李電剛,王淑湘,馬小茹,韓玉澤,陶佳南,佟春玲,王 杰,侯麗然,冷莉莉

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

近年來(lái),各國(guó)醫(yī)學(xué)家們?cè)趯?shí)驗(yàn)和臨床研究做的大量工作證明,中遠(yuǎn)紅外線可治愈或延長(zhǎng)癌癥病人的生命[1,2]。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)中遠(yuǎn)紅外線對(duì)荷瘤(S— 180和 H— 22肝癌)小鼠的照射,測(cè)定小鼠的非特異性與特異性免疫的功能狀態(tài),探討中遠(yuǎn)紅外線具有提高機(jī)體免疫功能作用的程度。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明種小白鼠 ,體重 (20± 2)g,雌雄不拘 ,由中科院上海藥研所、哈市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所、哈醫(yī)大和佳木斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室提供。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

Ⅰ組為陰性對(duì)照組;Ⅱ組為陽(yáng)性對(duì)照組;Ⅲ組為 S-180和 H-22荷瘤鼠治療觀察組。

1.2.2 小鼠耳腫試驗(yàn)

在用中遠(yuǎn)紅外線波長(zhǎng)7～ 10μm;照射距離:20cm;照射時(shí)間:每日兩次,每次30min,14d為一個(gè)療程。用二甲苯0.01mL涂小鼠右耳內(nèi)側(cè) ,致炎 30min后,脫頸處死,剪下雙耳,用9mm直徑的打孔器,打取雙耳對(duì)稱部位的耳片,用1/萬(wàn)感量的電子天平秤重量,計(jì)算雙耳對(duì)稱耳片的重量差值,即為耳腫脹率。

1.2.3 小鼠足墊腫脹試驗(yàn)

經(jīng)改良,即在中遠(yuǎn)紅外線照射的第9天,每鼠右足墊皮下注射108/mL ISRBC0.5mL。免疫4d后再同量 SRBC進(jìn)行左足墊皮下注射。在免疫注射的前與后24h,用游標(biāo)卡尺分別測(cè)定右左足墊的厚度,兩足墊厚度的差值,即為足墊腫脹率。

1.2.4 小鼠血清 LZM含量的測(cè)定

采用平板法。取小鼠眼球血液分離血清,用生理鹽水稀釋成10、20、50及100μ g/mL濃度的標(biāo)準(zhǔn) LZM,加到 1%瓊脂(含微球菌)平板相應(yīng)孔內(nèi) ,中心孔加生理鹽水。平板置37℃溫箱內(nèi)溫育18～ 24h。用卡尺測(cè)量 LZM的溶菌環(huán)直徑 (以 cm表示),參照各孔對(duì)應(yīng) LZM的濃度,在對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上以縱坐標(biāo)為 LZM濃度;橫坐標(biāo)代表溶菌環(huán)直徑(cm),繪制成 LZM標(biāo)準(zhǔn)曲線。以待檢血清代替標(biāo)準(zhǔn) LZM加入上述瓊脂平板孔內(nèi),經(jīng)溫育后,測(cè)定溶菌環(huán)直徑,在標(biāo)準(zhǔn)曲線查出其相應(yīng)LZM的含量。

1.2.5 胸腺、脾臟的重量及其指數(shù)的測(cè)定

先稱重小鼠體重,然后測(cè)定胸腺、脾臟的重量,求出胸腺 /體重、脾臟 /體重的比值,在計(jì)算出胸腺指數(shù)與脾指數(shù)。

1.2.6 小鼠外周血的 ANAE陽(yáng)性細(xì)胞百分率的測(cè)定

取小鼠眼球血制成推片血膜,自然干燥后,按原法略加改良進(jìn)行染色,即將復(fù)染色液改為2%孔雀綠色液。染色后在光學(xué)顯微鏡下,計(jì)算 LC內(nèi)呈現(xiàn)紅色顆粒的 AN AE陽(yáng)性細(xì)胞的百分率。

1.2.7 小鼠血清溶血素(HA)的測(cè)定

在連續(xù)照射的第 9天,取4%SRBC0.2mL給實(shí)驗(yàn)鼠進(jìn)行腹腔內(nèi)注射。免疫后第5天,無(wú)菌操作取小鼠眼血并分離血清。取 1:800血清 1mL、5%SRBC0.5mL與 1:10豚鼠血清 (補(bǔ)體 )1mL,在試管內(nèi)混勻,經(jīng)37℃ 水浴 30min,冰浴停止反應(yīng)。1500轉(zhuǎn) /分 ,離心 10min。取上清 1mL加都氏試劑3mL,混勻后10min用 721型分光光度計(jì),于波長(zhǎng)540mm讀取 OD值,計(jì)算半數(shù) SRBC溶血值(CH50);另設(shè)不加血清的空白對(duì)照管,作為比色時(shí)調(diào)零的基準(zhǔn);半數(shù)溶血管取5%SRBC0.25mL加入都氏試劑3.75mL,其余同上。

