賀萬(wàn)香 曾賓 胡曉燕

重組人促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素對(duì)新生鼠壞死性結(jié)腸炎保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

賀萬(wàn)香 曾賓 胡曉燕

目的探討重組人促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素對(duì)新生鼠壞死性結(jié)腸炎的保護(hù)作用。方法將80只Sprague-Dawley新生大鼠隨機(jī)分成2組，觀察組和對(duì)照組，均應(yīng)用三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)建立新生素壞死性結(jié)腸炎模型。觀察組于疾病急性期腹腔皮下注射重組人促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素，觀察新生大鼠的一般情況、死亡情況及組織學(xué)改變。結(jié)果造模后第3周末，所有大鼠均未見(jiàn)腹瀉癥狀，觀察組所有存活大鼠體重均恢復(fù)至造模前水平，對(duì)照組存活大鼠體重相對(duì)于造模前均有所下降。觀察組死亡27只，死亡率為67.5%;對(duì)照組死亡35只，死亡率為87.5%。兩組死亡率比較，觀察組明顯比對(duì)照組低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。觀察組死亡大鼠病變結(jié)腸組織學(xué)改變較對(duì)照組相對(duì)減輕。結(jié)論重組人促紅細(xì)胞生成素的應(yīng)用減輕了大鼠結(jié)腸病變，對(duì)其有一定的保護(hù)作用。

重組人促紅細(xì)胞生成素;壞死性結(jié)腸炎;TNBS

壞死性結(jié)腸炎屬于新生兒時(shí)期較為嚴(yán)重的胃腸道疾病之一，在新生兒尤其是早產(chǎn)兒中發(fā)病率相對(duì)較高，是其早期死亡的主要原因之一［1］。重組人促紅細(xì)胞生成素屬于基因重組技術(shù)合成的糖基化蛋白，在紅細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中起重要的調(diào)節(jié)作用。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，促紅細(xì)胞生成素可能為一種新的神經(jīng)遞質(zhì)，具有神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)作用，而且具有一定的促進(jìn)血管生成作用［2］，因而本課題通過(guò)將重組人促紅細(xì)胞生成素應(yīng)用于建立壞死性結(jié)腸炎模型的新生大鼠，旨在探討重組人促紅細(xì)胞生成素是否對(duì)新生大鼠壞死性結(jié)腸炎有保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)研究如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑 選取Sprague-Dawley大鼠80只，雌雄各半，未感染過(guò)特殊病原體，出生1～2 d。TNBS采購(gòu)自美國(guó)的Sigma公司。重組人促紅細(xì)胞生成素購(gòu)于成都地奧制藥有限公司。

1.2 動(dòng)物分組、造模 將新生大鼠稱重后隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，每組40只。所有大鼠均應(yīng)用TNBS誘導(dǎo)結(jié)腸炎模型。新生大鼠灌腸前，禁食24 h，水不禁。采用乙醚麻醉后，于大鼠肛門處插入一直徑為2 mm的導(dǎo)尿管，插入深度為8 cm，經(jīng)導(dǎo)尿管將TNBS 80 mg/kg的50%乙醇溶液推入大鼠結(jié)腸。推入時(shí)速度要緩慢，以便注入液能在腸內(nèi)逐漸彌散、分布均勻。注入完成后將大鼠倒置30 s?？紤]到造模后第1～3周為結(jié)腸炎急性期［3］，本組研究觀察結(jié)束點(diǎn)選擇為造模后3周。觀察組于造模后第一天開(kāi)始按照大鼠每克體重給予腹腔皮下注射重組人促紅細(xì)胞生成素0.5 ml，2次/d。連續(xù)觀察新生小鼠的一般情況和死亡情況。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)和方法 實(shí)驗(yàn)中每天觀察新生小鼠的進(jìn)食情況;飲水、排便情況;行為活動(dòng)、體重變化情況。詳細(xì)記錄新生大鼠死亡情況并對(duì)其實(shí)施尸體解剖，取出結(jié)腸病變部位，制作結(jié)腸標(biāo)本，HE染色下觀察結(jié)腸的組織學(xué)改變。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法 所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)采用SPSS 13.0進(jìn)行分析處理，P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般情況比較 觀察組與對(duì)照組均于造模后第一天開(kāi)始，出現(xiàn)了不同程度的腹瀉，以黃色稀便為主，肉眼未見(jiàn)血便。肝門周圍毛皮糞便污染嚴(yán)重。大鼠精神狀態(tài)較倦怠，活動(dòng)量和進(jìn)食均較少，體重下降。觀察組自造模后第2周末開(kāi)始腹瀉減少，大鼠進(jìn)食相對(duì)增多，體重也逐漸有所增加。造模后第3周末，所有大鼠均未見(jiàn)腹瀉癥狀，觀察組所有存活大鼠體重均恢復(fù)至造模前水平，對(duì)照組存活大鼠體重相對(duì)于造模前均有所下降。

