張定法，劉鳴韜，朱盛安

（1.河南科技學院，河南新鄉(xiāng) 453003；2.新鄉(xiāng)市農(nóng)業(yè)局，河南新鄉(xiāng) 453000）

研究黃瓜枯萎病菌（Fusarium.oxysporiumf.sp.cucumarinumOwen.）的生物學特性及防治方法等需要大量的厚垣孢子，而該菌在人工培養(yǎng)基上不易產(chǎn)生厚垣孢子[1]，這方面的研究又很少.為此，本文研究培養(yǎng)液、pH值、溫度、光照、振蕩條件對黃瓜枯萎病菌產(chǎn)生厚垣孢子的影響.

1 材料與方法

1.1 菌株來源

黃瓜枯萎病尖孢鐮刀菌黃瓜?；停‵usarium.oxysporiumf.sp.cucumarinumOwen.）由河南科技學院植物病理實驗室提供.

1.2 培養(yǎng)液對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

本實驗選用8種培養(yǎng)液:馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液(PD)、馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)液(PS)，Richards培養(yǎng)液[2-3]、馬鈴薯培養(yǎng)液P1(馬鈴薯200 g，水1 000mL)、馬鈴薯培養(yǎng)液P2(馬鈴薯100 g，水1 000mL)、馬鈴薯培養(yǎng)液P3(馬鈴薯75 g，水1 000mL)、馬鈴薯培養(yǎng)液P4(馬鈴薯50 g，水1 000mL)、馬鈴薯培養(yǎng)液P5(馬鈴薯25 g，水1 000mL).將黃瓜枯萎病菌接種在PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基)平板上，28℃培養(yǎng)4 d，用打孔器從菌落邊緣取直徑5 mm的菌餅，接種到裝有50 mL上述培養(yǎng)液的三角瓶中，每瓶接種1個菌餅，25℃黑暗靜止培養(yǎng)15 d，用血球計數(shù)板計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中厚垣孢子的數(shù)量[4].重復3次，取平均值（下同）.

1.3 溫度對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

設20℃、25℃、30℃、35℃、40℃共5個處理.將黃瓜枯萎病菌接種到裝有馬鈴薯培養(yǎng)液P4的三角瓶中，放在不同溫度的溫箱中黑暗靜止培養(yǎng)15 d，用血球計數(shù)板計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中厚垣孢子的數(shù)量.

1.4 光照對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

設24 h黑暗、24 h日光燈、12 h日光燈與黑暗交替3個處理.將黃瓜枯萎病菌接種到裝有馬鈴薯培養(yǎng)液P4的三角瓶中，放在不同的光照條件，25℃靜止培養(yǎng)15 d，用血球計數(shù)板計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中厚垣孢子的數(shù)量.

1.5 pH值對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

用 1mol/L 的 NaOH 和 1mol/L 的 HC1，將馬鈴薯培養(yǎng)液 P4 的 pH 值調整為 4、5、6、7、8、9、10，裝入三角瓶中，接種黃瓜枯萎病菌，25℃黑暗靜止培養(yǎng)15 d，用血球計數(shù)板計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中厚垣孢子的數(shù)量.

1.6 振蕩對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

設靜止和振蕩（100 r/m）兩個處理.將黃瓜枯萎病菌接種到裝有馬鈴薯培養(yǎng)液P4的三角瓶中，分別放在振蕩培養(yǎng)箱及普通培養(yǎng)箱中，25℃黑暗培養(yǎng)15 d，用血球計數(shù)板計數(shù)每毫升培養(yǎng)液中厚垣孢子的數(shù)量.

2 結果與分析

2.1 培養(yǎng)液對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

在供試的8種培養(yǎng)液中，馬鈴薯培養(yǎng)液P1、P2、P3、P4、P5產(chǎn)生了厚垣孢子，其中P4培養(yǎng)液產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量最多，為269個/mL.其次為P3、P2培養(yǎng)液，分別為215個/mL、181個/mL.PD、PS、Richards培養(yǎng)液未產(chǎn)生厚垣孢子（圖1）.

圖1 培養(yǎng)液對黃瓜枯萎病菌厚垣孢子產(chǎn)生的影響

2.2 溫度對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

不同溫度對黃瓜枯萎病菌產(chǎn)生厚垣孢子有較大的影響.30℃產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量最多，為293個/mL；其次是25℃，為271個/mL；40℃不產(chǎn)生厚垣孢子（圖2）.

圖2 溫度對黃瓜枯萎病菌厚垣孢子產(chǎn)生的影響

2.3 pH值對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

在設置的7個pH值處理中，都產(chǎn)生了厚垣孢子，其中pH值6產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量最多，為287個/mL.其次pH值7，為263個/mL；pH值4、pH值10產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量較少(圖3).

圖3 pH值對黃瓜枯萎病菌厚垣孢子產(chǎn)生的影響

2.4 光照對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

黃瓜枯萎病菌在24 h黑暗、24 h日光燈、12 h日光燈與黑暗交替3處理條件下，每毫升培養(yǎng)液產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量分別為246個、543個、725個.由此可知，光照，特別光暗交替更有利于厚垣孢子的產(chǎn)生.

2.5 振蕩和靜止對厚垣孢子產(chǎn)生的影響

在振蕩和靜止條件下，每毫升培養(yǎng)液產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量分別為317個、239個，可見振蕩有利于厚垣孢子的產(chǎn)生.

3 小結與討論

真菌的生長發(fā)育需要一定的環(huán)境條件，有利于營養(yǎng)生長的條件，不一定有利于孢子的產(chǎn)生[5].真菌厚垣孢子是在環(huán)境條件差的情況下產(chǎn)生的，它是真菌渡過不良環(huán)境條件的一種方法.本試驗中用的PD、PS、Richards培養(yǎng)液中營養(yǎng)含量較高，未產(chǎn)生厚垣孢子，而馬鈴薯培養(yǎng)液P1、P2、P3、P4、P5營養(yǎng)含量較低則產(chǎn)生了厚垣孢子.不同溫度對黃瓜枯萎病菌厚垣孢子的產(chǎn)生也有明顯的影響，30℃產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量最多，其次是25℃，40℃不產(chǎn)生厚垣孢子.厚垣孢子在pH值4～10的范圍內都能產(chǎn)生，pH值6產(chǎn)生的數(shù)量最多，pH值4、pH值10產(chǎn)生厚垣孢子的數(shù)量較少.光照、振蕩有利于厚垣孢子的產(chǎn)生.

[1]董金皋.農(nóng)業(yè)植物病理學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2001：411-412.

[2]孫廣宇.植物病理學實驗技術[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2002：203-204.

[3]方中達.植病研究方法[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，1998：49-50.

[4]秦蕓，葉華智，黃云張.影響木霉菌厚垣孢子產(chǎn)生因素初探[J].云南農(nóng)業(yè)大學學報，2002，17（4）：15-16.

[5]程明淵，劉洪濤，閻萬元.人工條件下稻曲病菌厚垣孢子產(chǎn)生因素初探[J].吉林農(nóng)業(yè)科學，1996，（3）：62-64.