1.2.8 小鼠脾臟溶血空斑形成細(xì)胞(PEC)的測(cè)定

按史美浩方法進(jìn)行取小鼠脾細(xì)胞懸液。0.2%SRBC與補(bǔ)體各 1mL,在試管內(nèi)混均后,置 37℃水浴箱內(nèi)溫育 1h,3000轉(zhuǎn) /分 ,離心 5min,取上清液 ,用 721型分光光度計(jì) ,波長(zhǎng)413mm測(cè)光度讀數(shù)(OD值)。

1.2.9 小鼠外周血 TLC亞群的測(cè)定

取小鼠眼球血,肝素抗凝。去抗凝血 100 μL,加入 FITCCD3(CD4、CD8)McAb100μL,混勻 ,置 4℃冰箱作用 30min;加入溶血?jiǎng)?mL,混勻 ,室溫放置 10min。1200轉(zhuǎn) /分 ,離心 5min,棄去上清。沉淀物中加入 PBS2mL,混勻、同上離心后棄上清;加入固定液0.6mL,混勻 ,4℃放置 30min后上機(jī)計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 中遠(yuǎn)紅外線的抗炎作用

見(jiàn)表 1。

表1 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠急性與慢性炎癥反應(yīng)的影響 (±s,n=6)

表1 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠急性與慢性炎癥反應(yīng)的影響 (±s,n=6)

注:1、與Ⅰ組比較*P ＜ 0.05,△P＞ 0.05;2、與Ⅱ 組比較*P ＜0.01,5P＞ 0.05。

組別(n=6) 耳腫脹率(mg) 足墊腫脹率(mm)Ⅰ .陰性對(duì)照組 2.8± 0.12 0.32± 0.14Ⅱ .陽(yáng)性對(duì)照組 2.5± 0.10△ 0.46± 0.05*Ⅲ .治療觀察組 2.6± 0.0015 0.22± 0.05*

2.2 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠非特異性免疫功能的影響

見(jiàn)表 2。

表2 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠非特異性免疫功能的作用 (±s,n=6)

表2 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠非特異性免疫功能的作用 (±s,n=6)

注:①與Ⅰ組比較*P＜0.01,P＞ 0.05;②與Ⅱ 組比較*P＜0.01。

組別 血清 LZM(mg/mL) 胸腺指數(shù) 脾指數(shù) 外周血 AN AE±C(%)Ⅰ71.0±3.57Ⅱ29.30± 0.84* 0.72 0.98 65.3± 3.01*49.21±0.79Ⅲ48.51± 1.14△* 0.60 0.90 70.3± 2.94△*

2.3中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠特異性體液免疫功能的影響

見(jiàn)表3。

表3 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠 HA與 PEC的作用 (±s,n=6)

表3 中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠 HA與 PEC的作用 (±s,n=6)

注:與Ⅰ組比較*P＜0.05,P＞ 0.05;與Ⅱ組比較△ P＜0.05。

組別 HA(CH50) PFC(OD)Ⅰ87.73± 9.7 0.538± 0.03Ⅱ86.40± 10.15* 0.537± 0.02*Ⅲ88.40± 6.9△* 0.533± 0.02△*

3 討論

急性與慢性炎癥反應(yīng)是許多疾病的重要病理表現(xiàn)。因此,防止炎癥反應(yīng)是控制許多疾病發(fā)生與發(fā)展的重要措施[3,4]。本實(shí)驗(yàn)揭示中遠(yuǎn)紅外線照射對(duì)荷瘤鼠的急性炎癥反應(yīng)無(wú)影響,而對(duì)慢性炎癥側(cè)有較強(qiáng)的抑制作用,這可能是中遠(yuǎn)紅外線對(duì)機(jī)體慢性炎癥疾病有較好療效之所在。機(jī)體非特異性與特異性體液與細(xì)胞免疫功能對(duì)機(jī)體的抗感染、抗腫瘤,同種反應(yīng)性與遲發(fā)超敏反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展與結(jié)局具有重要作用[1,5]。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)中遠(yuǎn)紅外線能增強(qiáng)小鼠血清 LZM含量,說(shuō)明該儀對(duì) M合成與分泌 LZM有促進(jìn)作用,連同中遠(yuǎn)紅外線增加外周血 ANAE陽(yáng)性細(xì)胞與 TLC亞群中 CD3、CD4、減少 CD8TLC等作用 ,表明中遠(yuǎn)紅外線對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫具有增強(qiáng)作用,推測(cè)中遠(yuǎn)紅外線在抗胞內(nèi)寄生物的感染、抗腫瘤、移植排斥反應(yīng)與遲發(fā)型超敏反應(yīng)的發(fā)生、發(fā)展與結(jié)局等具有臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。

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