陳鮮鑫 王金全 王春陽 張廣民 孫占敏

發(fā)酵液體飼料(Fermented liquid feed,FLF)作為一種新型飼料,最早使用是在20世紀80年代末的荷蘭，當時的發(fā)酵液體飼料實際上就是濕拌料(陳文斌，2004)。隨著現(xiàn)代飼料工業(yè)技術(shù)的發(fā)展，發(fā)酵液體飼料正朝著可人工控制發(fā)酵過程的方向發(fā)展 (王金全，2009)。FLF較傳統(tǒng)干料和濕拌料(NFLF)有許多優(yōu)點，如可使用食品發(fā)酵工業(yè)副產(chǎn)物，大大降低飼料成本；更符合豬的消化生理特點和動物福利；放大酶制劑和微生態(tài)制劑的作用，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率、改善豬生長性能；還可降低動物胃腸道pH值，抑制病原菌繁殖，調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)環(huán)境，促進動物健康等(王金全，2009；朱新貴，2001；Carlson D 等，1999、2003；Plumed-Ferrer C，2004)。然而 FLF 品質(zhì)受發(fā)酵菌種、溫度、pH值、日糧組成、發(fā)酵促進劑等多種因素的影響，使得在現(xiàn)實生產(chǎn)中很難得到一種品質(zhì)穩(wěn)定的 FLF(李軍，2001)。Brooks(1998)指出，到目前為止，還沒有足夠的發(fā)酵參數(shù)來保證發(fā)酵的效果。雖然我國在20世紀90年代后就開始認識并研究發(fā)酵飼料(何謙，2007)，但國內(nèi)仍缺少有關(guān)發(fā)酵液體飼料應用的實驗性報道。本試驗通過對生長豬飼喂乳酸菌發(fā)酵液體飼料來說明其對生長豬生長性能和糞中微生物的影響，為發(fā)酵液體飼料的推廣提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

本試驗按單因子多重復設計，將54頭平均體重(30.88±0.47)kg的杜長大三元雜交生長豬，隨機分為3個處理，每個處理3個重復，每個重復6頭豬。

1.2 試驗日糧

基礎日糧參照NRC(1998)豬營養(yǎng)需要配置，基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。3處理日糧分別為基礎日糧(對照組)、基礎日糧+水(NFLF)、基礎日糧+水+乳酸菌(FLF)。FLF只發(fā)酵基礎日糧中大料部分，厭氧環(huán)境下發(fā)酵24 h后再與4%預混料均勻混合，隨后立即飼喂。4%預混料和大料均不含任何抗生素和藥物，NFLF和FLF水料比均為1.6：1，菌液添加量為每千克基礎日糧添加1ml。

表1 日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3 試驗管理

試驗于2009年5月10日至2009年6月10日在中國農(nóng)業(yè)科學院試驗基地進行。每天8:00和16:00定時飼喂兩次，每次飼喂前將食槽內(nèi)余料清理干凈，自由飲水。

1.4 測定指標及方法

1.4.1 生長性能的測定

每天準確記錄各重復的采食量，以計算其全期平均采食量。試驗開始和結(jié)束時以重復為單位對每圈生長豬進行稱重，計算其平均日增重。通過全期的平均采食量和平均日增重計算全期的料肉比。

1.4.2 糞中微生物含量的測定

1.4.2.1 樣品采集

試驗第30 d早上，每個重復隨機選擇4頭健康生長豬進行糞樣收集，用50 ml滅菌離心管采集新鮮無污染糞樣，立即放入-20℃冰箱保存待測。

1.4.2.2 糞樣的稀釋

超凈臺內(nèi)取1 g糞樣于無菌試管內(nèi)，加入PBS緩沖液9 ml，用磁力振蕩器振蕩3～5 min，此液為10-1稀釋液，吸取1 ml此液于盛有9 ml無菌PBS緩沖液試管中進行10-2稀釋，振蕩3～4 min，并依次進行10-3～10-6倍稀釋。

1.4.2.3 接種及培養(yǎng)

大腸桿菌：糞樣 10-3～10-6稀釋液 10 μl接種于伊紅美藍(EMB)培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設3個重復)，37℃有氧培養(yǎng)24 h后進行菌落計數(shù)。

乳酸菌：糞樣10-3～10-6稀釋液10 μl接種于乳酸菌選擇性培養(yǎng)基 (MRS)平皿上 (各稀釋度設3個重復)，37℃厭氧培養(yǎng)48 h后進行菌落計數(shù)。

沙門氏菌：糞樣 10-1～10-4稀釋液 10 μl接種于SS瓊脂培養(yǎng)基平皿上(各稀釋度設3個重復)，37℃有氧培養(yǎng)24 h后進行菌落計數(shù)。

1.5 統(tǒng)計與方法

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS統(tǒng)計軟件anova one-way過程進行單因素的方差分析，LSD多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 FLF對生長豬生長性能的影響（見表2）

