收分光光度法測定精密度更高。

2.2.3 適用性 本方法所使用的試劑為普通化學(xué)試劑,在市面可容易買到,所使用裝置為實驗室普通玻璃儀器,在檢驗成本上遠(yuǎn)比液相色譜儀法、紫外分光光度計法及電化學(xué)法低,一般實驗室均可進(jìn)行,適用性更廣。

[1]Vasarhelyi E.Kozmoczky I,Daroczi I.High purity benzyladenine.HU37,937,1986

[2]王植材,林電偉,鄭其煌,林卓新.固 -液相轉(zhuǎn)移催化法合成細(xì)胞分裂素類化合物.中山大學(xué)學(xué)報 (自然科學(xué)學(xué)報),1994,33(4):53-59

O657.32

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1003-3467(2010)10-0056-01