廖名愛

（江西省吉安市婦幼保健院，江西 吉安 343000）

丹七片收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑》（第1冊），由丹參、三七組成，具有活血化瘀作用，臨床用于血瘀氣滯、心胸痹痛、眩暈頭痛、經(jīng)期腹痛等。丹參的化學(xué)成分包括脂溶性和水溶性兩大部分，水溶性成分是主要活性成分，以丹酚酸B含量最高，是抗心肌缺血的主要成分[1-3]。原標(biāo)準(zhǔn)中無定性定量標(biāo)準(zhǔn)，為此筆者研究了方中三七的薄層色譜鑒別（TLC）法、丹參中丹參酚酸B含量的高效液相色譜（HPLC）法[4]，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

HP-1100型高效液相色譜儀（美國），包括1322A在線脫氣機(jī)、G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測器、HP化學(xué)工作站；PBQ-Ⅰ型薄層自動(dòng)鋪板器（重慶南岸實(shí)驗(yàn)電器廠）；SPU-Ⅰ型自動(dòng)噴霧顯色儀（日本島津）；CQ-250型超聲波清洗器（上海船舶電子設(shè)備研究所）；定量毛細(xì)管（美國Drummond公司）；SimplicityTM型超純水系統(tǒng)（Millipore公司）。丹參酚酸B、人參皂苷Rg1對(duì)照品均購于中國藥品生物制品檢定所；丹七片（江西心正藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TLC法鑒別三七

取樣品4片，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲處理45 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 mL溶解，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH約為2，用醋酸乙酯20 mL振搖提取，棄去醋酸乙酯液，水層以水飽和正丁醇萃取2次，每次30 mL，合并正丁醇液，再用氨試液40 mL洗滌，分取正丁醇液，以水40 mL洗滌2次，棄去水液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。按處方取不含三七的其他藥材，照樣品制備工藝及上述方法制成陰性對(duì)照品溶液。取人參皂苷Rg1對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。分別吸取對(duì)照品溶液5"L、供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液2"L，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G板上，以氯仿-醋酸乙酯 -甲醇 -水（15∶40∶22∶10）10℃以下放置12 h的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品溶液色譜則無此斑點(diǎn)（圖 1）。

圖1 三七的薄層色譜圖

2.2 丹參酚酸B含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Agilent Hypersil C18柱（250 mm ×4.0 mm，5"m）；流動(dòng)相：甲醇 -0.15%甲酸（35 ∶65）；流速：1 mL/min；檢測波長：286 nm；進(jìn)樣量：10"L。在此條件下，對(duì)照品溶液、供試品溶液均在保留時(shí)間約7 min處有一色譜峰，見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

2.2.2 溶液制備

精密稱取丹參酚酸B對(duì)照品適量，加50%乙醇制成每1 mL含568"g丹參酚酸B的對(duì)照品溶液。取樣品10片，研細(xì)，取約0.3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲提取30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，加50%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，用微孔濾膜（0.45"m）濾過，取濾液，即得供試品溶液。取不含丹參的陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：取對(duì)照品溶液適量，稀釋成質(zhì)量濃度分別為284.00，113.60，56.80，28.40，11.36"g/mL 的溶液，分別注入液相色譜儀測定峰面積，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=16.5393075 X+44.1243，r=0.9999（ n=6）。結(jié)果表明丹參酚酸B進(jìn)樣量在0.114～5.68"g范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為1.20%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液，每隔0.5 h或1 h，于8 h內(nèi)依法測定。結(jié)果峰面積的 RSD為1.96%（n=6），表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批樣品，依法制成供試品溶液并測定。結(jié)果含量的 RSD為0.52%（n=6），表明方法重現(xiàn)性好。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品適量，研細(xì)，取約0.15 g，精密稱定，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入質(zhì)量濃度為50.6"g/mL的丹參酚酸B對(duì)照品溶液15，20，25 mL各2份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 丹參酚酸B加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取不同批次的樣品，依法制備供試品溶液并測定，以外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為 040201，040202，040203，040501，040502，040503，040304，050101，050102，050103 的樣品中丹參酚酸 B 的含量分別為 2.699，2.578，2.631，2.596，2.641，2.386，2.961，3.448，3.295，3.087 mg/片。

3 討論

本制劑中丹參是經(jīng)水提取干燥后制成片劑，因此用超聲提取方法進(jìn)行含量測定操作簡便，經(jīng)與回流提取比較，提取效果無差別；提取溶劑選擇了50%甲醇、甲醇、50%乙醇、75%甲醇進(jìn)行比較，50%乙醇的提取效果較好；對(duì)溶劑用量和提取時(shí)間也分別進(jìn)行了比較，確定用25 mL 50%乙醇超聲提取30 min。

[1]范英昌，趙桂峰，張文治.丹酚酸B對(duì)大鼠心肌梗死過程中病理形態(tài)學(xué)的影響[J]. 天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，23（1）：12.

[2]劉 杰，高秀梅，王 怡.丹酚酸B對(duì)急性心肌缺血大鼠血流動(dòng)力學(xué)的影響及作用分子機(jī)制研究[J]. 中草藥，2006，37（3）：409.

[3]武 駿，徐 立，許 立.丹酚酸B對(duì)兔離體心臟缺氧再復(fù)氧損傷的保護(hù)作用[J]. 中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2007，21（3）：212.

[4]蔣萬浪，袁祥慧.高效液相色譜法測定通脈顆粒中丹酚酸B含量[J].中國藥業(yè)，2006，15（18）：27.