王 暉，徐 春

長時間給予雌激素可以導(dǎo)致大鼠垂體PRL細胞增生，PRL分泌增加，最后形成PRL瘤。E誘發(fā)大鼠垂體PRL瘤模型對研究PRL瘤形成機理和尋求有效的治療措施具有重要意義。筆者秉用17-β雌二醇皮下植入，同時用中藥降乳散灌胃，研究降乳散對雌激素誘發(fā)大鼠PRL瘤的防治作用。

1 材料和方法

1.1 材料 動物：雌性Wistar大鼠由解放軍總醫(yī)院實驗動物中心提供。在控光鼠房中分籠飼養(yǎng)，溫度18～20℃，濕度43%，食用標準飼料，飲瓶裝自來水。降乳散組成：柴胡15 g，郁金5 g，白芍 15 g，夏枯草15 g，生麥芽30 g，川牛滕15 g，香附30 g，當(dāng)歸15 g，仙靈脾10 g，巴戟10 g，元胡10 g，浙貝10 g。 大鼠PRL抗原、標準品和一抗，由美國NIDDK的Dr.Parlow惠贈。

1.2 方法

1.2.1 大鼠PRL瘤模型的制備 24只成年雌性Wistar大鼠，體重120～150 g，腹腔內(nèi)注射10%水合氯醛50～80 mg/kg麻醉，常規(guī)消毒，于背部腰椎兩側(cè)做長約2～3 cm的縱形切口，暴露腹腔，結(jié)扎子宮，切除卵巢，并逐層縫合。于其背部中線尾骨上約3 cm偏左處做一約1 cm長縱形切口，游離皮下組織，將一含有17β-雌二醇10 mg的硅膠管 （長20 mm，內(nèi)徑1.5 mm，外徑2.41 mm)或空白硅膠管植入皮下。全部動物隨機分3組，每組8只。①對照組（C組），皮下植入空白硅膠管；②雌激素組（E組）：皮下植入含有雌激素的硅膠管；③降乳散組（J組），皮下植入雌激素硅膠管的同時，用降乳散湯劑灌胃（15 mg/kg·d）。用藥第8周處死動物。乙醚麻醉大鼠后，于心臟穿刺取血，分離血清于-70℃保存，打開顱骨，翻開腦組織，摘下垂體，稱重后將1/2凍于液氮中，1/2放于4%多聚甲醛中固定。

1.2.2 血清PRL水平的放免測定 靈敏度：0.312 ng/ml，批內(nèi)CV 4.5%，批間CV 10.5%。

1.2.3 組織學(xué)及免疫組織化學(xué)觀察 垂體組織在4%多聚甲醛中固定，石臘包埋、切片后行HE染色.部分切片采用免疫組化方法顯示垂體組織PRL蛋白的表達和分布。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理 實驗結(jié)果求出均數(shù)±標準差，組間比較采用t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠垂體重量 E組垂體重量為 （78.6±8.4）mg，明顯高于C組的（13.4±0.9）mg（P<0.01），J組的（20.2±2.4）mg（P<0.01）。J組與C組亦存在顯著性差異（P<0.01）。

2.2 各組大鼠血清PRL水平 E組大鼠血清PRL為（4226.3±446.9）ng/ml，明顯高于 C組的（16.2±5.6）mg（P<0.01）；J組大鼠血清 PRL的水平為（526.7±43.6）ng/ml，顯著低于E組（P<0.01），但明顯高于C組（P<0.01）。

2.3 各組大鼠垂體組織學(xué)的改變 在HE染色下，C組垂體細胞呈圓形，胞漿少，胞核大小一致，血竇形態(tài)規(guī)則，分布均勻。E組細胞數(shù)目明顯增加，細胞呈圓形或多角形，胞體增大，胞漿帶增寬，細胞分化差，核大小不一致，可見大核細胞，有核異型性，血竇數(shù)目減少，分布不均，形態(tài)不規(guī)則，均被增生的細胞擠壓變形。J組出現(xiàn)細胞異常增生，部分區(qū)域可見形態(tài)分布正常的血竇。

