黃新蘭 趙愛華 翟 艷 陳小燕 姜明霞 劉 芳 戴亞琴

地佐辛是一種強效阿片類鎮(zhèn)痛藥，能緩解術后疼痛，其鎮(zhèn)痛強度、起效時間和作用持續(xù)時間與嗎啡相當，成癮性小[1]。本試驗按《中國藥典》2005年版無菌檢查法建立地佐辛注射液無菌檢查的方法。

1 環(huán)境與儀器材料

1.1 儀器與試藥

HTY-2000A型智能集菌儀（泵速設為160r/min）、KSF330一次性全封閉集菌器、HTY-K型培養(yǎng)器專用振蕩儀（杭州泰林生物技術設備有限公司）、LRH-250生化培養(yǎng)箱（上海索普儀器有限公司）；地佐辛注射液（規(guī)格：1mL：5mg，由揚子江藥業(yè)集團有限公司生產，批號09122801、09122901）。

1.2 試驗用菌株

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]、銅綠假單胞菌[CMCC（B）10104]、枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63501]、白色念珠菌[CMCC（F）98001]、生孢梭菌[CMCC（B）64941]、黑曲霉[CMCC（F）98003]（均來源于中國藥品生物制品檢定所，前4株菌傳種代數(shù)為第三代，后2株菌為第二代）。

1.3 培養(yǎng)基、沖洗劑、中和劑及稀釋劑

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（批號：091223）、改良馬丁培養(yǎng)基（批號：091225）、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（批號：091223）、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基（批號：091225）均為北京三藥科技開發(fā)公司； 0.9%滅菌氯化鈉溶液、pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液（均由揚子江藥業(yè)集團有限公司輸液車間配制）。

2 方法與結果[2]

2.1 菌液制備

分別接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，接種生孢梭菌至硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24h；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)24～48h。上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含菌數(shù)＜100CFU的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基中，23～28℃培養(yǎng)5～7d，加入5mL 0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫，然后，吸出孢子懸液（用管口帶有薄的無菌棉花或紗布能過濾菌絲的無菌毛細吸管）至無菌試管內，用0.9%無菌氯化鈉溶液制成每1mL含孢子數(shù)＜100CFU的菌懸液。菌種制備結果見表1。

表1 驗證用菌液的稀釋度及接種量

2.2 方法學驗證

2.2.1 試驗組

在無菌室中，取一次性全封閉集菌器（三聯(lián)）兩套，于振蕩器上振蕩沖洗（共6管），將本品30瓶按薄膜過濾法均勻濾至6管中，2管中泵入改良馬丁培養(yǎng)基（100ml）并夾緊管口；泵入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（100mL）至另4管中夾緊；于前兩管中分別接入＜100CFU的白色念珠菌、黑曲霉，后4管中分別接入＜100CFU的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、生孢梭菌，作為試驗組。按規(guī)定溫度將上述集菌器培養(yǎng)3～5d。

2.2.2 陽性對照組

取一次性全封閉集菌器（三聯(lián)）兩套，照“2.2.1”項下，重復操作，作為陽性對照，并按規(guī)定溫度將上述集菌器培養(yǎng)3～5d。

2.2.3 陰性對照組

在無菌室中，取一次性全封閉集菌器（三聯(lián)）兩套，向兩管中分別泵入改良馬丁培養(yǎng)基（100mL）并夾緊管口，向另4管中分別泵入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（100mL）并夾緊管口。作為陰性對照組。

試驗組、陽性對照組、中和劑對照組、陰性對照組的觀察情況見表2。

表2 方法學驗證結果

2.3 樣品的無菌檢查

取本品30瓶按薄膜過濾法至全封閉集菌器中，2管中泵入硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（100mL），其中一管接入金黃色葡萄球菌作為陽性對照，另一管泵入改良馬丁培養(yǎng)基，培養(yǎng)14d，逐日觀察，供試品管應澄清，陽性管菌生長良好，判定供試品符合規(guī)定。

3 討 論

驗證試驗表明，本品在該檢測條件下無抑菌作用。采用薄膜過濾法，無需用pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液沖洗，可直接過濾檢測。

[1]國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家藥品標準[S].地佐辛注射液YBH09182006.

[2]國家藥典委員會.中國藥典[S].2005年版. 二部. 北京:化學工業(yè)出版社:89.