梁惠嬋 肖百全 連雪科 黃遠(yuǎn)鏗 雷夏凌 楊 威

廣州醫(yī)藥工業(yè)研究院藥物非臨床評(píng)價(jià)研究中心國(guó)家廣州新藥安全評(píng)價(jià)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510240

貝母為多年生草本植物,其鱗莖供藥用,有止咳化痰、清熱散結(jié)之功,主產(chǎn)于四川、云南、陜西秦巴山區(qū),甘肅等地。貝母有川貝、浙貝、平貝、伊貝之分,其中川貝又分為暗紫貝母、梭砂貝母、太白貝母等。太白貝母為百合科植物太白貝母的鱗莖。具有清熱潤(rùn)肺,化痰止咳的作用,其功能主治與川貝中的暗紫貝母、梭砂貝母相似,但是目前尚無(wú)有關(guān)太白貝母化痰作用的實(shí)驗(yàn)報(bào)道,臨床上太白貝母用于化痰止咳的案例也較少,其應(yīng)用尚未得到較好的推廣。為此,筆者對(duì)太白貝母的祛痰功效進(jìn)行了相關(guān)研究,并與暗紫貝母、梭砂貝母進(jìn)行了比較。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 昆明種小鼠,SPF 級(jí),雌雄各半,購(gòu)入時(shí)體重 16-19g,從廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購(gòu)進(jìn),動(dòng)物合格證號(hào)：0046273,粵監(jiān)證字：SCXK(粵)2003-0002,粵監(jiān)證字2008A022。動(dòng)物飼養(yǎng)于廣州醫(yī)藥工業(yè)研究院 SPF 級(jí)動(dòng)物房?jī)?nèi),廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施檢測(cè)合格證號(hào)：粵監(jiān)證字2008C076號(hào),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(粵)2008-0003。動(dòng)物飼養(yǎng)條件：自由進(jìn)食飲水,飼養(yǎng)室溫度與濕度：23±3℃,55±15%。

1.1.2 氯化胺,分析純,500g/瓶,廣東汕頭新寧化工廠(chǎng),XK 13-001-1513-197II。

1.1.3 碳酸氫鈉：分析純,500g/瓶,天津市福辰化學(xué)試劑廠(chǎng),批號(hào)：20080902。

1.1.4 苯酚紅：分析純,上?；瘜W(xué)試劑總廠(chǎng)所屬上海試劑三廠(chǎng),批號(hào) 900615。

1.1.5 羧甲基纖維素鈉 (CMC-Na)：藥用級(jí),規(guī)格：500g/瓶,室溫保存,國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.1.6 電子天平：TE 4100-L,賽多利斯科學(xué)儀器 (北京)有限公司,精度：1g。

1.1.7 電子天平：124S,北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司,精度：0.0001g。

1.1.8 紫外分光光度計(jì)：PU-1221,北京通用儀器設(shè)備公司。

1.2 方法[1～3]

挑選檢疫觀(guān)察合格的昆明種小鼠 132只,雌雄各半,按體重隨機(jī)均衡分成 11組,即空白對(duì)照組、氯化胺組、太白貝母高、中、低劑量組,梭砂貝母高、中、低劑量組,暗紫貝母高、中、低劑量組,每組 12只,雌雄各半。設(shè)定太白貝母、梭砂貝母、暗紫貝母高、中、低劑量分別為1.0、0.5、 0.25g(生藥)/kg。試驗(yàn)第一天起開(kāi)始灌胃給藥,每天一次,連續(xù) 5天 (第四次給藥后小鼠饑餓過(guò)夜,約 16小時(shí)),空白組灌服等容積的 0.5%CMC-Na;陽(yáng)性對(duì)照藥氯化胺劑量為 1.0g/kg,灌胃給藥,僅給藥一次 (末次處理給藥,前四天灌服等容積的 0.5%CMC-Na)。末次給藥后 1.0h 先給小鼠腹腔注射 5%的酚紅溶液 (10ml/kg),注射酚紅溶液 30min 后用尾靜脈空氣栓塞法將小鼠處死,剪開(kāi)頸部皮膚,小心分離氣管 (操作過(guò)程中避免出血),放入 2.5ml 5%碳酸氫鈉溶液中并震蕩 30min,將氣管棄去后用紫外分光光度計(jì)于波長(zhǎng) 546nm 測(cè) OD 值,用酚紅做一標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),根據(jù)曲線(xiàn)計(jì)算酚紅含量 (μg/ml)并與對(duì)照組比較。酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制方法：分析天平準(zhǔn)確稱(chēng)量一定量的酚紅,加 5%碳酸氫鈉溶液溶解,配制成酚紅含量為100μg/ml 的溶液,然后順次稀釋成每毫升含酚紅 0.1、0.3、0.5、 0.7、 1.0、3.0、 5.0、 10μg 的溶液。 用分光光度計(jì)測(cè)量 OD 值,以酚紅劑量為橫坐標(biāo),OD 值為縱坐標(biāo),各交點(diǎn)連成直線(xiàn),根據(jù)所測(cè)出的OD 值計(jì)算各試驗(yàn)組動(dòng)物酚紅的排泌量。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)：所有數(shù)據(jù)均輸入 Excel 2003進(jìn)行單因素方差分析或 (和)t 檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,各組計(jì)量數(shù)據(jù)均采用表示。

