王思斯 朱玲 楊云霞

(四川大學基礎與法醫(yī)學院藥理教研室,四川 成都 610041)

特比萘芬是一種丙烯酮類廣譜、高效抗真菌藥。具有抑菌和殺菌作用,其作用機制為選擇性抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化酶,使真菌細胞膜形成受阻,起到抑菌的作用。本文用反相HPLC方法測定其軟膏的含量,以檢測其質量穩(wěn)定性等指標。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Water 1525型高效液相色譜儀;Water 2487型雙波長紫外檢測器;Water 2487型自動進樣器。乙晴ACN(色譜純,Korea SK);異丙醇、磷酸二氫鉀均為分析純,鹽酸特比奈芬對照品(Pharmcia),鹽酸特比奈芬軟膏：每 g含量為 10mg。

1.2 樣品含量測定方法

1.2.1 樣品含量測定色譜條件 色譜柱：Capcell-pak C18(5μ m,4.6×150mm,Shiseido);流動相 ：0.05M KH2PO4/乙晴=(30/70);檢測波長為 225nm;進樣量 10μ l;流速 1.0ml?min-1;柱溫 25℃。

1.2.2 溶液的配制

1.2.2.1 標準溶液配制 精密稱取鹽酸特比奈芬標準品適量,按照倍量稀釋的方法用異丙醇溶液稀釋,濃度分別為0.1,1,5,10,25,50,100,200mg?100ml-1,作為標準溶液。

1.2.2.2 對照品溶液(STD)的配制 精密稱取鹽酸特比奈芬對照品10mg,加異丙醇至100ml,作為對照品溶液。

1.2.2.3 供試樣品溶液(SA)的配制 取1g鹽酸特比奈芬軟膏,加異丙醇至100ml即得,進樣前用微孔濾膜(0.45μ m)濾過。

1.2.3 線性關系測定 用UV2000型自動進樣器,注入液相色譜儀,進樣量10μ l,記錄色譜圖。以鹽酸特比奈芬峰面積為縱坐標,藥物濃度為橫坐標繪制標準曲線,并對所得數(shù)據(jù)進行回歸分析。

1.2.4 儀器精密度試驗 取同一標準溶液按上述色譜條件連續(xù)進樣6次,計算峰面積的相對標準偏差(RSD%=S/X)。

1.2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,間隔2h進樣一次,共計8h,計算所測峰面積的相對標準偏差(RSD%)。

1.2.6 回收率試驗 取鹽酸特比奈芬對照品溶液,進樣6次,測定峰面積,計算回收率以及相對標準偏差。

1.2.7 樣品含量測定 精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μ l,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,用峰面積計算含量并進行含量分析。

2 結果

2.1 線性關系測定結果

鹽酸特比奈芬色譜圖見圖1。以鹽酸特比奈芬峰面積為縱坐標,藥物濃度為橫坐標繪制標準曲線,并對所得數(shù)據(jù)進行回歸分析,得回歸方程與濃度的線性關系為：y=12686x-15626,r=0.9999。結果表明,鹽酸特比奈芬分離好,在9min時出峰,峰形對稱、無拖尾。鹽酸特比奈芬的進樣濃度在0.1～200mg?100ml-1范圍內,峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關系。

圖1 鹽酸特比奈芬反相HPLC色譜圖

2.2 儀器精密度試驗 同一標準溶液按上述色譜條件連續(xù)進樣6次,峰面積的相對標準偏差RSD%為0.51%,結果表明儀器具有良好的精密度。

2.3 穩(wěn)定性試驗 同一供試品溶液,間隔2h進樣一次,共計8h,所測峰面積的相對標準偏差為0.46%,結果表明該溶液在9h內具有良好穩(wěn)定性。

2.4 回收率試驗 鹽酸特比奈芬對照品溶液,進樣6次的峰面積、回收率以及RSD%結果見表1。結果表明鹽酸特比奈芬在該色譜條件下回收率良好。

2.5 樣品含量測定 鹽酸特比奈芬軟膏色譜圖顯示在9min時出峰,峰形對稱、無拖尾。用峰面積計算含量并進行含量分析。表2為樣品含量測定結果,顯示樣品含量測定平均為100.75%(100.23%～101.02%),符合含量規(guī)定(95%～105%)。

表1 鹽酸特比奈芬回收率試驗測定結果

表2 鹽酸特比奈芬樣品含量測定

3 討論

特比萘芬是一種丙烯酮類廣譜、高效抗真菌藥。具有抑菌和殺菌作用,其作用機制為選擇性抑制真菌角鯊烯環(huán)氧化酶,使真菌細胞膜形成受阻,起到抑菌的作用[1]。特比奈芬獨特的殺菌作用機制和能在皮膚角質層內長時間保持較高治療濃度的特點決定了特比奈芬短期治療可以到達理想的真菌治愈率,同時可以提高患者的依從性,減少復發(fā)。本文用反相HPLC方法測定其軟膏的含量,考察鹽酸特比萘芬軟膏的質量標準[2-4]。

鹽酸特比萘芬軟膏的含量測定采用外標法,可達到滿足藥品含量測定的精確要求。我們的測定方法顯示鹽酸特比萘芬的進樣濃度在 0.1～200mg?100ml-1范圍內,峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關系,可以滿足靈敏度的要求。

1 蘇愛蓮.特比萘芬乳膏與維A酸膠囊聯(lián)合治療馬拉色菌毛囊炎[J].山東醫(yī)學高等?？茖W校學報,2009,31(5)：389-391.

2 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].

3 Nevenka KE,Jerej K,M arink DK.The development of the method for the determination of terbinafine in cat's plasma and hair[J].Pflugers Arch,2000,440(5 Suppl)：R168-R170.

4 Kovarik JM,Mueller EA,Zehender H,et al.Multiple-dose pharmacokinetics and distribution in tissue of terbinafine and metabolites[J].Antimicrob Agents Chemother,1995,39(12)：2738-2741.