郭君 羅躍中

（湖南化工職業(yè)技術學院實訓處，株洲412004）

三七中總黃酮提取工藝研究

郭君*羅躍中

（湖南化工職業(yè)技術學院實訓處，株洲412004）

對三七中總黃酮的含量和提取工藝進行了研究，通過單因素試驗和正交試驗確定乙醇提取最佳工藝條件是：乙醇體積分數(shù)70%、料液比1 g∶25 mL、提取溫度為70℃、提取時間為90 min，提取2次，在最佳條件下三七中總黃酮提取率可達4.20%。

三七；總黃酮；提取工藝

AbstractThe extraction technology and content of flavonoids from Panax pseudo-ginseng，Single factor and orthogonal tests to determine the optimum ethanol extraction conditions are:ethanol concentration70%，material tosolvent 1∶20，extraction temperature70℃，extraction time 90 min，Extract 2 times，Under optimal conditions the extraction rate on Panax pseudo-ginseng in up to4.20%.

Keywordspanax pseudo-ginseng；flavonoids；extraction

三七又稱田七、人參三七,為五加科人參屬植物。三七粉是植物三七的根莖制品，是我國傳統(tǒng)的珍貴藥材，具有活血、止痛、止血、祛瘀、消腫等功效，含有多種藥理活性功能，研究表明主要成分是皂苷類、生物堿及揮發(fā)油等。魏均嫻等從三七中分離到黃酮成分?，F(xiàn)代醫(yī)學表明，黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量、抗心律不齊、防治心腦血管疾病、防治糖尿病、抗菌、抗病毒、軟化血管、降血糖和血脂等功能。目前國內(nèi)外主要是對三七中皂苷的研究比較多，而對其中主要活性物質(zhì)黃酮類化合物的提取研究鮮有報道。本文通過乙醇回流提取，采用亞硝酸鈉-硝酸鋁分光光度法測定三七中總黃酮的含量。通過單因子和正交試驗對三七中總黃酮提取條件研究，旨在探索一種快速簡便、高效的提取工藝。

1 材料與方法

1.1 材料

三七（粉）取自云南文山。

1.2 儀器及試劑

主要儀器：紫外分光光度計（UV2550型,日本島津公司）；7220型分光光度計；醫(yī)用數(shù)控超聲波清洗器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；離心機（0～4000 r/min）；恒溫干燥箱；梅特勒分析天平（萬分之一）。主要試劑：蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所)；無水乙醇（分析純）；硝酸鋁（分析純）；亞硝酸鈉（分析純）；氫氧化鈉（分析純）等。

1.3 三七總黃酮含量的測定

1.3.1 測定波長的選擇

取標準樣和未知樣各1 mL，各加入1 mL質(zhì)量分數(shù)5%NaNO2和1 mL質(zhì)量分數(shù)10%Al（NO3）3，使其形成絡合物，在堿性條件下于200 nm～700 nm波長范圍內(nèi)掃描，測其最適波長，得到標準樣的最大吸收波長為510 nm，求知樣品的最大吸收波長為509.7 nm，考慮到波長范圍相差不大，因此確定本次研究的最大吸收波長為510 nm（見下頁圖1）。

1.3.2 標準曲線的繪制

準確稱取于100℃下干燥至恒重的蘆丁標準品10.5 mg，用體積分數(shù)50%乙醇溶解并定容至50 mL，得到質(zhì)量濃度為0.2 1mg/ml的蘆丁標準溶液。

準確吸取上述標準溶液0.0、1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL于25 mL的容量瓶中，加入1.0 mL質(zhì)量分數(shù)5%的NaNO2溶液，搖勻靜置5 mim后，再加入1.0 mL質(zhì)量分數(shù)10%Al（NO3）3溶液，搖勻，放置5 min后加入10 mL質(zhì)量分數(shù)4% NaOH溶液，再用體積分數(shù)30%乙醇定容。然后以體積分數(shù)50%乙醇作空白對照，在波長為510 nm下測定每個標準樣的吸光度。再以吸光度值為縱坐標，以標準樣品質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線（見圖2）。得到回歸方程D（λ）=0.4833ρ-0.0001，r=0.9997。

圖1 蘆丁標準溶液最大吸收波長掃描

圖2 蘆丁標準曲線圖

1.3.3 樣品的處理

將三七粉置于恒溫箱中90℃干燥1 h，放于干燥器中備用。

1.3.4 三七粉中總黃酮的提取及測定

準確稱取三七粉樣品1.00 g于燒瓶中，加入20 mL體積分數(shù)50%乙醇，60℃下浸提2 h，提取2次。將兩次提取液混合后濃縮定容至50 mL，再從中準確移取10 mL樣品液于50 mL容量瓶中備用。準確移取1 mL于25 mL容量瓶中，以下按照測定蘆丁標準溶液吸光度的方法測定未知樣的吸光度，并計算提取率。

