李明娟 楊蘭 趙俊梅

蒺藜(Tribulus terretris L.又名刺蒺藜、硬蒺藜等)系蒺藜科蒺藜屬一年生草本植物，在我國(guó)大部分地區(qū)均有分布。蒺藜的傳統(tǒng)入藥部位是果實(shí)，具有平肝解郁、活血祛風(fēng)、明目、止癢的功效，用于“頭痛眩暈，胸肋脹痛，乳閉乳癰，目赤翳障，風(fēng)疹瘙癢”［1］。蒺藜中的主要生理活性成分為蒺藜皂甙、黃酮、生物堿以及蒺藜多糖等。綜合目前國(guó)內(nèi)外的研究發(fā)現(xiàn)，蒺藜具有降低血壓、利尿、抗衰老及增強(qiáng)中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用，蒺藜全草入藥治療心血管疾病也有產(chǎn)品上市。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)蒺藜皂甙對(duì)糖尿病動(dòng)物模型具有明顯的降血糖作用［3］。本試驗(yàn)采用體外培養(yǎng)的大鼠胰島細(xì)胞，進(jìn)一步在細(xì)胞水平上觀察蒺藜皂甙對(duì)體外培養(yǎng)的正常大鼠胰島細(xì)胞胰島素釋放的影響。

1 材料與方法

1.1 蒺藜皂甙的制備 蒺藜干品采自山東濟(jì)南。取蒺藜全草干品機(jī)械粉碎，取蒺藜粉末用10倍量的水在100℃提取2 h，共提取3次，濾過，合并濾液 ，濃縮，沉糖，再濃縮，后用水飽和的正丁醇萃取，萃取液減壓濃縮后烘干至恒重得蒺藜總皂甙，臨用前用水配制。

1.2 胰島細(xì)胞的培養(yǎng)

1.2.1 準(zhǔn)備工作 環(huán)境條件:超凈工作臺(tái)，標(biāo)準(zhǔn)無菌間;設(shè)備條件:恒溫水浴，二氧化碳培養(yǎng)箱，冷凍離心機(jī)(配水平轉(zhuǎn)子);器材條件:手術(shù)器械(止血鉗、鑷子、手術(shù)剪、頭皮針、注射器、20目不銹鋼篩網(wǎng))，5 cm培養(yǎng)皿，細(xì)胞培養(yǎng)瓶(螺紋口)，5 ml移液管，吸管，50 ml玻璃離心管，15 ml塑料離心管，小反口塞，紗布若干，解剖板。試劑條件:膠原酶p(寶靈曼公司)，F(xiàn)ico11400(Pharmacia公司)，1640培養(yǎng)基，小牛血清，D-Hank’s液，戊巴比妥鈉，75%酒精，碘酒。上述準(zhǔn)備工作嚴(yán)格按細(xì)胞培養(yǎng)的要求進(jìn)行。

1.2.2 胰島細(xì)胞分離純化 將SD大鼠大腿肌內(nèi)注射戊巴比妥鈉麻醉后消毒固定，在超凈工作臺(tái)上做總膽管插管，注射8 ml膠原酶;分離大鼠胰腺，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，37℃水浴消化10 min;分離去除胰腺上的脂肪，將消化過的組織撕碎，震搖至呈細(xì)沙狀;過20目篩，篩下物移入50 ml離心管，Hank’s液洗滌兩次(4℃，2000rmp，2 min);所得細(xì)胞移入15 ml離心管中，Hank’s液洗滌(4℃，2000rmp，2 min);然后采用Ficoll密度梯度離心(4℃，300rmp，20 min)取第二、第三分界面細(xì)胞移入50 ml離心管，Hank’s液洗滌，1640培養(yǎng)液洗滌(4℃，2000rmp，2 min)，將所得細(xì)胞移入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。

1.2.3 胰島細(xì)胞的培養(yǎng) 將培養(yǎng)瓶放置過夜(12 h)，觀察胰島細(xì)胞是否污染。其后將未污染的胰島細(xì)胞轉(zhuǎn)入24孔培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)48 h后將原液吸出，分為對(duì)照組和蒺藜皂甙給藥組。給藥組分別加入含有1 mg/ml，0.1 mg/ml，0.01 mg/ml的蒺藜皂甙藥液孵育24 h后將藥液吸出，加入含糖11.1 mol/L培養(yǎng)液刺激20 min，分別收集胰島細(xì)胞進(jìn)行胰島素含量測(cè)定。

1.3 胰島素含量測(cè)定 采用胰島素免疫放射試劑盒(由上海市第一人民醫(yī)院糖尿病研究室測(cè)定)。

2 結(jié)果

2.1 蒺藜皂甙對(duì)體外培養(yǎng)的胰島細(xì)胞胰島素釋放的影響:試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 蒺藜皂甙對(duì)體外培養(yǎng)胰島細(xì)胞胰島素釋放的影響

3 討論

實(shí)驗(yàn)中采用體外培養(yǎng)大鼠胰島細(xì)胞，進(jìn)一步在細(xì)胞水平上觀察蒺藜皂甙對(duì)體外培養(yǎng)的正常大鼠胰島細(xì)胞胰島素釋放的影響。結(jié)果表明:低濃度0.01 mg/ml蒺藜皂甙能夠增加體外培養(yǎng)的胰島細(xì)胞胰島素的分泌，但效果不明顯;中濃度0.1 mg/ml時(shí)，與對(duì)照組相比，蒺藜皂甙能夠明顯增加胰島素的分泌量;高濃度1 mg/ml蒺藜皂甙組胰島素分泌不增加，反而有所減少，是高濃度時(shí)受體已經(jīng)達(dá)到飽和還是藥液高濃度反饋抑制作用，還需做進(jìn)一步的研究。

［1］中華人民共和國(guó)藥典.化學(xué)工業(yè)出版社，2005:244.

［2］江蘇新藥學(xué)院編.中藥大辭典.上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999，1274-1276;2452-2453.

［3］李明娟，瞿偉菁，王煜非，等.蒺藜皂甙的降血糖作用.中藥材，2002，25(6):420-422.