呂 嶸,白衛(wèi)兵,王生奎

(云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,云南昆明 650201)

地塞米松屬于糖皮質(zhì)激素(glucocorticoids)的一種,糖皮質(zhì)激素既是正常機體內(nèi)重要的生理物質(zhì),又是臨床廣泛運用的免疫抑制劑[1],具有抗毒素、抗休克、抗感染、抗過敏等特性[2]。隨著近年來小動物臨床診療的迅速發(fā)展,糖皮質(zhì)類藥物已經(jīng)成為不可缺少的藥物,對疾病的治療起著重要的作用,但超生理劑量和長時間運用糖皮質(zhì)激素會對肝臟造成損傷。糖皮質(zhì)激素對肝臟的實際損傷程度目前國內(nèi)外研究還尚未明確。本研究給予健康日本大耳白兔不同劑量的地塞米松,通過制作肝臟組織切片,觀察肝臟組織結(jié)構(gòu)變化,探討不同劑量地塞米松長時間運用于機體對肝臟組織的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品與試劑 地塞米松注射液為天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司產(chǎn)品;冰醋酸為上海申博化工有限公司產(chǎn)品;濃鹽酸為廣東汕頭市西隴化工廠產(chǎn)品;甲醛、甘油為洛陽市化學(xué)試劑廠產(chǎn)品;二甲苯為四川華星科技有限責(zé)任公司產(chǎn)品;蘇木精為成都貝斯特試劑有限公司產(chǎn)品;伊紅為上海歐韋達儀器科技有限公司產(chǎn)品;無水乙醇為汕頭市達濠精細化學(xué)品有限公司產(chǎn)品。

1.1.2 實驗動物 25只健康日本大耳白兔,體重在2.0 kg左右,由昆明醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。試驗用兔進行適應(yīng)性飼養(yǎng),試驗期間飼喂兔全價飼料2次/d,每天自由飲水,飼養(yǎng)7 d后未出現(xiàn)異?，F(xiàn)象,健康狀況良好。

1.2 方法

1.2.1 分組設(shè)計 根據(jù)隨機分組的方法將試驗兔均分為 5組,即 A 、B 、C 、D、E 5組,每組 5只,稱其體重并進行編號。

1.2.2 給藥方法 按以下劑量皮下注射地塞米松,A組為基礎(chǔ)劑量組,每天0.5 mg/kg,B組為2倍劑量組,每天1.0 mg/kg,C組為 4倍劑量組,每天2.0 mg/kg,D組為10倍劑量組,每天5.0 mg/kg,E組為空白對照組,每天0.5 mg/kg皮下注射注射用水。

1.2.3 肝重比測定 于給藥21 d后,處死試驗兔,取出肝臟并進行稱重,測定肝重比。

1.2.4 病理切片的制作 將肝組織用4℃生理鹽水沖洗,在肝臟最大葉距邊緣5 mm處取小塊肝組織,用100 mL/L福爾馬林固定[3],洗滌、酒精梯度脫水[4]、透明、浸蠟 、包埋、切片 、帖片 、脫蠟復(fù)水、蘇木精-伊紅染色、封固,在光鏡下觀察肝組織的變化。

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 組間肝重比比較采用方差分析檢驗。

2 結(jié)果

2.1 不同劑量組兔肝重比比較

不同組肝重比見表1和圖1。

表1 試驗兔體重和肝重T able 1 The body weight and liver weight in test rabbits

圖1 不同劑量組兔肝重比變化Fig.1 The curve of the ratio of liver/body weight in different groups

由上圖可以看出,各劑量組的肝重比逐漸增大。統(tǒng)計分析顯示,B組與E組差異顯著(P＜0.05),C、D兩組分別與E組的差異極顯著(P＜0.01)。說明隨著劑量的增大,肝臟的腫大程度也越嚴重。

2.2 肝臟組織切片變化

2.2.1 對照組肝臟組織的變化 對照組肝細胞索排列整齊,圍繞中央靜脈呈放射狀排列,可見中央靜脈內(nèi)無紅細胞淤積,門管區(qū)內(nèi)可見小葉間動脈和小葉間靜脈。小葉間動脈、小葉間靜脈,管壁完整,無紅細胞淤積。中央靜脈內(nèi)皮完整,肝細胞排列整齊、緊密,細胞結(jié)構(gòu)完整,細胞核較大、呈圓形,可見深染的胞核和紅染的胞漿(圖2)。

2.2.2 基礎(chǔ)劑量組肝臟組織的變化 基礎(chǔ)劑量組肝臟組織切片可見中央靜脈、小葉間靜脈內(nèi)均無紅細胞淤積,肝細胞排列整齊呈索狀,細胞結(jié)構(gòu)完整,細胞核呈圓形,可見少量淋巴細胞和紅細胞。肝細胞核藍染,胞漿均勻(圖3)。

圖2 對照組肝臟組織病理切片(10×60)Fig.2 The histopathological section of liver tissues in control group(10×60)

圖3 基礎(chǔ)劑量組肝臟組織病理切片(10×60)Fig.3 The histopathological section of liver tissues in basic dose group(10×60)

