張 燕，周鐵梅，劉永江，張紅兵，翟曉茹，李永東

（中國輻射防護(hù)研究院 太原華衛(wèi)藥業(yè)有限公司，山西 太原 030006）

復(fù)方黃芪益氣口服液由黃芪、大棗、黨參、甘草等中藥制成，具有補(bǔ)脾益氣的功能。黃芪是君藥，其主要成分為黃芪甲苷，控制黃芪的質(zhì)量，即可控制本品的質(zhì)量。有關(guān)黃芪甲苷的分析方法有薄層-紫外分光光度法、薄層掃描法等，但大部分是測定生藥及其制劑中的黃芪甲苷，用于測定中藥口服液報道較少。復(fù)方黃芪益氣口服液為液體制劑，藥物吸收快，作用迅速，且易于分劑量，服用方便，用于氣血兩虛引起的體倦乏力，神疲，面白，心悸氣短，失眠健忘等癥。為了更好地控制成品的質(zhì)量，我們在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上，對復(fù)方黃芪益氣口服液中黃芪甲苷的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了詳細(xì)的研究，增加了高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器測定黃芪甲苷的含量，并進(jìn)行了方法學(xué)考查，現(xiàn)報道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

Agilent 1100型高效液相色譜儀，PL-ELS2100型蒸發(fā)光散射檢測儀（英國）。

1.2 藥品與試劑

黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號：110781-200512；規(guī)格：20 mg），復(fù)方黃芪益氣口服液樣品（太原華衛(wèi)藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號09112401；規(guī)格10 mL/支），實(shí)驗(yàn)中所用試劑水為注射用水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent 1100 可編程紫外檢測器（VWD）；HypersilODS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；10 μL 樣品定量環(huán)。 流動相為乙腈－水（32∶68），流速為1.0 mL/min，柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器檢測參數(shù)：霧化溫度70℃，氣化溫度50℃，流速1.2 mL/min。理論板數(shù)按黃芪甲苷峰計應(yīng)不低于3 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 取黃芪甲苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每毫升含1 mg的對照品溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液 精密量取本品10 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取 5 次（15 mL、15 mL、15 mL、10 mL、10 mL），合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，15 mL/次；棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5 mL使溶解，放冷；通過D101型大孔樹脂柱（內(nèi)徑1.5 cm，長 12 cm），以水 50 mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇30 mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇100 mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性（缺黃芪）對照溶液 取缺黃芪的陰性樣品約10 mL，精密稱定，按供試品溶液制備項(xiàng)下的方法操作，得陰性對照液。

2.3 專屬性考察實(shí)驗(yàn)

按上述儀器和實(shí)驗(yàn)條件，將供試品溶液、陰性對照溶液、黃芪甲苷對照品溶液分別注入液相色譜儀測定。結(jié)果供試品色譜圖中有與對照品相同的保留時間，且基線平穩(wěn)、分離度好，而陰性對照在此保留時間無色譜峰。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密吸取對照品溶液 （濃度為1.001 mg/mL）2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL，分別注入液相色譜儀，依照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積的自然對數(shù)值為縱坐標(biāo)，黃芪甲苷進(jìn)樣量的自然對數(shù)值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝2.484 0X＋9.147 3，r＝0.999 4。 結(jié)果表明， 黃芪甲苷在 2.002 μg～10.01 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

取09112401批號樣品，精密量取本品10 mL，照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，用同一份供試品溶液，精密吸取供試品溶液10 μL，按含量測定方法，連續(xù)進(jìn)樣6次，以黃芪甲苷的峰面積計算，結(jié)果RSD＝0.16%。表明本方法重復(fù)性較好。結(jié)果見表2。

表1 線性關(guān)系考察

表2 重復(fù)性試驗(yàn)

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密量取本品10 mL（批號：09112401），照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液 10 μL， 分別于 0 h，2 h，4 h，6 h，8 h 注入液相色譜儀中，分別測定黃芪甲苷的峰面積，結(jié)果RSD＝0.96%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的樣品（0.059 8 mg/mL）7份，精密量取5 mL，每份分別精密加入對照品溶液（含黃芪甲苷1.001 mg/mL）0.3 mL，照供試品溶液制備項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，照黃芪甲苷含量測定法分別測定黃芪甲苷的含量，并計算回收率，結(jié)果黃芪甲苷的平均回收率為99.2%，RSD為0.35%，表明本法具有良好的回收率。結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)

2.8 含量測定

分別精密吸取對照品溶液5 μL，10 μL和供試品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，照上述色譜條件測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計算含量，即得。結(jié)果見表5。

國家藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)WS-5620-（B-0620）-2002規(guī)定本品每毫升含黃芪甲苷（C41H68O14）不得少于0.020 mg，表中8批樣品黃芪甲苷的含量均高于0.020 mg/mL。

表5 復(fù)方黃芪益氣口服液中黃芪甲苷含量

3 討 論

目前，復(fù)方黃芪益氣口服液黃芪甲苷測定方法采用薄層掃描法，誤差較大，操作時間長。本實(shí)驗(yàn)采用蒸發(fā)光散射檢測儀（ELSD）作為檢測手段，利用HPLC法測定復(fù)方黃芪益氣口服液中黃芪甲苷的含量，實(shí)驗(yàn)操作簡便，精密度高，準(zhǔn)確度高，是控制黃芪甲苷含量一種較好的分析方法。