李敏遐 候燕明 林冬云

新生兒缺氧缺血性腦病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)是圍生期新生兒因缺氧、缺血引起的腦部疾病，主要由宮內(nèi)窘迫、新生兒窒息缺氧引起，窒息愈嚴(yán)重，時(shí)間愈長，腦病愈嚴(yán)重，后遺癥發(fā)生率也愈高[1-3]。一般來說，輕度患兒預(yù)后良好，病情嚴(yán)重者可導(dǎo)致早期死亡或造成智能低下、腦性癱瘓、癲癇及共濟(jì)失調(diào)等不可逆性腦損害，是引起新生兒死亡和(或)兒童神經(jīng)精神發(fā)育障礙的主要原因。嚴(yán)重影響患兒今后的生活。

近年來，免疫系統(tǒng)在新生兒HIE中的作用受到關(guān)注，有報(bào)道指出Th1、Th2亞群及其相互之間的平衡關(guān)系與新生兒HIE的發(fā)生、發(fā)展、預(yù)后及轉(zhuǎn)歸有密切關(guān)系[2]。為進(jìn)一步探討T輔助細(xì)胞亞群功能與新生兒HIE的相關(guān)性，本研究對(duì)在清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院收治的患有HIE的新生兒80例進(jìn)行T輔助細(xì)胞亞群檢測(cè)，并與正常新生兒對(duì)比，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2008年3月至2009年1月清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院收治的HIE患兒80例，其中男48例，女32例，胎齡38.0～41.2周，平均（38.8±2.1）周；出生時(shí)體質(zhì)量2650～3850g；入院時(shí)間為出生后1.0～44.5h，平均（15.6±2.8）h；臨床分度為輕度HIE 28例，中度HIE 36例，重度HIE 16例。所有患兒的診斷標(biāo)準(zhǔn)和臨床分度符合1996年中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)新生兒組杭州會(huì)議制定的《新生兒缺氧缺血性腦病診斷依據(jù)和臨床分度標(biāo)準(zhǔn)》[2]，并經(jīng)頭顱CT掃描確診。同時(shí)選取于清遠(yuǎn)市人民醫(yī)院產(chǎn)科同期出生的正常兒40例，作為正常對(duì)照組，其中男22例，女18例，胎齡37.5～41.5周，平均（37.5±3.2）周，出生時(shí)體質(zhì)量2680～4000g，出生時(shí)及生后均無窒息及缺氧史。兩組新生兒在性別、胎齡和出生體質(zhì)量等一般狀況等方面比較，P＞0.05，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

HIE患兒于就診當(dāng)時(shí)抽取股靜脈血5mL，對(duì)照組新生兒在出生時(shí)留取臍帶血5mL。將采集得的外周血經(jīng)肝素抗凝，外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的分離應(yīng)用密度梯度離心法進(jìn)行，用Buffer緩沖液(含2%FCS的0.1mol/L PBS)懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×106/mL，置于4℃，備用。

1.2.2 檢測(cè)方法

采用Dynal免疫磁珠法對(duì)Th細(xì)胞進(jìn)行分離純化。用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)培養(yǎng)上清液中的γ-干擾素（IFN-γ）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、IL-4及IL-6的水平，操作具體步驟按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS12.5統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較應(yīng)用t檢驗(yàn)，率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組新生兒T輔助細(xì)胞亞群分泌細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平比較

結(jié)果見表1。

表1 兩組新生兒T輔助細(xì)胞亞群分細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

表1 兩組新生兒T輔助細(xì)胞亞群分細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-6的水平(±s，pg/mL)

與正常新生兒組比較，*P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2.2 HIE組病情不同程度患兒間T輔助細(xì)胞亞群分細(xì)胞因子水平比較

結(jié)果見表2。

表2 HIE組病情不同程度T輔助細(xì)胞亞群分細(xì)胞因子水平(±s，pg/mL)

表2 HIE組病情不同程度T輔助細(xì)胞亞群分細(xì)胞因子水平(±s，pg/mL)

