郭 卉，董瑤佳，劉曉峰，陳雪禮

(1、九江市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西 九江332000；2、九江市婦幼保健醫(yī)院，江西 九江 332000)

乙型肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的傳染病，由乙型肝炎病毒感染引起。我國是乙型肝炎病毒感染高發(fā)地區(qū)，乙肝病毒攜帶者數(shù)量眾多。本研究旨在探討乙肝血清學(xué)標(biāo)志物與HBV-DNA含量之間的關(guān)系，了解本地區(qū)乙肝感染情況，為乙肝病情的臨床判別和療效評估提供理論參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2009年1月至2009年12月在江西省九江市第一人民醫(yī)院門診及住院的患者，要求于一周內(nèi)進(jìn)行乙肝五項(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及 HBVDNA檢驗，共選取1020例，年齡8～85歲，其中男652例，女368例。

1.2 觀察指標(biāo) 乙肝五項：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb；HBV-DNA 含量。

1.3 檢測儀器 科華ST-360酶標(biāo)儀(上海科華試驗科技有限公司)；DNX-9620洗板機(jī)(北京普朗新技術(shù)有限公司)；DA-7600 PCR擴(kuò)增熒光定量檢測儀(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司)。

1.4 檢測試劑 乙肝標(biāo)志物檢測試劑由北京萬泰生物有限公司提供；HBV-DNA檢測試劑由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。

1.5 檢測方法

1.5.1 乙肝五項檢測(ELISA法)

1.5.2 HBV-DNA含量檢測(熒光定量PCR法)。DNA提?。何⊙?0μl至5ml離心管中，再加入40μl DNA提取液，充分混勻，沸水浴10min(誤差不超過1min)，轉(zhuǎn)至4℃靜置6～8h，10000r/min離心5min；取上清液 5μl進(jìn)行 PCR反應(yīng)。 擴(kuò)增：將點好樣的PCR管置于PCR儀，93℃2min預(yù)變性，然后按 93℃ 45s→55℃60s，反應(yīng) 10個循環(huán)，再按 93℃30s→55℃45s反應(yīng)30個循環(huán)。每批PCR試驗均做陰、陽性對照、臨界陽性。檢測靈敏度為≥0～500IU/ml，參考范圍0～500IU/mL。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，多組數(shù)據(jù)之間的比較采用K-W檢驗，兩組數(shù)據(jù)之間采用SNK檢驗，HBeAg陽性和HBV-DNA陽性的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)。

2 結(jié)果

2.1 乙肝血清學(xué)標(biāo)志物與HBV-DNA的關(guān)系

將乙肝五項檢測結(jié)果分為六組。A：全陰；B：HBsAb(+)；C：HBsAg+HBeAg(+)；D：HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)；E：HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)；F：HBsAg+HBcAb(+)。

從表1中可以看出HBsAg+HBeAg(+)組和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)組的HBV-DNA陽性檢出率和HBV-DNA平均含量均明顯高于其他各組。經(jīng)K-W檢驗對各組HBVDNA含量進(jìn)行比較，得出HBsAg+HBeAg(+)組和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)組與其他各組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。

表1 乙肝血清學(xué)標(biāo)志物和HBV-DNA的關(guān)系

2.2 HBeAg陽性與HBV-DNA陽性的關(guān)系

采用Spearman等級相關(guān)計算HbeAg(+)與HBV-DNA檢測率的相關(guān)性， 相關(guān)系數(shù) γ 為 0.805，P＜0.05，Kappa值為0.408。說明HbeAg(+)和HBV-DNA(+)的相關(guān)性較強。

3 討論

從本次調(diào)查分析結(jié)果可以看出，HBsAg+HBeAg(+)和HBsAg+HBeAg+HBcAb(+)兩組的HBV-DNA陽性率明顯高于其他各組，HBV-DNA平均含量也高于其他各組，并且這兩組的HBV-DNA含量與其他各組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，這說明 HBsAg+HBeAg(+)與 HBsAg+HBeAg+HB-cAb(+)患者HBV-DNA具有較高的復(fù)制水平，是具有傳染性的重要標(biāo)志。同時，通過分析HBeAg陽性和HBV-DNA陽性相關(guān)性，可以得出這兩者有著很好的一致性(P＜0.001)。在本次分析過程中發(fā)現(xiàn)有4例HBV-DNA檢測結(jié)果為陰性但HBeAg檢測為陽性，這可能是由于患者體內(nèi)的HBV-DNA含量已經(jīng)很低，而之前表達(dá)的HBeAg尚未被完全降解，仍處于較高的水平；也有可能與HBeAg檢測的試劑質(zhì)量相關(guān)。

表2 HBeAg和HBV-DNA檢測陽性檢出率比較

HBsAg+HBeAb+HBcAb(+)組和 HBsAg+HBcAb(+)組的HBV-DNA陽性檢出率分別為43.38﹪和59.62﹪，HBV-DNA的平均含量分別為5.75E+05和1.96E+06，這說明當(dāng)患者HBsAg和HBcAb為陽性、HBeAg為陰性時，無論HBeAb是否為陽性仍有HBV-DNA陽性檢出，說明仍有HBV存在或復(fù)制，因此HBeAg陰性并不能代表病毒停止復(fù)制或病情好轉(zhuǎn)，可能是此種情況下病毒復(fù)制水平較低。

在乙肝五項全陰組中，有7例HBV-DNA陽性，陽性檢出率為11.67﹪，出現(xiàn)這種情況可能的原因是：⑴HBV發(fā)生前C區(qū)基因突變或機(jī)體發(fā)生特異性免疫耐受[3]；⑵ELISA法敏感性較低，在患者感染初期HBV-DNA含量較低，而FQ-PCR法檢測的靈敏度較高，因而應(yīng)用ELISA法無法測出；⑶HB-sAg已清除，但HBV-DNA仍持續(xù)存在[4]。

在單獨HBsAb陽性組中有4例HBV-DNA陽性檢出，陽性率為7.25%，分析其原因可能為：⑴可能存在其他HBV變異型感染[5]；⑵長期多次反復(fù)小劑量接觸HBV未見或少見發(fā)病，而出現(xiàn)HBsAb陽性，但體內(nèi)仍可存在低拷貝的HBV顆粒。⑶與全陰組的情況相同，HBsAg已清除，但HBV-DNA仍持續(xù)存在。

從本文的分析可以看出，乙肝五項各模式分組中HB-sAg＋HBeAg(陽性)與 HBsAg＋HBeAg＋HBcAb(陽性)組患者的HBV-DNA檢出率及HBV-DNA平均含量最高；HBeAg陽性和HBV-DNA陽性有較高的相關(guān)性。因此綜合分析乙肝血清學(xué)標(biāo)志物與HBV-DNA含量之間的關(guān)系有助于臨床上更好地了解患者的病情及判斷治療效果。

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