陳雪磊，李炳勛，沈海林，陳啟光，張哲，畢建斌，孔垂?jié)?/p>

（中國醫(yī)科大學(xué) 附屬第一醫(yī)院泌尿外科，沈陽 110001）

肌成束蛋白（fascin）作為肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白家族中的一員，在近年來的研究中發(fā)現(xiàn)，其在許多上皮來源的腫瘤細(xì)胞系及腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，如乳腺癌、食管癌等，并與腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)［1］。Ki-67即細(xì)胞核相關(guān)抗原，是反映癌細(xì)胞的增殖活性的指標(biāo)，與腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預(yù)后高度相關(guān)［2］。本文通過觀察膀胱上皮癌中的fascin和Ki-67蛋白的表達(dá)，研究fascin與膀胱癌臨床病理指標(biāo)及Ki-67表達(dá)的關(guān)系，為膀胱癌中fascin的研究積累更多的資料。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集我院泌尿外科2007年9月至2008年7月的膀胱上皮癌手術(shù)標(biāo)本111例，同時(shí)收集患者相關(guān)臨床病理資料。全部病例中男性93例，女性18例?；颊吣挲g37~85歲，中位年齡66歲。42例正常膀胱上皮取自手術(shù)斷端，距腫瘤邊緣大于5 cm。所有患者均為初發(fā)病例，術(shù)前均未接受放化療。表1。

1.2 研究方法

采用免疫組織化學(xué)方法。所用單克隆抗人fascin抗體（克隆號55k-2）購自美國Millipore公司。Ki-67蛋白抗體、二抗試劑盒、DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 結(jié)果判定

所有切片蛋白表達(dá)的評價(jià)均由2名病理醫(yī)生在未知情的前提下各自獨(dú)立完成，遇到結(jié)果不統(tǒng)一時(shí)，兩名醫(yī)師共同討論綜合分析意見。fascin表達(dá)定位于癌細(xì)胞的胞質(zhì)中，在正常上皮血管內(nèi)皮細(xì)胞也有表達(dá)，呈棕黃色顆粒狀。fascin按照表達(dá)面積分為5組：無表達(dá)細(xì)胞（0）、表達(dá)的細(xì)胞數(shù)占切片總細(xì)胞數(shù)＜25%（1+）、25%~50%（2+）、50%~75%（3+）、＞75%（4+）。按照表達(dá)強(qiáng)度分為3組：用已確定為陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌標(biāo)本的反應(yīng)強(qiáng)度作為對照，弱于它（1+）、與其相同（2+）、表達(dá)比之強(qiáng)（3+）。每張切片最后fascin綜合表達(dá)情況用表達(dá)面積與表達(dá)強(qiáng)度的乘積表示，并分為 4 個(gè)級別：-（0）、+（1-4）、++（5-8）、+++（9-12）。Ki-67蛋白陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)：以細(xì)胞核成棕褐色彌漫狀或顆粒狀表現(xiàn)為陽性細(xì)胞。每張染色切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)算每個(gè)視野中陽性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比例，然后得到5個(gè)視野的平均值，陽性細(xì)胞所占比例＜20%為陰性、≥20%為陽性［3］，并分為不同等級：20%~50%（+）、50%~75%（++）、＞75%（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

fascin及Ki-67蛋白的表達(dá)與膀胱癌生物學(xué)行為的關(guān)系及兩種蛋白之間的相關(guān)性應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)分析。

2 結(jié)果

2.1 fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮和膀胱上皮癌中的表達(dá)

在111例手術(shù)患者中有42例取出正常膀胱上皮組織，其余因手術(shù)方式原因無法切取。在42例正常膀胱上皮組織中，fascin及Ki-67蛋白均未表達(dá)。在111例膀胱上皮癌標(biāo)本中fascin有94例呈陽性表達(dá)，表達(dá)陽性率為84.7%。Ki-67蛋白有92例呈陽性表達(dá)，表達(dá)陽性率為82.9%。fascin及Ki-67蛋白在正常膀胱上皮及膀胱上皮癌中的表達(dá)具有明顯的差異性（P＜0.01）。見圖 1，圖 2。

2.2 Ki-67蛋白在膀胱上皮癌標(biāo)本中的表達(dá)與膀胱癌生物學(xué)行為的相關(guān)性

Ki-67蛋白與腫瘤病理學(xué)分級（P=0.045）、臨床分期（P=0.048）、腫瘤大?。≒=0.032）具有相關(guān)性；與患者年齡（P=0.282）、性別（P=0.250）無相關(guān)性。這與目前的研究結(jié)果相一致［2］。

2.3 fascin的表達(dá)與膀胱癌生物學(xué)行為及Ki-67蛋白表達(dá)的相關(guān)性

fascin表達(dá)與年齡（P=0.329）、性別（P=0.339）及病理分級（P=0.380）均無相關(guān)性；與腫瘤臨床分期（P=0.001）及腫瘤大小具有正相關(guān)性（P=0.011）。通過分析，fascin及Ki-67蛋白在膀胱癌中的表達(dá)具有明顯的正相關(guān)關(guān)系（P=0.001）。見表1。

