陳 瓊 ，石國(guó)明 ，孔 泉 ，梁利香

（1.河南信陽(yáng)農(nóng)業(yè)高等專(zhuān)科學(xué)校，河南 信陽(yáng) 464000； 2.河南羚銳制藥股份有限公司，河南 信陽(yáng) 464000）

結(jié)石康膠囊為河南羚銳制藥股份有限公司生產(chǎn)的中藥三類(lèi)新藥，由三葉青、廣金錢(qián)草等14味藥材精制而成，具有清熱利濕、益氣活血、利尿排石的功效，用于治療腎、輸尿管或膀胱的小結(jié)石等。其有效成分延胡索乙素原標(biāo)準(zhǔn)中含量測(cè)定方法為薄層掃描法，檢測(cè)周期長(zhǎng)，檢測(cè)誤差大。為此，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)結(jié)石康膠囊中延胡索乙素的含量測(cè)定方法進(jìn)行了研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司），包括VWD紫外檢測(cè)器，Agilent化學(xué)工作站。延胡索乙素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110726-200409）；乙腈為色譜純，水為純化水，磷酸為分析純；結(jié)石康膠囊（河南羚銳制藥股份有限公司，批號(hào)分別為070812、070813、070814，規(guī)格為0.38 g/粒）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[1]與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：XDB-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：乙腈-0.1%磷酸（用三乙胺調(diào)pH=6.0，35∶65）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；進(jìn)樣量：20 μL。理論塔板數(shù)按延胡索乙素峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000，色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

精密稱(chēng)取延胡索乙素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含30 μg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取樣品內(nèi)容物2 g，精密稱(chēng)定，加5%的氫氧化鈉溶液40 mL，超聲處理30 min，放冷，移入分液漏斗中，殘?jiān)?0 mL水分?jǐn)?shù)次洗滌，移入分液漏斗中，然后用乙醚振搖提取4次，每次20 mL，合并乙醚液，揮去乙醚，殘?jiān)眉状挤执稳芙猓蛹状级ㄈ葜? mL，濾過(guò)，即得供試品溶液。按處方取不含延胡索的其他藥物，按制備工藝制成陰性樣品，同法制備陰性對(duì)照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線建立[2]：取對(duì)照品溶液稀釋至一定質(zhì)量濃度，進(jìn)樣量分別為 0.087 2，0.261 6，0.436 0，0.872 0，1.046 4 μg。以對(duì)照品的進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)、峰面積值為縱坐標(biāo)作圖?；貧w方程為 Y=1 066.748 9 X-11.562 3，r=0.999 8（n=5）。結(jié)果表明延胡索乙素進(jìn)樣量在0.058 5～0.585 0 μg之間與峰面積線性關(guān)系良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)樣品，依法測(cè)定。結(jié)果含量的 RSD=0.66%（n=6），表明方法重現(xiàn)性良好。

精密度試驗(yàn)：取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果峰面積積分值的 RSD=0.26%（n=6），表明精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，每隔一定時(shí)間測(cè)定1次。結(jié)果峰面積積分值的 RSD=0.37%，表明供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的樣品約2 g，精密稱(chēng)定，分別精密加入高、中、低3個(gè)水平的延胡索乙素對(duì)照品溶液各2份，按供試品溶液制備溶液并測(cè)定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 延胡索乙素加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取3個(gè)批號(hào)樣品，依法制備溶液并測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為070812，070813，070814的樣品中延胡索乙素含量分別為 0.063，0.065，0.066 mg/粒。

3 討論

HPLC法處理樣品簡(jiǎn)便、快捷，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。試驗(yàn)結(jié)果表明，本法可用于結(jié)石康膠囊產(chǎn)品質(zhì)量控制。

[1]杜志謙，李根林.薄層掃描法測(cè)定骨痹貼中延胡索乙素的含量[J].中成藥，2003，25（10）：862.

[2]于立芬，鄭世光.數(shù)理統(tǒng)計(jì)方法[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998：142-144.