許莉，孟憲軍

（1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽110161；2.遼寧公安司法管理干部學(xué)院，遼寧沈陽110161）

桑葉提取工藝研究

許莉1，2，孟憲軍1

（1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽110161；2.遼寧公安司法管理干部學(xué)院，遼寧沈陽110161）

采用正交試驗(yàn)方法對中藥桑葉的提取工藝進(jìn)行研究，并以出膏率及蘆丁含量為考察指標(biāo)，優(yōu)選出最佳提取工藝，結(jié)果為：加入12倍量的水，提取3次,每次提取1 h，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏，靜置過夜。加入95%乙醇使醇濃度達(dá)到50%，溫度為20℃，靜置12 h后取上清液，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量，水浴上加熱濃縮，減壓干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。

桑葉；正交試驗(yàn)；蘆??；提取工藝

Abstract:This article was to study the extraction process of the traditional Chinese medicine mulberry leaves by orthogonal experimental method,And in percentage of the extract and the content Rutin as the indexes,select the best technology,the result was：adding 12 times the amount of water,extracted three times,each time extracting 1 hour,combined water extract,filter,the filtrate concentrated under vacuum to clear cream,standing overnight.Then added 95%ethanol to 50%ethanol content in the mixture,the temperature was 20℃,standing for 12 hours after taking the cream,the filtrate recovered ethanol decompression and concentrated to appropriate,continue to water bath concentration,vacuum drying(60℃,0.03 MPa),made form dried extract,crush,that was.

Key words：mulberry leaves;orthogonal experiment;rutin;extraction process

桑葉，又名“鐵扇子”，為《中國藥典2010年版》（一部）收載品種，是桑科桑屬植物桑Morus alba L.的葉，也是國家頒布的藥食兩用品種之一。桑葉中含有多種有效成分，主要有黃銅類、生物堿類、多糖類，以及揮發(fā)油、甾類、氨基酸、維生素和微量元素等[1]。桑葉具有很好的營養(yǎng)價(jià)值和藥用價(jià)值。歷代本草文獻(xiàn)中，都有相關(guān)記載。桑葉可以治療風(fēng)熱感冒、肺熱咳嗽、目赤腫痛[2]?，F(xiàn)代研究桑葉具有降血糖、降血壓、降血脂、提高免疫力、抗氧化、抗炎、抗衰老等多種藥理作用，在醫(yī)藥和食品中都有廣泛應(yīng)用[3]。桑葉中的總黃酮類化合物含量占桑葉干重的1.0%～3.0%，屬于植物莖葉中黃酮類化合物含量較高，而黃酮類成分主要有蕓香苷（蘆?。┑龋哂薪笛堑茸饔肹4]。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀、Agilent色譜工作站：美國安捷倫公司；SPD-10A紫外檢測器、LC-10ATVP輸液泵：日本島津公司；UV-3010型紫外可見分光光度計(jì)：日本日立公司；AR2140電子分析天平：上海奧豪斯公司；AS3120A超聲波清洗器（天津）；METTLER AB135-S十萬分之一電子天平：瑞士梅特勒公司。

1.2 試藥

蘆丁對照品（批號：0080-9504），購于中國藥品生物制品檢定所。本試驗(yàn)所用桑葉藥材分別購自沈陽、浙江、重慶、山東、河南、鞍山等地，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李峰教授鑒定均為桑葉（Morus alba.L）藥材。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材前處理

桑葉以原藥材投藥。

2.2 提取工藝路線的設(shè)計(jì)

水作為溶劑，價(jià)廉易得，故本工藝以水為提取溶劑，對水提取工藝進(jìn)行了加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)的考察。為除去雜質(zhì)以減少服用量以及降低成本，故本工藝在水提取工藝的基礎(chǔ)上還采用了醇沉工藝，對醇沉工藝進(jìn)行了醇沉濃度、醇沉溫度、靜置時(shí)間的考察。

2.3 提取工藝條件的選擇

2.3.1 水提取工藝條件的選擇

以水為提取溶劑，選擇加水量、提取次數(shù)、提取時(shí)間定為三因素，選用正交表L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)考察，因素水平表見表1。

表1 因素水平表Table 1 Factor level table

2.3.1.1 考察指標(biāo)的確定

以出膏率和蘆丁含量為考察指標(biāo)確定最佳水提取工藝條件。

1）出膏率的測定

稱取9份桑葉藥材，每份100 g，按正交方案加水提取，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜。精密吸取上清液50mL至蒸發(fā)皿中，水浴鍋加熱濃縮，減壓干燥（60℃,0.03 MPa）制成干膏，精密稱定，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表2、3。

2）蘆丁含量測定

精密吸取正交試驗(yàn)下桑葉水提液的上清液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，過濾即得，采用高效液相色譜法測定溶液中蘆丁的含量，結(jié)果見表2、3。

直觀分析和方差分析結(jié)果表明：提取次數(shù)對結(jié)果影響顯著，加水量和提取時(shí)間對結(jié)果影響均不顯著，并結(jié)合實(shí)際情況，最佳水提取條件為A2B3C1，即加水12倍量，提取3次,每次提取1 h。

表2 L9（34）水提取工藝條件正交試驗(yàn)表Table 2L9（34）orthogonal extraction conditions of the water table

表3 方差分析表Table 3 ANOVA table

2.3.1.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取3份桑葉藥材，每份100 g，分別加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜。測定出膏率及蘆丁含量，結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Table 4 The verification test results

結(jié)果表明，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果達(dá)到預(yù)測結(jié)果要求。