3 討論

膀胱癌作為泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)生率和死亡率均居泌尿系腫瘤的首位［4］。目前尋找與膀胱癌進(jìn)展及預(yù)后有關(guān)的分子標(biāo)志物，幫助膀胱癌的早期診斷，指導(dǎo)膀胱癌的治療，成為研究的熱點(diǎn)。fascin是一種分子量為55 kDa的細(xì)胞骨架蛋白，在人體組織中，fascin在乳腺癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、結(jié)腸癌、膽管癌等腫瘤組織中均出現(xiàn)高頻率的陽性表達(dá)，并與高腫瘤級別、高增殖分?jǐn)?shù)相關(guān)［5~7］。這些均提示fascin的上調(diào)表達(dá)在上皮腫瘤組織中可能具有組織特異性，并且與惡性腫瘤存在顯著的相關(guān)關(guān)系。

我們通過免疫組化方法研究了fascin在膀胱上皮癌中的表達(dá)。結(jié)果在我們這組數(shù)據(jù)中，fascin蛋白在膀胱上皮癌的陽性表達(dá)率為84.7%，與其在正常膀胱移行上皮中的表達(dá)具有明顯的差異性。此結(jié)果提示fascin在上皮組織來源的腫瘤中的高表達(dá)可能具有普遍性。以往的研究發(fā)現(xiàn)，不同組織來源的腫瘤fascin陽性表達(dá)率有明顯差異，在胰腺癌中陽性表達(dá)率為95%，非小細(xì)胞肺癌中的陽性率為89%，而乳腺癌中只有16%［1］。結(jié)合本次研究，可以看出fascin蛋白的表達(dá)與各腫瘤不同的發(fā)生機(jī)制可能存在相互聯(lián)系。

目前已經(jīng)證實(shí)，fascin在惡性腫瘤中的表達(dá)與腫瘤的病理學(xué)分級、臨床分期等具有正相關(guān)性，諸如食管癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌等［5~7］。在我們的研究中，同樣發(fā)現(xiàn)fascin的表達(dá)與膀胱癌的臨床分期、腫瘤大小有關(guān)。但與腫瘤的病理學(xué)分級無關(guān)，這可能與我們這組病例低度惡性腫瘤樣本量過少有關(guān)。但從fascin的表達(dá)程度來看，隨著腫瘤級別的增高，其高表達(dá)率也隨之增高。這些均提示在惡性腫瘤的發(fā)展過程中，fascin積極地參與了腫瘤的生長侵襲及惡性轉(zhuǎn)化。

表1 fascin在膀胱上皮癌中的表達(dá)及與膀胱癌生物學(xué)行為及Ki-67蛋白的關(guān)系Tab.1 The relation between the expression of fascin and pathological features in bladder carcinoma

Ki-67（細(xì)胞核相關(guān)抗原）作為在增殖細(xì)胞中表達(dá)的一種抗原，其表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)，是反映細(xì)胞增殖活性的指標(biāo)。目前已經(jīng)證實(shí)Ki67在膀胱癌中高表達(dá)，且與腫瘤細(xì)胞病理分級、臨床分期相關(guān)［8］，本次研究也證實(shí)了這點(diǎn)。通過本組病例，我們發(fā)現(xiàn)在膀胱癌中fascin與Ki-67蛋白具有明顯的正相關(guān)性。這說明了兩種基因可能存在某種相互作用調(diào)節(jié)關(guān)系，在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展中，出現(xiàn)高增殖和高運(yùn)動(dòng)性同時(shí)存在的現(xiàn)象。對于二者雙陽性的膀胱癌患者，可能具有更高的惡性程度及浸潤轉(zhuǎn)移能力，也預(yù)示著較差的預(yù)后，在臨床上需引起注意。

總之，fascin可以作為膀胱癌的一個(gè)分子標(biāo)志物，用作膀胱癌的早期診斷，其聯(lián)合Ki-67蛋白、腫瘤的病理分級和臨床分期可以更好的評價(jià)預(yù)后。至于其可否成為膀胱癌基因治療中一個(gè)新的靶點(diǎn)，需要更深入的研究。

［1］Chen SF，Lin CY，Chang YC，et al.Effects of small interfering RNAs targeting fascin on gene expression in oral cancer cells［J］.J Oral Pathol Med，2009，38（9）：722-730.

［2］Gentile V，Vicini P，Giacomelli L，et al.Detection of human papillomavirus DNA，p53 and ki67 expression in penilecarcinomas［J］.Int JImmunopathol Pharmacol，2006，19（1）：209-215.

［3］Popov Z，Hoznek A，Colombel M，et al.The prognostic value of p53 nuelear overexPression and MIB-1 asaproliferativemarker in transitional cell carcinomaof thebladder［J］.Cancer，1997，80（8）：1472-1481.

［4］Parkin DM，Bray F，F(xiàn)erlay J，et al.Global cancer statistics，2002［J］.CA Cancer JClin，2005，55（2）：74-108.

［5］Adams JC.Roles of fascin in cell adhesion and motility ［J］.Curr Opin Cell Biol，2004，16（5）：590-596.

［6］Kabukcuoglu S，Oner U，Ozalp SS，et al.Prognostic significance of fascin expression in endometrioid carcinoma［J］.Eur JGynaecol Oncol，2006，27（5）：481-486.

［7］鐘海俊，肖大偉.Fascin蛋白在腫瘤中的表達(dá)及其臨床應(yīng)用價(jià)值研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)綜述，2008，14（8）：1168-1170.

［8］Popov Z，Gil-Diez-De-Medina S，Ravery V，et a1.Prognostic value of EGF receptor and tumor cell proliferation in bladder cancer：therapeutic implications［J］.Urol Oncol，2004，22（2）：93-101.