2.4 各組大鼠垂體PRL免疫組織化學(xué)的改變 每200倍視野隨機數(shù)5個小格的陽性細胞 （壓上線和左線的細胞計數(shù)，壓下線和右線的細胞不計數(shù)），每組數(shù)5個切片，取其平均值。C組PRL陽性細胞散在分布，平均為（1.4±1.1）個/格，E組的陽性細胞廣泛存在并且分布密集，平均（20.6±2.4）個/格，明顯高于C組（P<0.01）；J組的陽性細胞數(shù)為（16.0±1.6）個/格明顯低于E組（P<0.05）而高于C組（P<0.01）。

3 討 論

在雌激素作用下，大鼠出現(xiàn)高PRL血癥和PRL細胞增生，作用8周后，E組垂體平均重量為（78.6±8.4）mg，根據(jù)Welsch等判斷垂體PRL瘤的標準50 mg[1]，此組已成功的誘發(fā)出PRL瘤。E誘發(fā)大鼠PRL模型的諸多研究，盡管在動物型別和用藥方法方面各有不同，但均得出同樣的結(jié)論[1-3]，說明雌激素具有刺激PRL基因表達和PRL細胞增生的作用。一例長期服用E的換性者（男性→女性）發(fā)生垂體PRL瘤，瘤組織表達豐富的雌激素受體ER和較低的多巴胺受體[4]，此例PRL瘤的發(fā)生是偶然，還是由于E直接作用或通過介導(dǎo)其它機制如生長因子、癌基因的激活、抑制癌基因的抑制或其它異?；虻淖饔?，尚不清楚，但是，此病例提示E刺激在內(nèi)分泌腫瘤的發(fā)生中起一定的作用。

中醫(yī)理論認為高PRL血癥屬肝淤腎虛，根據(jù)辨證調(diào)理原則解放軍總醫(yī)院中醫(yī)科楊明會主任醫(yī)師配制成的降乳散，由柴胡、白芍、當(dāng)歸、仙靈脾、穿山甲、郁金、夏枯草等15味中藥組成，臨床用于治療高PRL血癥有效。筆者將此中藥用于雌激素誘發(fā)的大鼠PRL瘤，發(fā)現(xiàn)其具有降低血清PRL和垂體重量的作用。中藥降乳散的治療法則為舒肝解淤，補腎健脾。至于其降低PRL的機制還有待進一步研究。

本文結(jié)果顯示，J組的垂體重量、血清PRL水平和PRL陽性細胞計數(shù)均明顯高于C組，提示降乳散對雌激素刺激的PRL過渡分泌僅能起部分抑制作用。光鏡下J組出現(xiàn)明顯的細胞增生，胞漿增寬，血竇擠壓變形及核異型性等改變，這些均說明降乳散不能完全阻止E誘導(dǎo)的大鼠PRL瘤的形成和發(fā)展。中藥的劑量不足可能是原因之一，本組用藥劑量根據(jù)人的治療劑量換算成的大鼠用量，設(shè)計方案中沒有關(guān)于降乳散劑量逐漸增加的觀察。

總之，在皮下植入雌激素誘發(fā)PRL瘤的同時，用中藥降乳散給大鼠灌胃，能夠明顯降低大鼠血清PRL的水平及垂體的重量，提示其對雌激素誘發(fā)的PRL瘤具有一定的防治作用。

[1]Welsch CW，Jenklins T，Amenomori Y，et al.Tumorous development of in situ and grafted anterior pituitary in female rats treated with diethylstilbestrol.Experimentia，1979，27:1350-1352.

[2]許榮琨，郭傳海，黃曼影，等.17β-雌二醇誘發(fā)大鼠垂體PRL瘤的形成和原癌基因c-myc的表達.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，1993，13:29-32.

[3]薛毅龍，段國升，張燦遠.雌酮誘發(fā)大鼠垂體腺瘤動物模型.中華實驗外科雜志，1992，9:136.

[4]Kovacs K，Stefaneanu L，Ezzat S，et al.Prolactin-producing pituitary adenoma in a male-to-female transsexual patient with protracted estrogen administration.A morphologic study.Arch Pathol Lab Med，1994，118(5):562.