因此確定中藥桑葉的最佳水提取工藝為加水12倍量，提取3次,每次提取1 h。

2.3.2 醇沉工藝條件的選擇

本試驗(yàn)選擇醇做為溶劑，選擇醇沉濃度、醇沉溫度、靜置時(shí)間為三因素，選用正交表L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)考察，因素水平見表5。

2.3.2.1 考察指標(biāo)的確定

以出膏率和蘆丁含量為考察指標(biāo)確定最佳醇沉工藝條件。

1）出膏率的測定

表5 醇沉因素水平表Table 5 Alcohol precipitation factor level table

稱取9份桑葉藥材，每份100 g，按水提取正交方案進(jìn)行提取，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜，吸取上清液100 mL，按正交表進(jìn)行醇沉試驗(yàn)，得醇沉液，抽濾，濾液置250 mL量瓶中定容。精密吸取醇沉液50 mL置蒸發(fā)皿中，水浴鍋加熱濃縮，減壓干燥（60℃,0.03 MPa）制成干膏，精密稱定，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表6、7。

2）蘆丁含量測定

精密吸取正交實(shí)驗(yàn)下桑葉醇沉液的上清液2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇定容，搖勻，過濾即得，采用高效液相色譜法測定溶液中蘆丁的含量，結(jié)果見表6、7。

表6 醇沉條件考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 6 Conditions for alcohol precipitation of investigation experiment results

表7 方差分析表Table 7 ANOVA table

直觀分析和方差分析結(jié)果表明：3個考察因素對結(jié)果影響均不顯著，并結(jié)合實(shí)際情況，最佳醇沉工藝條件為A1B1C1，即醇沉濃度為50%，溫度為20℃，靜置時(shí)間為12 h。

2.3.2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取3份桑葉藥材，每份100 g，分別加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜。加入95%乙醇使醇沉濃度達(dá)到50%，在20℃下，靜置12 h，分別測定出膏率及蘆丁含量，結(jié)果見表8。

表8 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Table 8 The verification test results

結(jié)果表明，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果達(dá)到預(yù)測結(jié)果要求。

因此確定中藥桑葉的最佳醇沉工藝為醇沉濃度50%，溫度為20℃，靜置時(shí)間為12 h。

2.4 10批不同商品地桑葉藥材的提取

稱取10批不同商品地桑葉藥材各30 g，分別加水12倍量，提取3次，每次提取1 h，合并水提液，濾過（相對密度為1.1），濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜。加入95%乙醇使醇沉濃度達(dá)到50%，在20℃下，靜置12 h后取上清液，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量，水浴鍋上加熱濃縮，減壓干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。10種不同商品地桑葉藥材提取物的量，見表9。

表9 10批不同商品地桑葉藥材的出膏率Table 9 10 different groups of goods in percentage of the extract of Mulberry leaves

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用了水提醇沉的方法，通過對出膏率和蘆丁含量的考察確定了最佳提取工藝，即加水12倍量，提取3次,每次提取1 h，合并水提液，濾過，濾液減壓濃縮成清膏（置250 mL量瓶中定容），靜置過夜。再加入95%乙醇使醇沉濃度達(dá)到50%，溫度為20℃，靜置時(shí)間12 h后取上清液，濾液減壓回收乙醇并濃縮至適量，水浴上加熱濃縮，減壓干燥（60℃，0.03 MPa），制成干膏，粉碎，即得。

[1]歐陽臻，陳鈞.桑葉的化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,24(6)：39-44

[2]國家藥典委員會.中國藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2010：279

[3]楊超英,董海麗,縱偉[J].食品研究與開發(fā),2003,24(2)：8-11

[4]毛紅騫,高紅林.桑葉的主要成分、功能及其在食品中的應(yīng)用[J].江蘇調(diào)味副食品,2009,01(26)：30-33,36

[5]劉利，潘一樂.春秋桑葉總黃酮含量分析及提取工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué) ,2009,30(4)：72-75

[6]陳建明，陳建真.桑葉黃酮超聲提取工藝的研究[J].中國中醫(yī)藥科技,2009,16(1)：42-43

[7]張軍，穆莉，檀華蓉,等.桑葉中黃酮化合物的提取工藝及不同品種不同時(shí)期的含量變化[J].蠶業(yè)科學(xué),2006,32(1)：142-145

[8]高中松，丁文，高亮.超聲波提取桑葉中總黃酮的工藝研究[J].中國農(nóng)學(xué)通報(bào),2006，04(22)：116-119

[9]王麗鵑，高鵬，李艷麗.桑葉總黃酮超聲提取工藝研究[J].黑龍江醫(yī)藥,2008,04(21)：54-56

[10]陳月紅，王建平，蔣海強(qiáng).正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化桑葉總黃酮類提取工藝[J].食品與藥品,2008,03(10)：17-20

[11]楊虎，馬燮，陳虹,等.桑葉中黃酮類化合物的提取工藝研究[J].應(yīng)用化工,2008,37(5)：520-522

[12]黃俊盛,任乃林,鄭楚珊,等.桑葉中總黃酮類化合物提取工藝的研究[J].江西化工,2005(2)：82-84

[13]王向陽，周蓉，施青紅,等.蘆丁加工穩(wěn)定性和桑葉中蘆丁提取工藝的研究[J].食品科技,2009,34(2)：199-202

Extraction Process of Mulberry Leaves Research

XU Li1，2，MENG Xian-jun1
（1.College of Food Science，Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161,Liaoning,China;2.Liaoning Administration College of Police and Justice，Shenyang 110161,Liaoning,China）

2010-05-20

許莉（1966—），女（漢），副高級工程師，在職碩士研究生，從事教學(xué)和中藥保健食品研究與開發(fā)。

*通信作者：孟憲軍（1960—），男（漢），教授，博士生導(dǎo)師，博士，主要從事果蔬加工方面的研究。