馬述臣 （青島康地恩藥業(yè)有限公司 266111）

隨著家禽疾病的發(fā)展和獸醫(yī)臨床診治水平的提高，獸醫(yī)臨床上愈來愈越多地通過藥敏試驗來進(jìn)行藥物的選擇。由于目前市場上復(fù)方獸藥的成分不透明，給藥敏試驗帶來了許多困難。為了更好地利用藥敏試驗來選擇藥物，根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗以及制藥工作經(jīng)驗，介紹一下獸醫(yī)臨床上如何利用藥敏試驗來選擇復(fù)方獸藥。

1 材料準(zhǔn)備

1.1 培養(yǎng)基

按試驗要求選用不同的培養(yǎng)基。若做禽大腸桿菌藥敏試驗宜選擇普通瓊脂或麥康凱培養(yǎng)基；若做沙門氏菌藥敏試驗宜選擇SS培養(yǎng)基；若做禽巴氏桿菌藥敏試驗可選擇鮮血瓊脂平板培養(yǎng)基；另外使用磺胺藥物做藥敏試驗則應(yīng)選用無蛋白胨肉湯瓊脂平板培養(yǎng)基等。

1.2 藥敏試紙

選擇質(zhì)量好的定量濾紙以備制作藥敏紙片。

1.3 細(xì)菌

選自具有典型癥狀病雞的病變部位提取病料。如肝臟、心臟、脾臟等臟器。

1.4 其它設(shè)備

接種環(huán)、酒精燈、打孔器、牛津杯、移液器、滴頭等。

2 試驗準(zhǔn)備

2.1 藥敏片的準(zhǔn)備

2.1.1 藥敏片的制備 取定量濾紙，用打孔器打成直徑為6mm的圓形紙片，取50～100片圓紙片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎，經(jīng)15磅15～20min高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數(shù)天，使之完全干燥，并在60℃的條件下烘干備用。

2.2.2 藥液的制備 根據(jù)經(jīng)驗，按獸藥說明書(或標(biāo)簽)上標(biāo)明的治療量的10～20倍比例配制藥液。如某藥品100g兌水100kg，表明該藥治療量為1g兌水1L，配制藥液時就是1g加50～100ml水或1L水加10～20g藥品，即為配制藥敏片所用的藥液濃度。

2.2 藥敏片的制作 將含有50～100片紙片的青霉素瓶內(nèi)加入配制好的藥液適量，并翻動紙片，使各紙片充分浸透藥液，輕輕翻動紙片以免將紙片搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內(nèi)過夜，干燥后即密封，切勿受潮，置陰暗干燥處存放備用(一般有效期3～6個月)。

3 試驗操作方法

3.1 藥敏片法

3.1.1 涂布 在超凈臺或自制無菌操作臺中，用經(jīng)火焰滅菌(酒精燈)的接種環(huán)從病料中挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物，分別在平皿邊緣相對4點(diǎn)涂菌，以每點(diǎn)開始劃線涂菌至平皿的1/2，然后找到第2點(diǎn)劃線至平皿的1/2，依次劃線，直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可將待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液，將少量混懸液倒入平皿培養(yǎng)基上，輕晃平皿使鋪勻，放置5～10min)。

3.1.2 貼片 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停，取已制好的干燥藥敏片分別貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕按幾下藥敏片。若使觀察結(jié)果更準(zhǔn)確，要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上，一般可在平皿中央貼一片，外周可等距離貼若干片。一般9cm直徑的平皿可同時貼6～9片，同時標(biāo)明各種藥敏片的名稱。最后將平皿培養(yǎng)基底部向上(倒置)放于37℃溫箱中培養(yǎng)12～24h。

4 結(jié)果觀察與判斷

取出培養(yǎng)12～24h后的培養(yǎng)皿進(jìn)行觀察。在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長受到抑制。過夜培養(yǎng)后形成一個抑菌圈，抑菌圈越大，說明該菌對此藥敏感性越大，反之越小，若無抑菌圈，則說明該菌對此藥具有耐藥性。其直徑大小與藥物濃度、劃線細(xì)菌濃度有直接關(guān)系。按抑菌圈直徑大小作為判定敏感度高低的標(biāo)準(zhǔn)，抑菌圈直徑20mm以上敏感度為極敏、15～20mm敏感度為高敏、10～14mm敏感度為中敏、10mm以下敏感度為低敏、0mm敏感度為不敏。

5 藥物的選擇與應(yīng)用

5.1 影響藥敏結(jié)果的因素

5.1.1 培養(yǎng)基 應(yīng)根據(jù)試驗菌的營養(yǎng)需要進(jìn)行配制。傾注平板時，厚度合適(約5～6mm)，不可太薄，一般直徑為9cm的培養(yǎng)皿，傾注培養(yǎng)基以18～20ml為宜。培養(yǎng)基內(nèi)應(yīng)盡量避免有抗菌藥物的拮抗物質(zhì)，如鈣、鎂離子能減低氨基糖苷類的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和TMP的活性。

5.1.2 細(xì)菌接種量 細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小，能產(chǎn)酶的菌株更可破壞藥物的抗菌活性。

5.1.3 藥物濃度 藥物的濃度和總量直接影響抑菌試驗的結(jié)果，需精確配制。藥液配制時特別注意：目前獸藥廠家生產(chǎn)的獸藥多為復(fù)方藥物，其用量實(shí)際上是該藥中實(shí)際主要成分的治療量(說明書或標(biāo)簽中一般未標(biāo)出)，有時不是說明書(或標(biāo)簽)中標(biāo)明的藥物成分，要特別注意區(qū)分。另外，按按《中華人民共和國獸藥典》規(guī)定：說明書(或標(biāo)簽)中的用量即為治療量，說明書(或標(biāo)簽)中一般不能寫預(yù)防量。

5.1.4 培養(yǎng)溫度和時間 一般培養(yǎng)溫度和時間為37℃12～24h，有些抗菌藥擴(kuò)散慢如多粘菌素，可將已放好抗菌藥的平板培養(yǎng)基，先置4℃冰箱內(nèi)2～4h，使抗菌藥預(yù)擴(kuò)散，然后再放37℃溫箱中培養(yǎng)，可以推遲細(xì)菌的生長，而得到較大的抑菌圈。

5.2 藥物選擇

獸醫(yī)臨床上藥物的選擇至少應(yīng)具備以下條件：

5.2.1 敏感性要高 敏感性越高的藥物殺菌作用也越強(qiáng)。因此，藥物敏感試驗后，首先應(yīng)考慮選擇高敏藥物，也可考慮選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。

5.2.2 藥物在體內(nèi)吸收狀況與所治療疾病的發(fā)病機(jī)制相符 在選擇高敏藥物的同時還要考慮藥物的吸收途徑以及在體內(nèi)的吸收、轉(zhuǎn)化狀況。因為藥敏試驗是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給禽用藥的時候，必須通過機(jī)體的吸收并達(dá)到感染部位才能使藥物達(dá)到一定的效果。譬如禽大腸桿菌病，如果是敗血性型禽大腸桿菌病，那么選擇的藥物就應(yīng)該既敏感性高又易于吸收才適合，如果敏感性高但吸收不佳，其治療效果是不會好的。

因此，在選擇藥物時，要同時考慮以上因素才會達(dá)到較好的治療效果。如果達(dá)不到上述要求，寧可選擇敏感性不是特高但藥物卻能很快到達(dá)感染部位的藥物，這一點(diǎn)非常重要。