程麗梅,于秀華,付 春,張永和
(1.長春市人民醫(yī)院,吉林長春130061;2.長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院,吉林長春130021)
五味子是民間常用的中藥,具收斂固澀,益氣生津,補腎寧心功效,藥用價值較高。其主要化學成分為木脂素、揮發(fā)油、苯甲酸等。本文以五味子醇中含量為指標,采用正交試驗設計法,研究五味子軟膠囊提取的最佳工藝。
1.1 藥材 五味子:經長春中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院新藥中心鑒定符合《中國藥典》2005年版一部[2]的規(guī)定,為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實。
1.2 儀器 LC-20AT型高效液相色譜儀(日本島津),SPD-10Avp紫外檢測器,UV-3000型紫外分光光度儀。
1.3 試藥 五味子醇甲對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號:857-200102及110857-200406,供含量測定用),甲醇為色譜純,水為重蒸餾水,其他試劑均為分析純。
2.1 原料的篩選 五味子全果50 g,用水冷浸,挫去果肉,分出種子,干燥,分別稱定種子和果肉重量,另取五味子全果50 g,將上述3種藥材分別搗碎,過20目篩,加3倍體積的乙醇加熱回流3次,每次2 h,過濾,提取液適當濃縮,定容于50 mL量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,精密吸取各提取液1~25 mL量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,即得。采用高效液相色譜法測定各提取物中五味子醇甲的含量。
2.1.1 對照品溶液的制備 取五味子醇甲對照品約10 mg,精密稱定為 13.16 mg,置10 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 mL,置10 mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得(每1 mL含五味子醇甲0.1316 mg)。
2.1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇-水(65∶35)為流動相;檢測波長為250 nm。理論板數按五味子醇甲峰計算應不低于5000。
2.1.3 線性關系的考察 精密吸取對照品溶液2,5,10,15,20,25 μ L按上述色譜條件分別注入液相色譜儀,測定峰面積,則回歸方程為:Y=2008655.21X-21546.49,γ=0.9999,線性范圍:0.2632~ 3.290 μ g。
2.1.4 供試品溶液的制備 取上述3種粉末各約0.25 g,分別精密稱定,置20 mL量瓶中,加甲醇約18 mL,超聲處理(功率 250 W,頻率 40 kHz)20 min,取出,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得。
2.1.5 測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀,測定,即得。因此五味子軟膠囊的原料采用五味子的種子。
2.2 以五味子醇甲含量為指標優(yōu)選最佳工藝 采用正交試驗法優(yōu)選乙醇回流提取最佳工藝。考查指標:出膏率和五味子醇甲含量。考查因素:按L9(34)正交試驗表(表1)試驗條件進行乙醇回流提取,濾過,濃縮,分別定容于50 mL量瓶中,作為樣品溶液。
分別精密量取定容后的1~9號醇提樣品溶液各1 mL,置5 mL量瓶中,分別加適宜溶劑稀釋至刻度,搖勻,即得。分別精密吸取2.1.1項下的對照品溶液與上述供試品溶液各10 μ L,注入液相色譜儀,測定,即得(見表1-表3)。
表1 L9(34)正交試驗因素水平表
表2 正交試驗結果
表3 方差分析表
查表得F0.05(2,2)=19.00,F0.01(2,2)=99.00,因此B(回流次數)、D(加醇量)因素有極顯著性,且B3>B2>B1,D3>D2>D1,A因素(乙醇濃度)、C因素(回流時間)無顯著性,且A3>A1>A2,C3>C1>C2。即乙醇濃度、回流時間對該試驗無多大影響??紤]到實際生產成本及實際生產實踐經驗,確定最后工藝為:A2B3C3D3,即用6倍量90%乙醇,回流提取3次,時間為2,2,1 h。
2.3 最佳工藝的驗證實驗 為考察上述最佳工藝的可靠性,按該工藝條件進行驗證實驗,并按照前面實驗的方法測定樣品中五味子醇甲的含量,分別為16.2,16.6,15.8 mg/g生藥。測定結果說明,該工藝重復性好,確實為最佳的提取工藝。
五味子提取工藝考察指標有采用紫外分光光度法測定五味子醇甲[1],或采用高效液相色譜法測定五味子甲素含量的[2],本實驗參照中國藥典[3]采用高效液相色譜法測定五味子醇甲含量,提高了實驗精度。
[1]可成友,譚鳳華,邊薔,等.正交實驗法優(yōu)化五味子醇甲的提取工藝研究[J].山西中醫(yī),2009,25(4):40.
[2]潘新,劉霞,蔡敏芝.五昧子中五味子甲素的提取工藝研究[J].中成藥,2006,30(6):附2.
[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005:44.