王麗萍，段曉穎，孫廣科

(河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院藥學(xué)部，河南 鄭州 450000)

復(fù)方牛蒡子含片由牛蒡子、金銀花、牡丹皮等組方，具有疏風(fēng)散熱、解毒散結(jié)、消腫利咽等功效，主治急、慢性咽喉炎所致咽部疼痛、咽干、咽部異物感。筆者根據(jù)其功能主治，對(duì)其體外抑菌作用進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

SXK-103型超凈工作臺(tái)(安徽省蚌埠凈化設(shè)備廠);RCO-3000TVBB型CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)熱電)。復(fù)方牛蒡子含片(由河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院提供，批號(hào)為070621，每g含原生藥3.57 g);咽炎含片(河北國(guó)金藥業(yè)有限公司，批號(hào)為0802131，每片相當(dāng)于原生藥 2.69 g);肺炎鏈球菌 (31001-9a)、乙型溶血性鏈球菌(32210-4a)凍干菌粉均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供;金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26-003]、大腸埃希菌[CMCC(B)44102]斜面保存菌種由河南省食品藥品檢驗(yàn)所提供;營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基(批號(hào)為060322)、血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基(批號(hào)為070720)、pH=7.0氯化鈉-蛋白胨水緩沖液(批號(hào)為 060426)、營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(批號(hào)為060330)均由北京三藥科技開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn);無(wú)菌脫纖維羊血(批號(hào)為080725，青島綠谷國(guó)際商貿(mào)有限公司)。

2 方法與結(jié)果[1-2]

2.1 菌液與藥物配制

2.1.1 菌種復(fù)壯

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌株接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，(35±1)℃培養(yǎng)20 h。取肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌菌株接種于10%無(wú)菌脫纖羊血肉湯培養(yǎng)基中，并于CO2培養(yǎng)箱中(35±1)℃培養(yǎng)20 h。

2.1.2 菌液活菌數(shù)計(jì)算

取經(jīng)復(fù)壯增菌培養(yǎng)的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌菌懸液1 mL，用無(wú)菌生理鹽水按 1 ∶10 倍比分別稀釋至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，分別取各稀釋級(jí)菌液 0.1，0.2，0.5 mL，均勻涂布于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，(35±1)℃培養(yǎng)20 h，確定最終使用的菌液稀釋級(jí)與加菌液量:大腸埃希菌的稀釋級(jí)為10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量134 CFU/0.2 mL，金黃色葡萄球菌的稀釋級(jí)為10-5，加菌量0.1 mL，平均含活菌量236 CFU/0.1 mL。按上述方法將肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌分別稀釋至 10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6，10-7，10-8，均勻涂布于血瓊脂平板(含10%無(wú)菌脫纖羊血)上，(35±1)℃培養(yǎng)20 h，確定最終使用的菌液稀釋級(jí)與加菌液量:肺炎鏈球菌的稀釋級(jí)為10-5，加菌量0.2 mL，平均含活菌量106 CFU/0.2 mL;乙型溶血性鏈球菌稀釋級(jí)為10-6，加菌量0.2 mL，平均含活菌量80 CFU/0.2 mL。

2.1.3 藥物配制

稱取復(fù)方牛蒡子含片適量，以pH=7.0的氯化鈉-蛋白胨水緩沖液為稀釋劑，依次制成含生藥質(zhì)量濃度分別為2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的藥液;稱取咽炎含片適量，按以上述方法配制成含生藥質(zhì)量濃度依次為2 500，2 000，1 000，500，250，125，62.5，31.25，15.63，7.82 g/L 的藥液。

2.1.4 含藥平皿制備

分別取上述供試品藥液2 mL，加入無(wú)菌平皿內(nèi)，立即加入溫度為45～50℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基18 mL，即刻搖勻，供檢測(cè)大腸埃希菌及金黃色葡萄球菌試驗(yàn)用;分別取上述供試品藥液2 mL，加入血瓊脂培養(yǎng)基(含10%無(wú)菌脫纖羊血)18 mL，即刻搖勻，供檢測(cè)肺炎鏈球菌及乙型溶血性鏈球菌試驗(yàn)用;則制成的平皿中含生藥質(zhì)量濃度依次為 200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L 的復(fù)方牛蒡子含片含藥平皿。取咽炎含片按上述方法制備含藥平皿，則各平皿的最終質(zhì)量濃度分別為 250，200，100，50，25，12.5，6.25，3.12，1.56，0.78 g/L(含生藥質(zhì)量濃度)。

2.2 菌株接種與培養(yǎng)

分別將稀釋各菌液均勻涂布于不同質(zhì)量濃度的含藥平皿內(nèi);另設(shè)不含藥物上述各菌種對(duì)照平皿，不接種菌液的各藥物對(duì)照平皿，及不含藥物的空白對(duì)照平皿，均置(35±1)℃培養(yǎng)20 h。結(jié)果不含藥物的各菌種對(duì)照平皿中，陽(yáng)性菌生長(zhǎng)良好;不接種菌液的各藥物對(duì)照皿和空白對(duì)照皿均無(wú)菌生長(zhǎng);含藥平皿中菌落形態(tài)與陽(yáng)性對(duì)照平皿相同。以平皿內(nèi)無(wú)某一菌株生長(zhǎng)的最低藥物濃度為該藥物對(duì)某一菌株的最低抑菌濃度(MIC)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方牛蒡子含片體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

選擇引起急性咽炎的常見(jiàn)致病菌進(jìn)行抑菌試驗(yàn)[3]，結(jié)果表明，復(fù)方牛蒡子含片對(duì)肺炎鏈球菌、乙型溶血性鏈球菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌抑菌作用均好于咽炎含片，其中對(duì)金黃色葡萄球菌高度敏感，較咽炎含片抑菌效果尤為顯著。

牛蒡苷、苷元及牛蒡子水煎液在體外對(duì)金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌等8種細(xì)菌有較明顯的抑菌作用[4]。而復(fù)方牛蒡子含片中牛蒡子作為一種較好的抑菌中藥，在其他藥物的協(xié)同作用下，對(duì)急性咽炎常見(jiàn)病菌均有不同程度的抑菌作用，這為本品治療急性咽炎提供了依據(jù)。

[1]陳 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:262-264.

[2]徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:1 647-1 663.

[3]謝秀瓊.中藥新制劑開(kāi)發(fā)與應(yīng)用[M].第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2006:675.

[4]李大亮，宋 楊，周慧華，等.牛蒡子水煎液及牛蒡苷、牛蒡苷元體外抗菌實(shí)驗(yàn)研究 [J].黑龍江醫(yī)藥，2004，17(6):433-436.