吳晶晶 張鵬宇 張明智 王貴吉

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)臨床常見。組織蛋白酶-D(Cath-D)是一種天門冬氨酸肽鏈內(nèi)切酶，為雌激素調(diào)節(jié)的溶酶體蛋白酶，具有分解細(xì)胞外基質(zhì)與松解細(xì)胞粘附的能力，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移［1］?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員，參與腫瘤的發(fā)展［2］。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測非小細(xì)胞肺癌組織中Cath-D和MMP-9蛋白的表達(dá)情況，并分析其與臨床病理特征的相互關(guān)系，以深入探討Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料和方法

1.1 材料 選擇2003年1月至2006年1月在我院行非小細(xì)胞肺癌術(shù)后存檔的蠟塊，共96例，其中男58例，女38例，年齡35～77歲，平均58.3歲，其中鱗癌50例，腺癌46例?；颊咝g(shù)前均未經(jīng)任何治療。同時選取病理證實為正常肺組織60例標(biāo)本作為對照組。

1.2 主要試劑 Cath-D和MMP-9單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 免疫組織化學(xué)染色 免疫組織化學(xué)采用S-P法進(jìn)行。具體步聚:脫蠟，水化組織切片，3%H2O2去離子水孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶;抗原修復(fù)后分別滴加一抗，室溫37℃孵育1～2 h或過夜，PBS沖洗，5 min×3次;滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫37℃孵育20 min，PBS沖洗，5 min×3次;滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫37℃孵育20～30 min，PBS沖洗，5 min×3次;應(yīng)用DAB顯色劑顯色;自來水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。本實驗中所有標(biāo)本的檢測均由同一病理技師完成，并在顯微鏡下顯色觀察，嚴(yán)格質(zhì)控。實驗中設(shè)用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Cath-D和MMP-9蛋白陽性染色均位于細(xì)胞質(zhì)中，合并計算高倍鏡下(×400)隨機(jī)選擇的5個視野中陽性細(xì)胞占全部計數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，平均每個視野細(xì)胞質(zhì)呈陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)≥10%為陽性，無明顯陽性反應(yīng)或陽性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 本實驗采用χ2檢驗，所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均用SAS6.12軟件分析完成，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌正常肺組織中的表達(dá) Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)的陽性率明顯高于與正常肺組織，見表1。

表1 Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌與正常肺組織中的表達(dá)(例，%)

2.2 Cath-D和MMP-9的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系 Cath-D和MMP-9表達(dá)的陽性率與有無胸膜侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的比較中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。但與患者年齡及性別的分組比較中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 Cath-D和MMP-9的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

3 討論

非小細(xì)胞肺癌是指除小細(xì)胞癌以外的其他所有類型的肺癌，主要包括腺癌和鱗癌，是肺癌最常見的病理類型，約占所有肺癌患者的80% ～85%［3］。Cath-D是一種糖蛋白，正常組織即可合成［4］，主要分布于細(xì)胞漿。MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族的重要成員，屬于明膠酶類，可產(chǎn)生于正常組織細(xì)胞，當(dāng)組織愈合中或炎癥中可被激活形成膠原酶，能有效分解基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分-Ⅳ型膠原蛋白，其所參與的基質(zhì)降解及再塑形與間質(zhì)血管發(fā)生關(guān)系密切，在腫瘤血管生成中起重要作用［5］。張麗華等［6］通過對87例胃癌標(biāo)本中進(jìn)行Cath-D和MMP-9的檢測，認(rèn)為二者與胃癌的生長、浸潤及轉(zhuǎn)移密切關(guān)系，并可作為判斷胃癌生物學(xué)行為及預(yù)后的重要指標(biāo)。

本次實驗通過免疫組織化學(xué)方法檢測Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Cath-D和MMP-9表達(dá)的陽性率明顯高于對照組，提示二者參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。而且實驗結(jié)果顯示，Cath-D和MMP-9表達(dá)的陽性率在不同胸膜侵犯、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的差異有統(tǒng)計學(xué)意義，提示二者可能參與了腫瘤的生長、浸潤及淋巴道轉(zhuǎn)移。由于非小細(xì)胞肺癌胸膜侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均與患者的預(yù)后密切相關(guān)，提示二者可能對預(yù)后評估有一定價值。惡性腫瘤細(xì)胞可產(chǎn)生多種蛋白水解酶，降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，為腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移提供空間及通道，Cath-D為其中一種蛋白水解酶，一方面可通過水解作用降解細(xì)胞外基質(zhì)，參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，另一方面，可以激活組織蛋白酶B，再次激活尿激酶激活因子，并與其受體結(jié)合，調(diào)節(jié)與腫瘤有關(guān)的蛋白分解作用［7］。MMP-9作為細(xì)胞外基質(zhì)降解過程中必不可少的酶，可能與Cath-D具有共同作用。Cath-D和MMP-9除直接催化降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜外，還參與蛋白水解級聯(lián)反應(yīng)［8］，共同促進(jìn)腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。

總之，Cath-D和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)上調(diào)，二者可能與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，對活檢組織進(jìn)行二者的聯(lián)合檢測，可能有助于預(yù)后的判斷。

［1］張麗志，薛鳳霞．PS2、Cath-D、PR和ER-α 的表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究．天津醫(yī)藥，2009，37(4):277-279.

［2］劉士生，李巍，劉愛東，龐久玲．基質(zhì)金屬蛋白酶-9和上皮型黏附素在胃癌中的表達(dá)．北京醫(yī)學(xué)，2008，30(9):554-557.

［3］Finger EC，Turley RS，Dong M，et al．Tbeta RIII suppresses nonsmall cell lung cancer invasiveness and tumorigenicity．Carcinogenesis，2008，29(3):528-535.

［4］陳洋，李舒．組織蛋白酶D與消化道腫瘤的關(guān)系．咸寧學(xué)院學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2008，22(6):546-549.

［5］劉愛東，龐久玲，劉士生．胃癌中基質(zhì)金屬蛋白酶-9和CD105表達(dá)關(guān)系的研究．中國老年學(xué)雜志，2009，29(4):886-887.

［6］張麗華，孫榮超，陳瑛．CerbB-2、Cath-D和MMP-9在胃癌中的表達(dá)及其臨床意義．實用醫(yī)技雜志，2004，11(5):674-676.

［7］徐曉艷，范鵬程，馬秀梅．E-鈣黏附素、組織蛋白酶D與胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系．山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，39(3):237-240.

［8］陳曉藝，張白凌，陳少杰．組織蛋白酶D與基質(zhì)金屬蛋白酶-9在口腔鱗癌的表達(dá)．福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2006，40(6):560-562.