2.2.3 2倍劑量組肝臟組織的變化 2倍劑量組肝臟組織切片可見中央靜脈,肝細胞排列緊密,大量紅細胞浸潤。細胞結(jié)構(gòu)完整,但部分出現(xiàn)輕度水腫,肝細胞外形不規(guī)則,細胞間紅細胞增多(圖4)。

2.2.4 4倍劑量組肝臟組織的變化 4倍劑量組肝臟組織切片可見小葉間靜脈有大量紅細胞淤積,肝細胞排列紊亂,細胞核消失或固縮,染色加深,肝細胞出現(xiàn)嚴重水腫,空泡樣變性,中央靜脈變形,有大量紅細胞浸潤,門管區(qū)小葉間膽管管壁增厚,肝臟組織損傷嚴重(圖5)。

圖4 2倍劑量組肝臟組織病理切片(10×60)Fig.4 The histopathological section of liver tissues in 2 times dose g roup(10×60)

圖5 4倍劑量組肝臟組織病理切片(10×60)Fig.5 The histopathological section of liver tissues in 4 times dose g roup(10×60)

2.2.5 10倍劑量組肝臟組織的變化 10倍劑量組肝臟組織切片可見中央靜脈有大量紅細胞淤積,肝細胞排列紊亂,肝細胞嚴重水腫,呈空泡樣變性,細胞結(jié)構(gòu)不完整,細胞核消失,小葉間靜脈有大量紅細胞淤積,細胞間大量紅細胞浸潤,肝臟組織損傷程度最為嚴重(圖6)。

圖6 10倍劑量組肝臟組織病理切片(10×60)Fig.6 T he histopathological section of liver tissues in 10 times dose group(10×60)

3 討論

糖皮質(zhì)藥物的滅活主要在肝臟,其對肝臟的作用包括促進肝內(nèi)糖異生、增加肝內(nèi)蛋白質(zhì)合成、抑制枯否細胞的吞噬作用等。在給予不同劑量地塞米松后,肝組織出現(xiàn)了不同程度的損傷,與很多因素有關(guān),可能包括體內(nèi)氧自由基。生理情況下,氧自由基(oxygen free radicals,OFR)不斷產(chǎn)生,也不斷清除,不產(chǎn)生細胞損傷。但在外源性藥物和毒物刺激下,肝臟代謝過程中產(chǎn)生過多的OFR,超過機體的清除能力,這樣過度激活的OFR可引起肝細胞膜,線粒體膜及溶酶體膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化,產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物(LPO)及過氧化產(chǎn)物(如 MDA等),進一步加重生物膜的損傷,最終導(dǎo)致肝細胞壞死。OFR及LPO可使多種疏基酶類的活性、SOD活性、Na+/K+-ATP酶活性下降,干擾細胞能量代謝,NADH、NADPH、細胞色素P450氧化,使線粒體呼吸功能受損。由此可見,體內(nèi)OFR的過度激活、脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的引發(fā)是肝細胞損傷重要原因之一。

地塞米松能刺激大鼠肝細胞11β-HSD1的活性[5],糖皮質(zhì)激素類藥物地塞米松能直接影響到肝臟中α-維生素E的水平[6]。維生素E在機體有著重要的抗氧化作用,因此糖皮質(zhì)激素主要與脂肪肝的形成密切相關(guān)。地塞米松能促進大鼠肝細胞膽汁分泌,導(dǎo)致肝細胞毛細膽管樣結(jié)構(gòu)擴張[6]。本試驗只是地塞米松對肝臟組織的變化進行了初步研究和探討,對于地塞米松所引起的肝損傷機制還有待于進一步的研究。

該肝臟組織切片為連續(xù)21 d皮下注射地塞米松后的組織切片,因此不能體現(xiàn)不同劑量在不同時間對肝臟組織的影響,有待于今后進一步的完善。

基礎(chǔ)劑量組肝細胞結(jié)構(gòu)較清晰,未出現(xiàn)變形與壞死,肝重比雖有所增加,但其變化差異不顯著,說明每天按0.5 mg/kg給兔皮下注射地塞米松,對肝臟組織的影響較小。

其他劑量組臟臟組織出現(xiàn)明顯的病變,肝重比變化差異顯著,隨著劑量的增加,肝臟組織病變越嚴重,4倍及10倍劑量組,臟臟組織出現(xiàn)了嚴重的損傷。

[1]馮淇輝.獸醫(yī)臨床藥理學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,1983.

[2]陳杖榴.獸醫(yī)藥理學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2002.

[3]黃宏奕,張 超.不同固定液及固定時間對小鼠肝組織結(jié)構(gòu)的影響[J].廣州醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2007,35(2):65-68.

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[5]Irene B.Effects of adrenocorticotropic hormone and dexamethasone on adrenal and hepatica-tocopherol concentrations[J].Free Radical Biol Med,1999,26(5):633-638.

[6]王貴民.地塞米松對單層培養(yǎng)的大鼠肝細胞分泌機能的影響[J].中華肝膽外科雜志,2003,9(8):495-498.