趙瑞芝，焦玉紅，周莉玲（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室，廣州市 51010；.山東濰坊市金通醫(yī)藥有限公司，濰坊市 61000；.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣州市 510006）

復(fù)方虎杖膠囊由虎杖、龍膽等藥組成，具有活血化瘀、增強(qiáng)神經(jīng)功能康復(fù)等功效[1～7]，為廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院治療腦出血后神經(jīng)功能康復(fù)的有效制劑。由于服用量較大，故筆者在篩選有效部位的基礎(chǔ)上將其劑型改革為半固體骨架膠囊，可有效減少服用量，增強(qiáng)患者用藥依從性。為了控制產(chǎn)品質(zhì)量及進(jìn)行制劑質(zhì)量評(píng)價(jià)，筆者建立了復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊中4種主要有效成分大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷的含量測(cè)定方法。

1 儀器與試藥

CS9301型薄層掃描儀（日本島津公司）；半自動(dòng)點(diǎn)樣儀、自動(dòng)成像系統(tǒng)、自動(dòng)展開系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）；硅膠G（青島海洋化工廠）；預(yù)制薄層板（美國(guó)Merck公司）。

復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥制劑實(shí)驗(yàn)室自制，復(fù)方虎杖浸膏在70℃加入聚乙二醇6000等熔融，混合均勻，以注射器分裝于明膠硬膠囊中，即可）；大黃素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號(hào)：0756-200009）；白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品（美國(guó)Sigma公司，含量：99%，批號(hào)：111535-200502）；虎杖苷標(biāo)準(zhǔn)品（西安寶賽生物制品公司，含量：99%，批號(hào)：1535-2000）；龍膽苦苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，含量：98%，批號(hào)：0623-199967）；其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

分別取大黃素、白藜蘆醇、虎杖苷、龍膽苦苷對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)）品約2、4、8、7 mg，精密稱定，以無水乙醇分別定容于25、10、10、5 mL量瓶中，作為對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

取樣品10粒，除去膠囊殼，將內(nèi)容物混合。取內(nèi)容物約0.02 g，精密稱定，加無水乙醇5 mL，溶解洗滌，過濾，殘?jiān)詿o水乙醇反復(fù)洗滌至無色，合并洗滌液，水浴濃縮至干，以無水乙醇溶解定容于2 mL量瓶中，作為供試品溶液。

2.3 色譜分析條件

硅膠G薄層板；展開劑（1）：石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶1∶0.7∶0.03）；展開劑（2）：氯仿-甲醇（7∶2）。展開劑（1）可使大黃素、白藜蘆醇與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長(zhǎng)293 nm）見圖1。展開劑（2）可使龍膽苦苷、虎杖苷與其它成分基線分離，薄層掃描圖（掃描波長(zhǎng)270 nm）見圖2。掃描方式：反射式線性掃描，SX＝3；檢測(cè)波長(zhǎng)：大黃素為285 nm，白藜蘆醇為293 nm，龍膽苦苷為270 nm，虎杖苷為313 nm。

2.4 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品，分別點(diǎn)樣0.5、1、2、3、4、5 μL，大黃素、白藜蘆醇以展開劑（1）展開，龍膽苦苷、白藜蘆醇以展開劑（2）展開，分別掃描，得對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線：大黃素為A＝105.65X+2.16（r＝0.999），白藜蘆醇為A＝292.20X+87.77（r＝0.999），虎杖苷為A＝364.39X－36.58（r＝0.999），龍膽苦苷為 A＝61.725X+107.23（r＝0.999）；線性范圍：大黃素為0.088～0.528 μg，白藜蘆醇為0.156～0.78μg，虎杖苷為0.312～1.56μg，龍膽苦苷為0.71～7.1μg。

2.5 掃描穩(wěn)定性及點(diǎn)樣精密度試驗(yàn)

取同一濃度樣品點(diǎn)5個(gè)斑點(diǎn)，展開，掃描，計(jì)算點(diǎn)樣精密度，得RSD值：大黃素為2.15%，白藜蘆醇為2.34%，虎杖苷為1.98%，龍膽苦苷為2.21%。將上述薄層板每隔30 min掃描1次，根據(jù)不同時(shí)間峰面積積分值考察穩(wěn)定性，結(jié)果在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 樣品含量測(cè)定