與輕度缺氧缺血性腦病患兒比較，△P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

3 討 論

新生兒HIE是由于患兒在圍生期缺氧所導(dǎo)致的顱腦損傷性疾病[4]，是臨床上導(dǎo)致新生兒死亡及嬰幼兒神經(jīng)系統(tǒng)功能發(fā)育障礙的主要因素。而神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)均是重要調(diào)節(jié)系統(tǒng)，共同維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境處在相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體受到刺激產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)或感染后，這兩個(gè)系統(tǒng)常產(chǎn)生相互作用。免疫系統(tǒng)通過細(xì)胞因子對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮著特殊的調(diào)節(jié)作用，相當(dāng)一部分神經(jīng)遞質(zhì)和內(nèi)分泌激素受體均可存在于免疫細(xì)胞上[5,6]。

T輔助細(xì)胞根據(jù)其分泌細(xì)胞因子的不同而分成Th1和Th2兩個(gè)亞型，Th1主要分泌IFN –γ、IL-2和TNF-α，以介導(dǎo)細(xì)胞免疫功能為主；Th2 主要分泌IL- 4、IL- 6、IL-8及IL-10等參與體液免疫的因子。正常情況下，Th1 /Th2保持在動(dòng)態(tài)平衡的狀態(tài)，任何一方的增多或減少都可能打破原有的平衡，導(dǎo)致患兒機(jī)體免疫功能異常。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IFN –γ、IL-2的水平來反映Th1的功能；IL- 4、IL- 6的水平來反映Th2的功能[7,8]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本組HIE患兒IFN –γ、IL-2水平明顯低于正常新生兒組，且IFN –γ、IL-2水平與患兒病情的嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān)，病情越重，IFN-γ、IL-2水平越低。Th2 細(xì)胞所分泌的IL-4、IL-6明顯增多，高于正常新生兒組，IL-4、IL-6水平與患兒病情的嚴(yán)重程度呈顯著正相關(guān)，病情越嚴(yán)重，IL-4、IL-6的水平越高。呈現(xiàn)Th2功能亢進(jìn)，Th1功能下降，Th1/Th2 比例失衡，提示Th細(xì)胞的異常表達(dá)對(duì)新生兒HIE的發(fā)病有重要意義。有研究指出，IL-6直接參與HIE腦損傷，IFN–γ、IL-2則通過損害機(jī)體的免疫功能間接引起新生兒腦損傷，其水平可反映患兒缺氧缺血的嚴(yán)重程度。因此，對(duì)新生兒的T輔助細(xì)胞亞群功能的檢測(cè)，可為疾病的早期診斷、病情輕重程度的評(píng)估和判斷預(yù)后的重要指標(biāo)。

[1]韓玉昆. 新生兒缺氧缺血性腦病診斷依據(jù)和臨床分度[J].中華兒科雜志,1997,12(2):99.

[2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科學(xué)分會(huì)新生兒學(xué)組.新生兒缺氧缺血性腦病診斷標(biāo)準(zhǔn)[J].中華兒科雜志,2005,43(8):584.

[3]錢雁萍.螺旋CT在新生兒缺氧缺血性腦病中的應(yīng)用[J].江西醫(yī)藥,2009,44(12):1252-1253.

[4]祝兆蓮,曹洪英.新生兒缺氧缺血性腦病病因分析[J].黑龍江醫(yī)學(xué),2001,25(11):879.

[5]張園園,王青青,王建莉,等.NK受體KIR生物學(xué)功能的研究進(jìn)展[J].免疫學(xué)雜志,2005,21(3):262-264.

[6]陳慶華,安云慶.自然殺傷細(xì)胞活化信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和效應(yīng)[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(3):360-362.

[7]王莉佳,趙曉東,劉恩梅,等.新生兒缺氧缺血性腦病T細(xì)胞活化受抑的機(jī)制探討[J].實(shí)用兒科臨床雜志,2003,18(2):116-120.

[8]郭炯光,洪小楊,錢淑鴦,等.新生兒血清S-100蛋白水平與腦損傷的關(guān)系[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥,2006,8(8):38-39.