從表2可知，F(xiàn)LF組與對照組相比日增重提高了34.03%(P＜0.05)、采食量提高了 12.55(P＜0.05)、料肉比降低了15.84%(P＜0.05)。NFLF組與對照組相比日增重提高了14.69%(P＜0.05)、采食量提高了20.29%(P＜0.05)、料肉比提高 4.99%(P＞0.05)。FLF 與 NFLF 相比日增重提高了16.86%(P＜0.05)、采食量降低了6.44%(P＞0.05)、料肉比降低了 19.83%(P＜0.05)。

表2 FLF對生長豬生長性能的影響

2.2 FLF對生長豬糞中微生物的影響（見表3）

從表3中可以看出，F(xiàn)LF組與對照組相比，糞中乳酸菌數(shù)量顯著提高，差異顯著(P＜0.05)、大腸桿菌數(shù)量顯著降低(P＜0.05)、沙門氏菌數(shù)量顯著降低，差異顯著(P＜0.05)；NFLF組與對照組相比，糞中乳酸菌數(shù)量顯著提高，差異顯著(P＜0.05)，大腸桿菌和沙門氏菌有下降的趨勢，但差異不顯著(P＞0.05)；FLF組與NFLF組相比，糞中乳酸菌數(shù)量提高25.25%(P＜0.05)、大腸桿菌下降了31.68%(P＜0.05)、沙門氏菌下降了40.21%(P＜0.05)。

表3 FLF對生長豬糞中微生物的影響(log10 CFU/g鮮內(nèi)容物)

3 討論

王蔚淼等(2008)報道，微生物在發(fā)酵過程中可消除部分植物性原料中的抗消化因子和抗營養(yǎng)因子等不良因子；原料中的大分子被降解為小分子，有利于對飼料的消化和吸收，改善動物的生長性能。安永福(1995)、代永剛等(2009)報道，乳酸菌可分解食物中的蛋白質(zhì)、糖類、對脂肪也有微弱的分解能力，能促進食物的消化吸收，產(chǎn)生對風味起決定性作用的芳香類物質(zhì)，提高飼料適口性。

從表2的試驗結(jié)果可以看出，F(xiàn)LF明顯改善了生長豬的生長性能。與Canibel(2003)試驗結(jié)果不完全一致，Canibel對60只平均體重30.7 kg的生長豬試驗結(jié)果表明，F(xiàn)LF較非發(fā)酵液體飼料(NFLF)和顆粒飼料對生長豬生產(chǎn)性能沒有影響。究其原因，可能是由于飼料的過度發(fā)酵，導致了飼料中碳水化合物的大量消耗，且產(chǎn)生大量乙酸等發(fā)酵副產(chǎn)物，使液體發(fā)酵飼料適口性降低，從而導致采食量的下降(N.Canibel等，2003)。也可能與發(fā)酵菌種有關(guān)，陳文斌(2004)報道，菌種的好壞將直接影響發(fā)酵液體飼料的飼喂效果。Scholten等(2001)發(fā)現(xiàn)，生長育肥豬飼料發(fā)酵72 h會導致飼料中淀粉等碳水化合物的減少，從而影響生長育肥豬采食量及生長性能。N.Canibel等(2007)、Brooks P H等(2001)報道，液體發(fā)酵飼料在發(fā)酵過程中有25%～28%的賴氨酸被大腸桿菌轉(zhuǎn)化為尸氨，高水平的尸氨等生物氨可能會降低發(fā)酵液體飼料的適口性，影響生長豬生長性能。

本試驗中，乳酸菌液體發(fā)酵飼料顯著提高了乳酸菌含量(P＜0.01)，顯著降低了糞中大腸桿菌(P＜0.01)和沙門氏菌含量 (P＜0.05)，這與許多研究結(jié)果一致。Jensen 等 (1998)、N.Canibel等 (2003)、H?jberg O 等(2003)研究表明，飼喂發(fā)酵液體飼料能顯著降低小腸后部、盲腸和結(jié)腸中大腸桿菌的數(shù)量，從而使大腸桿菌的隱性感染率大幅降低，具有較好的抑菌效果。Van Winsen等(1997、2001)給豬飼喂植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)發(fā)酵飼料也得到了相似的結(jié)果。同時Brooks(1999)指出，發(fā)酵液體飼料能把后腸大腸桿菌的濃度降低到2 log cfu/g。這是因為乳酸菌發(fā)酵過程中產(chǎn)生乳酸、乙酸和其它揮發(fā)酸，使腸道pH值降低，提高酸度從而對豬胃酸度及腸道產(chǎn)生影響,阻止致病菌在腸道的生長和繁殖(倪耀娣等，2004；陳文斌等，2004)。此外，王金全(2005)報道，動物腸道內(nèi)的微生態(tài)系統(tǒng)存在著一種菌群平衡關(guān)系，如果某一種菌群大量繁殖，勢必會對其他種群的生長產(chǎn)生競爭和影響，甚至抑制其他菌群的生長,說明了豬采食富含活性乳酸菌的發(fā)酵液體飼料后糞中大腸桿菌和沙門氏菌減少的另一種原因。

4 結(jié)論

乳酸菌發(fā)酵液體飼料較傳統(tǒng)干料和濕拌料，可顯著提高生長豬日增重、顯著降低料肉比、對采食量影響不明顯；可顯著提高生長豬糞中乳酸菌含量、顯著降低糞中大腸桿菌和沙門氏菌含量。

[1]安永福.淺談乳酸菌及其特點[J].中國奶牛，1995(5)：50～51.