2.2 死亡率比較 造模后第3周末，觀察組死亡27只，死亡率為67.5%;對(duì)照組死亡35只，死亡率為87.5%。兩組死亡率比較，觀察組明顯比對(duì)照組低，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組死亡情況如表1所示。

表1 兩組死亡情況(例，%)

2.3 死亡大鼠病變結(jié)腸組織學(xué)改變 對(duì)照組死亡大鼠結(jié)腸黏膜上皮有較大缺損、脫落，炎癥細(xì)胞主要為中性粒細(xì)胞，伴嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，多數(shù)炎癥累及結(jié)腸壁全層，可見(jiàn)典型潰瘍形成。觀察組結(jié)腸黏膜上皮缺損、脫落相對(duì)對(duì)照組減輕，黏膜充血減輕，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度相對(duì)較輕，以淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)為主;炎癥累及全層者少見(jiàn)，以累及黏膜及黏膜下層較多見(jiàn)。

3 討論

促紅細(xì)胞生成素對(duì)血管有刺激其生成的潛能，即重組人促紅細(xì)胞生成素在血管分化過(guò)程中具有一定作用，能一定程度上促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)、促進(jìn)血管生成，重建血管分支等作用。因而筆者將其應(yīng)用于壞死性結(jié)腸炎新生大鼠模型，探討其保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，觀察組一般狀況相對(duì)對(duì)照組，無(wú)論在進(jìn)食情況還是體重恢復(fù)情況方面均改善明顯，而且，觀察組死亡率明顯低于對(duì)照組，而組織學(xué)改變相對(duì)輕微。因而可以推斷，重組人促紅細(xì)胞生成素的應(yīng)用減輕了大鼠結(jié)腸病變，對(duì)其有一定的保護(hù)作用其作用機(jī)制可能與重組人促紅細(xì)胞生成素促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子的表達(dá)、促血管生成有關(guān)，但尚待進(jìn)一步探討。

［1］黃鳳英，嚴(yán)美林，龍娟.新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎39例臨床分析.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29(6).

［2］胡志輝，張勇.促紅細(xì)胞生長(zhǎng)素應(yīng)用的新途徑.華南國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志，2007，21(6):46-48.

［3］趙治彬，王軼，劉雪平，于成功.中藥潰克靈對(duì)結(jié)腸炎模型大鼠CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響.胃腸病學(xué)，2009，14(11):656-660.

The research of R-HuEPO protection to newborn rats with necroticcolitis

HE Wan-Xiang，ZENG Bin，HU Xiao-yan.Neonatology Department，Shenzhen Hospital of Beijing University ，Shenzhen，Guangdong 518036，China

Objective To investigate and discussion restructuring human urges erythrocyte growth hormone to check the newborn rats necrosis nature colitis protection effect.MethodsRandomly divides newborn 80 Sprague-Dawley rats into 2 sets，observe group and contrast a group，the guidance applying TNBS equally builds the newborn plain necrosis nature colitis model.The people who observes impatient group Yu disease scheduled time abdominal cavity re-organize human，ordinary circumstances，death condition and microanatomy observing the newborn rat’s change.ResultsCreate model last 3rd weekend，all rats have not seen the diarrhoea symptom equally，level the weight observing all groups survival rats were restored equally till making model front，contrast group survival rat weight coming down to some extent without exception relative to making model front.27 death，death rate observing a group were 67.5%;Contrast the set of 35 death，death rate being 87.5% .Two set of death rates were parallel，observing a group is lower than contrasting a group obviously，had statistics meaning comparatively(P＜0.05).That microanatomy changes the colon observing group death rat lesion was more relative than contrasting a group easing off.ConclusionRe-organize person urging the Erythropoietin application to have lightened rat colon lesion，have the certain protection effect to the person.

Re-organize human urging erythropoietin Necrosis nature colitis;TNBS

518036 北京大學(xué)深圳醫(yī)院新生兒科

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