2 結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明 (表 1)：與空白組相比,太白貝母高、中劑量組、梭砂貝母高、中劑量組、暗紫貝母高、中、低劑量組均能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泌量 (p＜0.05或 0.01),陽(yáng)性對(duì)照藥氯化銨也能顯著增加小鼠氣管酚紅的排泌量。

附表1 太白貝母系列樣品對(duì)昆明種小鼠氣管酚紅排泌的影響 (n=12)

3 討論

小鼠氣管酚紅排泌測(cè)定法是一個(gè)經(jīng)典的常用于考察藥物是否具有祛痰作用的試驗(yàn)方法之一,其原理是利用指示劑酚紅自小鼠腹腔注射吸收后,部分酚紅可從支氣管分泌到痰液中,因而可以通過(guò)測(cè)定小鼠氣管酚紅排泌的量間接的反應(yīng)藥物的祛痰作用。凡是能夠促使支氣管分泌液增加的藥物,都可以促使呼吸道粘膜排出的酚紅量隨之增多。為考察太白貝母與暗紫貝母、梭砂貝母在化痰功效方面是否具有差別,筆者選用小鼠氣管酚紅排泌試驗(yàn)對(duì)上述川貝母的化痰功效進(jìn)行考察。試驗(yàn)結(jié)果表明：太白貝母、梭砂貝母、暗紫貝母均有促進(jìn)小鼠氣管酚紅排泌的作用,其中暗紫貝母對(duì)小鼠氣管酚紅排泌的作用最強(qiáng),太白貝母作用與梭砂貝母相近。

川貝的生長(zhǎng)環(huán)境較為復(fù)雜,通常生長(zhǎng)于海拔 3000米以上的高原地區(qū)。由于生長(zhǎng)條件苛刻,故此川貝不能人工種植繁育,只能靠野生獲得。劉先齊[5]等人研究表明,太白貝母可通過(guò)人工種植獲得,人工種植的太白貝母粗皂苷含量、果實(shí)產(chǎn)量均比人工種植的暗紫貝母高,人工種植的暗紫貝母幾乎無(wú)市場(chǎng)和藥用價(jià)值;趙德永[6]等人研究結(jié)果表明,人工種植的太白貝母雖然總皂苷含量比野生暗紫貝母低,但是總生物堿的含量卻高于暗紫貝母[6]。本研究結(jié)果表明太白貝母具有較好的祛痰作用,具有推廣應(yīng)用價(jià)值,由于太白貝母可以人工種植繁育,在實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化的同時(shí),其產(chǎn)量遠(yuǎn)高于其他川貝母,具有很好的醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

[1]劉元,李星雨等,白花前胡丙素和紫花前胡苷祛痰作用研究 [J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(5)：1049-1049.

[2]陳奇,中藥藥理研究方法學(xué) [M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2006：624.

[3]曾曉春,陳淑慧等,粗葉榕的鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用 [J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志,2009,9(2)：30-32.

[4]劉玉紅 李兆方,太白貝母的快速繁殖試驗(yàn) [J].中國(guó)中藥雜志,1996,21(1)：15-17.

[5]劉先齊,暗紫貝母與太白貝母的引種比較試驗(yàn) [J].中國(guó)中藥雜志,1992,14(2)：81-82.

[6]趙德永,4種川貝母的總皂甙、總生物堿及西貝素的含量測(cè)定 [J],中國(guó)中藥雜志,1994,19(2)：71-72.