[2]陳文斌，艾薇.發(fā)酵液體飼料——一種新型飼料的應用研究[J].飼料研究，2004(3)：27-29.

[3]陳文斌，艾薇.發(fā)酵液體飼料應用研究進展[J].中國飼料，2004(9)：8-9.

[4]代永剛，田志剛，南喜平.乳酸菌及其生理功能研究進展[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·學刊，2009（7）：24-27.

[5]何謙，郭進超，李巖，等.發(fā)酵液體飼料在斷奶仔豬的應用進展[J].養(yǎng)豬，2007（5）：5-7.

[6]李軍，張日俊.發(fā)酵液體飼料的研究進展[J].國外畜牧科技，2001（6）：21-23.

[7]王金全，蔡輝益，周巖華，等.小麥日糧非淀粉多糖和木聚糖酶對肉仔雞腸道微生物區(qū)系的影響[J].畜牧獸醫(yī)學報，2005，36(10)：1014-1021.

[8]王金全，周巖華，蔡輝益.國際豬液體飼喂研究進展[J].養(yǎng)豬，2009（4）：11-14.

[9]王蔚淼，張家學，齊振雄.乳酸菌類微生態(tài)制劑在飼料中的應用[J].飼料博覽·技術(shù)版，2008（7）：8-11.

[10]倪耀娣，李睿文，張慶茹，等.活菌制劑對肉仔雞盲腸微生物數(shù)量的影響[J].中國獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2004（4）：44-45.

[11]朱新貴，林捷.幾種食品微生物降解黃曲霉毒素作用的研究[J].食品科學，2001（10）：65-67.

[12]Brooks P H，Beal J D，Niven S.Liquid feeding of pigs:potential for reducing environmental impact and for improving productivity and food safety[J].Recent Adv.Anim.Nutr.Austr，2001，13：49-63.

[13]Brooks P H.Effect on weaner pig performance and diet microbiology of feeding a liquid diet acidified to pH 4 with either lactic acid or through fermentation with Pediococcus acidilactici[J].Joumal of the Science of Food and Agriculture，1999，79：633-640.

[14]Carlson D，Poulsen H D.Phytate degradation in soaked and fermented barley and wheat(preliminary studies)[J].Nordic Agric Res.,1999,81：278-283.

[15]Carlson D，Poulsen H D.Phytate degradation in soaked and fermented liquid feed-effect of diet，time of soaking，heat treatment，phytase activity，pH and temperature[J].Animal Feed Science and Technology，2003，103：141-154.

[16]Jensen B B,Mikkelsen L L.Feeding liquid diets to pigs[A]//Gamsworthy P C，Wiseman J.Recent Advance in Animal Nutrition[M].Nottingham：Nottingham University Press，1998，127-136.

[17]N.Canibe，O.H?jberg J H.Badsberg,B.B.Jensen.Effect of feeding fermented liquid feed and fermented grain on gastrointestinal ecology and growth performance in piglets[J].Journal of animal science，2007，85：2959-2971.

[18]N.Canibe，Jensen B B.Fermented and nonfermented liquid feed to growing pigs：Effect on aspects of gastrointestinal ecology and growth performance[J].Journal of animal science，2003，81：2019-2031.

[19]Ole H?jberg，N.Canibe，B.Knudsen,et al.Potential rates of fermentation in digesta from the gastrointestinal tractof pigs:Effect of feeding fermented liquid feed[J].Applied and environmental microbiologe，2003，69：408-418.

[20]Plumed-Ferrer C，LLopis M，Hyvonen P,et al.Characterization of the microbial community and its changes in liquid piglet feed formulations[J].Journal of the Science of Food and Agriculture，2004，84：1315-1318.

[21]Scholten R.Fermentation of liquid diets for pigs.Ph.D.Diss，Wageningen Univ，Wageningen，The Netherlands.2001.

[22]Van Winsen R L，Urlings H A P，Snijders J M A.Feed as a vehiculum of Salmonella in pigs//Bech-Nielsen S，Nielsen J.P(Eds).Proceedings of the Second International Symposium on Epidemiology and Control of Salmonella in Pork[J],Copenhagen,Denmar，1997，157-159.

[23]Van Winsen R L，Lipman L J A，Biesterveld S,et al.Mechanism of Salmonella reduction in fermented pig feed[J].Journal of the Science of Food and Agriculture，2001，81：342-346.