大黃素與白藜蘆醇同板測(cè)定，虎杖苷與龍膽苦苷同板測(cè)定。點(diǎn)樣采用瑞士CAMAG公司半自動(dòng)點(diǎn)樣儀，點(diǎn)樣速度為50μL·min-1，點(diǎn)樣形狀為條帶樣，帶寬為5 mm；展開采用瑞士CAMAG公司全自動(dòng)展開儀，溫度為12℃，相對(duì)濕度為65%，飽和時(shí)間為10 min，展開距離為8 cm，吹干時(shí)間為10 min。過程如下：在已活化的硅膠G薄層板上點(diǎn)對(duì)照品適量（大黃素1、6 μL，白藜蘆醇0.5、2 μL，虎杖苷0.5、2 μL，龍膽苦苷0.5、2 μL）與樣品5 μL，分別以展開劑（1）、（2）掃描，測(cè)定。復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測(cè)定結(jié)果見表1。

2.7 回收率試驗(yàn)

在已經(jīng)測(cè)定含量的樣品中加入對(duì)照品適量，照“2.2”項(xiàng)下方法提取，定容，照“2.7”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算提取回收率，結(jié)果見表2。

表1 復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊有效成分含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 1 Content determination of four components in Compound P.cuspidatum semisolid matrix capsule（n＝3）

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of recovery test（n＝3）

3 討論

復(fù)方虎杖半固體骨架膠囊中輔料主要為聚乙二醇6000，加熱時(shí)可熔融，并溶于乙醇，會(huì)給樣品處理帶來干擾；若在室溫提取則由于乙醇難以浸入到樣品內(nèi)部，導(dǎo)致提取時(shí)間較長(zhǎng)。而白藜蘆醇、虎杖苷對(duì)光均較敏感，過長(zhǎng)的提取時(shí)間對(duì)其穩(wěn)定性不利。采用超聲提取的方法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)對(duì)白藜蘆醇、虎杖苷、大黃素均有不利影響；后采用水?。?0℃）先讓聚乙二醇熔融，然后室溫冷卻，使提取溶劑與樣品充分接觸而又避免將輔料溶于供試品溶液中，較好地解決了這個(gè)問題。

龍膽苦苷與虎杖苷極性較接近，以石油醚-乙酸丁酯-甲醇-冰醋酸（4∶2∶1∶0.1）為展開劑不能將虎杖苷與龍膽苦苷分離（此展開劑可使白藜蘆醇與虎杖中其它成分基線分離），改變展開劑組成仍不能改善分離效果；改用氯仿-甲醇（7∶2）為展開劑，虎杖苷可與龍膽苦苷基線分離，但龍膽苦苷與虎杖中其它成分又難以分離；后采用美國(guó)Merck公司預(yù)制薄層板才使龍膽苦苷與其它成分基線分離，達(dá)到了分析測(cè)定的目的。

[1]杜寶新，鄭國(guó)慶，盧 明，等.腦脈Ⅱ號(hào)對(duì)腦出血大鼠神經(jīng)功能缺損分級(jí)及超微結(jié)構(gòu)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2007，27（5）：408.

[2]杜寶新，鄭國(guó)慶，盧 明，等.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊抑制腦出血后腦水腫的機(jī)制研究[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，27（4）：297.

[3]王 艷，鄭國(guó)慶.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)急性腦出血大鼠腦微血管、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16（21）：2981.

[4]鄭國(guó)慶，黃培新.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)急性腦出血大鼠PAR-1動(dòng)態(tài)表達(dá)的影響[J].中國(guó)中藥雜志，2006，31（15）：1265.

[5]陶雙友，劉茂才.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)腦出血所致腦心綜合征大鼠血漿皮質(zhì)醇的影響[J].中國(guó)中醫(yī)急癥，2005，14（6）：558.

[6]陶雙友，劉茂才，盧 明，等.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)腦出血所致腦心綜合征大鼠血漿內(nèi)皮素的影響[J].江西中醫(yī)藥，2005，36（4）：61.

[7]杜寶新，施曉耕.腦脈Ⅱ號(hào)膠囊對(duì)高血壓腦出血患者預(yù)后的影響[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，3（1）：31.