提取率（%）=（黃酮類化合物質(zhì)量/干三七粉質(zhì)量）×100%

2 結果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

有機化合物有相似相溶的特性，不同的黃酮化合物極性不一，因此選擇一種極性與其最為相似的溶劑提取能取得較好的提取效果。分別稱取三七樣品1.00 g，分別用水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙脂，按1.3.4操作提取測定。發(fā)現(xiàn)乙醇得率最高,甲醇次之。乙醇的溶解性能比較好，對中草藥細胞的穿透能力較強，且毒性小，價格相對便宜，來源方便，可回收反復使用。甲醇的提取率與乙醇的相對接近，但有毒性。因此考慮到試驗的安全性，本研究選用乙醇水溶液為提取溶劑。結果見圖3。

圖3 不同提取劑對提取率的影響

2.2 單因素實驗與分析

實驗過程中發(fā)現(xiàn)，三七粉在乙醇中浸泡時間超過1 h，再延長浸泡時間則對總黃酮提取率沒有很大的影響。因此本實驗主要研究乙醇體積分數(shù)、料液比、提取溫度、提取時間對三七中總黃酮提取影響。

2.2.1 乙醇體積分數(shù)對黃酮提取率的影響

準確稱取三七粉樣品1.00 g于蒸餾燒瓶中，分別加入20 mL（體積分數(shù)30%、40%、50%、60%、70%、80%），浸泡1h。然后按1.3.4測定總黃酮的提取率，選取最佳的乙醇體積分數(shù)。詳見圖4。實驗結果表明：在乙醇體積分數(shù)為70%時的提取率顯著高于其他的提取率。故選取體積分數(shù)70%的乙醇作為提取劑。

圖4 乙醇對提取率影響

2.2.2 料液比對總黃酮提取率的影響

準確稱取三七粉樣品1.00 g于蒸餾燒瓶中，用體積分數(shù)70%乙醇分別按料液比（1 g∶10 mL、1 g∶15 mL、1 g∶20 mL、1 g∶25 mL、1g∶30 mL、1 g∶35 mL）浸泡1 h。然后按1.3.4測定總黃酮的提取率，選取最佳的料液比。實驗結果表明黃酮提取率隨著料液比的增加而變大，但從1 g∶20 mL以后增加緩慢，考慮提取成本，故選擇料液比1 g∶25 mL。詳見圖5。

圖5 不同料液比對提取率的影響

2.2.3 提取溫度的選擇

在乙醇體積分數(shù)為70%，料液比為1 g∶25 mL，提取時間為2 h的條件下，提取溫度的影響如圖6所示。由圖6可知:提取率在60℃最高。原因可能是在溫度過高的情況下，可溶性蛋白質(zhì)溶出變性,溶液黏度增大，影響細胞的破裂，而阻礙了黃酮類物質(zhì)的溶出，從而降低了黃酮類物質(zhì)的提取率。

2.2.4 提取時間對黃酮提取率的影響

在提取溫度為60℃，乙醇體積分數(shù)為70%，料液比為1 g∶25 mL的條件下，提取時間的影響如圖7所示。結果表明：隨著時間的延長提取率顯著提高，到90 min達到最高，而后有所降低，這可能是由于提取時間過長，致使三七粉中某此黃酮類成分有所損失。故本試驗選擇提取時間為90 min。

圖6 不同提取溫度對提取率的影響

圖7 不同提取時間對提取率的影響

2.3 正交實驗結果與分析

根據(jù)以上單因素試驗結果，采用L9（34）正交試驗表，分別以超聲乙醇體積分數(shù)、液料比、提取溫度及提取時間作為試驗因素，各設置3水平試驗，以確定三七粉中總黃酮類物質(zhì)的最佳提取條件。實驗結果見表1和表2。由表2的極差分析可知，以A乙醇濃度對總黃酮的提取率影響最大，其影響大小依次為A＞C＞B＞D，四種因素的最佳組合為，乙醇提取濃度70%、料液比1∶25、提取溫度為70℃、提取時間為90 min。正交試驗方案及結果具體見表1和表2所示。

表1 L9(34)正交試驗因素水平設計表

3 結論

通過單因素試驗和正交試驗，確定三七粉中總黃酮最佳提取工藝條件為：乙醇體積分數(shù)70%、料液比1g∶25mL、提取溫度為70℃、提取時間為90min，提取2次，三七粉中總黃酮提取率可達4.20%。

表2 正交試驗結果與分析

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Study on extraction technology offlavonoids from panax pseudo-ginseng

GUOJun*LUOYue-zhong
（Pracical trainingdepartment，Hunan college ofchemical technology，Zhuzhou 412004，China）

*郭君，女，1983年出生，中南大學在職研究生，制藥工程專業(yè)，助教。

2010-05-04