付凌燕，李亞榮

(吉林省吉林市食品藥品檢驗(yàn)所，吉林 吉林 132001)

救爾心膠囊由三七、川芎、紅花、丹參、澤瀉、刺五加6味中藥制成，具有活血通脈、化瘀生新的功效，臨床用于治療冠心病、心絞痛[1]，療效良好。處方中丹參具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的作用，原兒茶醛是其主要有效成分，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有化學(xué)鑒別和薄層鑒別。為更好地控制制劑質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定了救爾心膠囊中原兒茶醛的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC－2010 A型高效液相色譜儀，CLASS－VP色譜工作站。原兒茶醛對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)為110810－200506，中國(guó)藥品生物制品檢定所);救爾心膠囊(吉林百姓堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)分別為 20080101，20080503，20080801，規(guī)格為 0.45 g/粒);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Phenomenex C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:甲醇－1%醋酸溶液(12∶88);檢測(cè)波長(zhǎng):279 nm;流速:0.8 mL/min;柱溫:24℃。理論板數(shù)按原兒茶醛峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

2.2 溶液制備

精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥12 h以上的原兒茶醛對(duì)照品適量，加甲醇制成0.099 9 g/L的對(duì)照品貯備液;再精密量取對(duì)照品貯備液適量，加甲醇制成9.990 μg/mL的對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的樣品內(nèi)容物約3.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25 mL，蒸干，殘?jiān)盟?0 mL溶解，再用稀鹽酸調(diào)pH至2，乙醚提取4次，每次10 mL，合并乙醚提取液，揮干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[2]。取處方中除丹參外的其余藥材，按1/10處方量依法制成膠囊，再按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):分別精密吸取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(圖1)。由圖1可見(jiàn)，供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，表明方法可行。

線性關(guān)系考察:精密吸取原兒茶醛對(duì)照品貯備液(質(zhì)量濃度為 0.099 9 g/L)適量各5份，分別置50 mL量瓶中，用甲醇定容，配成質(zhì)量濃度分別為 1.998，4.995，9.990，14.985，19.980 μg/mL 的溶液，搖勻，用 0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾。精密吸取續(xù)濾液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)量峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得原兒茶醛回歸方程 A=56 696.40 C － 1 888.48，r=1.000 0(n=5)。結(jié)果表明，原兒茶醛質(zhì)量濃度在 1.998～19.980 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

圖1 高效液相色譜圖

精密度試驗(yàn):精密吸取原兒茶醛對(duì)照品溶液(9.990 μg/mL)10 μL，重復(fù)進(jìn)樣 5次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.3%(n=5)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，于 0，4，8，12，24 h 時(shí)分別進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果的 RSD為0.9%(n=5)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取批號(hào)為20080101的樣品5份，依法制備供試品溶液并測(cè)定。結(jié)果原兒茶醛含量的 RSD為0.6%(n=5)，表明方法重復(fù)性較好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為20080101，原兒茶醛含量為8.596μg/mL，平均粒重0.4564 g/粒)適量，共6份，分別精密加入低、中、高3種不同質(zhì)量濃度的原兒茶醛對(duì)照品溶液適量，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測(cè)定[3]。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 原兒茶醛加樣回收試驗(yàn)(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，測(cè)定3批樣品的原兒茶醛峰面積，按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果批號(hào)為20080101，20080503，20080801的3批樣品，平均粒重分別為 0.456 4，0.452 1，0.453 3 g，平均含量分別為 22.49，21.38，20.93 μg/粒(n=5)。

3 討論

3批樣品中原兒茶醛含量測(cè)定結(jié)果為最高22.49 μg/粒，最低20.93 μg/粒，綜合考慮后確定限量為每粒含原兒茶醛不低于15 μg。試驗(yàn)中比較了體積比均為12∶88的流動(dòng)相，即甲醇－0.2 mol/L醋酸銨(用硫酸調(diào)pH至2.2)[4]和甲醇－1%醋酸溶液，結(jié)果表明，用甲醇－1%醋酸溶液(12∶88)時(shí)，色譜圖基線較穩(wěn)，分離效果較好。

本方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性及回收率均理想，可以作為該制劑的質(zhì)量控制方法。

[1]WS3－B－1629－93，衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第八冊(cè))[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:327－328.

[3]王維禮，付 利，程曉英，等.高效液相色譜法測(cè)定咽炎片中沒(méi)食子酸含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17(11):30－31.

[4]WS3－B－3766－98，衛(wèi)生部頒藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑第二十冊(cè))[S].