李永格

旱黑口服液為旱蓮草與黑豆兩種中藥以一定比例配制而成。旱蓮草取全草人藥，具有養(yǎng)肝益腎，涼血止血的作用［1］。黑豆通腎經(jīng)，久服可填精髓，加氣力，明目，長(zhǎng)肌膚益顏色，變白不老［2］。我室曾報(bào)道旱黑口服液能夠防止衰老小鼠運(yùn)動(dòng)能力下降，學(xué)習(xí)記憶障礙等衰老體征［3］，其作用機(jī)制可能是通過提高衰老小鼠心、腦細(xì)胞膜上Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，延緩衰老［4］，但從行為學(xué)上驗(yàn)證旱黑口服液抗衰老的實(shí)驗(yàn)不多。本實(shí)驗(yàn)通過Morris水迷宮，觀察旱黑口服液對(duì)D-半乳糖致衰老大鼠行為學(xué)的影響。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 雄性，SD大鼠(150～250 g)，由本校動(dòng)物房提供。自由攝食和飲水，在實(shí)驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)3天后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。大鼠隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照組、模型組和旱黑口服液干預(yù)組。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 D-半乳糖為上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品(批號(hào):F20090711)。Morris水迷宮為一組電腦自動(dòng)攝像裝備系統(tǒng)(成都泰盟)

1.2.2 造模 每天上午給予模型組和干預(yù)組100 mg/kgD-半乳糖皮下注射，共42 d。正常對(duì)照組每天注射等量0.9%氯化鈉注射液。

1.2.3 治療 采用旱黑口服液灌胃治療。造模第20天開始給予干預(yù)組大鼠20 g//(L·kg·d)旱黑口服液灌胃。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.2.4.1 Morris水迷宮檢測(cè) 參照文獻(xiàn)［5］

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各組數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，并用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，組間差異用t檢驗(yàn)判定，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 定位航行試驗(yàn)結(jié)果 在定位航行實(shí)驗(yàn)中，3組大鼠尋找平臺(tái)的潛伏期均隨著訓(xùn)練進(jìn)程而顯著下降;模型組逃避潛伏期均長(zhǎng)于空白組(P＜0.01)，而旱黑口服液干預(yù)組逃避潛伏期均低于模型組(P＜0.05);旱黑口服液干預(yù)組逃避潛伏期均長(zhǎng)于空白組，兩者比較差異(P＞0.05)如圖1示。表明旱黑口服液能明顯縮短模型組逃避潛伏期，但不能恢復(fù)到空白組的水平。

圖1 3組大鼠在不同的訓(xùn)練時(shí)間逃避潛伏期比較

2.2 空間探索試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果顯示，模型組大鼠穿越平臺(tái)所在原象限的距離占總游泳距離的百分比為(23.56±3.54)%，明顯小于空白組大鼠(50.81±6.75)%和旱黑口服液干預(yù)組(40.86±6.75)%(P＜0.01)，有顯著差異。模型組大鼠穿越平臺(tái)所在原象限的時(shí)間占總游泳時(shí)間的百分比為(20.51±4.64)%，小于空白組大鼠的(26.31±4.56)%和旱黑口服液干預(yù)組的(23.16±5.65)%(P＞0.05)，無(wú)明顯差異。表明模型組大鼠記憶保持能力下降，通過旱黑口服液治療后，受損的記憶保持力得以恢復(fù)。

3 討論

衰老指機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育成熟后，機(jī)體的生理功能逐漸下降，組織器官逐步發(fā)生退行性改變。其中，神經(jīng)系統(tǒng)和大腦的變化尤為明顯，表現(xiàn)為學(xué)習(xí)和記憶能力下降。隨著學(xué)習(xí)記憶腦機(jī)制研究的不斷深入以及尋找有效防治認(rèn)知障礙類疾病方法的需要，客觀準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的學(xué)習(xí)記憶水平已經(jīng)成為非常重要的研究?jī)?nèi)容。Morris水迷宮被認(rèn)為是研究空間學(xué)習(xí)記憶的一種非常好的方法［6，7］，得到世界各國(guó)從事認(rèn)知領(lǐng)域科學(xué)家的推廣和應(yīng)用。經(jīng)典的Morris水迷宮所檢測(cè)的是大鼠在多次的訓(xùn)練中，學(xué)會(huì)尋找固定位置的隱蔽平臺(tái)，形成穩(wěn)定的空間位置認(rèn)知，這種空間認(rèn)知是加工空間信息(外部線索)形成的。平臺(tái)的位置與大鼠自身所處的位置和狀態(tài)無(wú)關(guān)，是一種以我為參照點(diǎn)的參考認(rèn)知，所形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種空間參考記憶進(jìn)入意識(shí)系統(tǒng)，其儲(chǔ)存的機(jī)制主要涉及邊緣系統(tǒng)(如海馬)以及大腦皮層有關(guān)腦區(qū)屬于陳述性記憶。而臨床衰老和癡呆的患者，正是陳述性記憶首先受損而且比較突出［8］。所以從檢測(cè)的記憶屬性來說，運(yùn)用Morris水迷宮來進(jìn)行防治此類疾病有效藥物的篩選研究是比較恰當(dāng)?shù)摹?/p>

本研究采用皮下注射D-半乳糖誘導(dǎo)大鼠衰老模型，Morris水迷宮觀察旱黑口服液對(duì)其空間學(xué)習(xí)記憶的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明所有大鼠在定位航行實(shí)驗(yàn)中逃逸潛伏期均隨訓(xùn)練次數(shù)增加而下降，但旱黑口服液組大鼠的平均逃逸潛伏期明顯短于模型組，提示其學(xué)習(xí)和記憶的獲得與鞏固過程提高;在空間探索實(shí)驗(yàn)中，旱黑口服液組大鼠在平臺(tái)象限探索時(shí)間百分比和距離百分比均明顯長(zhǎng)于對(duì)照組，提示旱黑口服液組大鼠對(duì)已存儲(chǔ)記憶的讀出或提取能力顯著上升?？傊ㄟ^Morris水迷宮檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)旱黑口服液具有明顯改善衰老大鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的功能，且此檢測(cè)方法是完全適合于這種衰老模型的研究。

［1］丁安偉.現(xiàn)代中藥臨床手冊(cè).南京:江蘇科學(xué)技術(shù)出版社，2000:365.

［2］明李時(shí)珍.本草綱目下冊(cè).人民衛(wèi)生出版社，1982，11:1500-1501.

［3］朱立志，丁玉琴，周玲生.旱黑口服液對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠運(yùn)動(dòng)能力的影響.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，41(2):369-371.

［4］丁玉琴，楊坦 旱黑口服液對(duì)衰老小鼠心、腦細(xì)胞膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性的影響.醫(yī)學(xué)信息.2005，18(10):1343-1345.

［5］徐穎，張志雄，等.電針對(duì)衰老模型大鼠學(xué)習(xí)記憶及海馬CA1區(qū)LTP的影響.中國(guó)老年學(xué)雜志.2008，8(28):1568-1570.

［6］Florian C，Roullet P.Hippocampal CA3 region is crucial for acquisition and memory consolidation in Morris water maze task in mice.Behav Brain Res，2004，154(2):365-374.

［7］Sargolini F，F(xiàn)lorian C，Oliverio A，et al.Differential involvement of NMDA and AMPA receptorswithin the nucleusaccumbens in consolidation of information necessary for place navigation and guidance strategy in mice.Learn Mem 2003，10:285-292.

［8］Squire L R，Zola-Morgan S.Memory，brain system and behavior.Trends in Neuroscience，1988，11:170.