葉卯祥，嚴(yán)雪黎

（湖北省中醫(yī)院，湖北 武漢 430074）

肝康顆粒是由丹參、郁金等5味常用中藥組成的純中藥制劑，處方來源于臨床應(yīng)用多年的民間驗(yàn)方，具有活血止痛、涼血舒肝、益年補(bǔ)虛的功效，主要用于治療肝纖維化、慢性肝炎所致的瘀熱癥。方中丹參和郁金所含與處方功能主治相關(guān)的成分多為脂溶性，為保證制劑質(zhì)量，筆者進(jìn)行了兩者的乙醇提取工藝研究，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agileng－1100型高效液相色譜儀；超聲波提取器（北京醫(yī)用設(shè)備廠）；Mettler－Toledo AG285型天平（Mettler－toledo Gmbh，Laboratory＆Weighing Technologies，Switzerland）。丹參酮ⅡA與姜黃素對(duì)照品均為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材吸醇量測(cè)定

按處方比例稱取丹參、郁金等藥材，加適量80％乙醇浸泡，每隔30min觀察1次，共冷浸1.5h，直至藥材不再吸收為止。將吸醇飽和后的藥材加熱回流1h，求得藥材的吸醇量為藥材量的2倍。2.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)考察

為考察不同體積分?jǐn)?shù)乙醇對(duì)提取效果的影響，根據(jù)有效成分性質(zhì)并參閱文獻(xiàn)[1－2]，按處方比例稱取丹參和郁金藥材數(shù)份，分別以70％，80％，90％的乙醇進(jìn)行回流提取2次，第1次加8倍量乙醇，第2次加6倍量，合并所得藥液，用350目濾布濾過，濾液在同等條件下減壓回收乙醇，以蒸餾水定容至250 mL，備用。結(jié)果見表1?？梢?，采用80％和90％的乙醇提取時(shí)，丹參酮ⅡA和姜黃素的提取率較高。為了節(jié)約乙醇、降低成本、保證安全生產(chǎn)，確定采用80％乙醇回流提取丹參和郁金藥材。

2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)測(cè)定

2.3.1 丹參酮ⅡA[3]

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水（75∶25）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，柱溫35℃，流速1mL/min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

表1 不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取效果考察（n=3）

溶液制備：精密稱取丹參酮ⅡA對(duì)照品10mg，置50mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為40μg/mL的對(duì)照品溶液。精密量取提取液5 mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

測(cè)定方法：精密量取對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖和峰面積值，以進(jìn)樣量（μg）對(duì)峰面積值（A）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 C=1.818 9×10－4A+4.191 7×10－3，r=0.999 7（n=6）。取供試品溶液10μL，同法測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算即得。

2.3.2 姜黃素[3]

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水－磷酸（75∶25∶0.002）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)424 nm，柱溫30℃，流速1mL/min。理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

溶液制備：精密稱取姜黃素對(duì)照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為20μg/mL的對(duì)照品溶液。精密量取提取液5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

測(cè)定方法：精密量取對(duì)照品溶液1，3，5，7，9，11μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，以進(jìn)樣量（μg）對(duì)峰面積值（A）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 C=1.272 8×10－4A－2.039 6×10－3，r=0.999 2（n=6）。取供試品溶液10μL，同法測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算即得。

2.4 乙醇提取條件篩選

選定乙醇的體積分?jǐn)?shù)后，乙醇用量（因素A）、提取時(shí)間（因素B）、提取次數(shù)（因素C）則為影響提取效果的主要因素，各取3個(gè)水平，按照L9（34）正交表安排試驗(yàn)，其中首次提取時(shí)另加2倍量乙醇以補(bǔ)充藥材的吸附量。因素水平見表2。因丹參為方中君藥，丹參酮ⅡA是其主要有效成分，也是本方重要的活性成分之一，姜黃素也是明確的抗肝纖維化活性成分，故以丹參酮ⅡA和姜黃素含量為指標(biāo)進(jìn)行綜合評(píng)分，根據(jù)實(shí)際情況并參照常用比例將二者權(quán)重系數(shù)分別定為0.6和0.4，從而篩選得出最佳工藝條件。正交試驗(yàn)結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。由直觀分析可知，提取效果的影響因素大小順序?yàn)樘崛〈螖?shù)、提取時(shí)間、乙醇用量。方差分析結(jié)果表明，提取次數(shù)為影響提取效果的主要因素，乙醇用量和提取時(shí)間對(duì)提取效果的影響不大，且提取工藝A2B2C2為佳，即分別加5倍量的80％乙醇，加熱回流提取2次，每次1h。

表2 因素水平表

表3 正交試驗(yàn)結(jié)果表

表4 方差分析結(jié)果表

2.5 醇提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)

以最佳醇提工藝進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表5?？梢姡?yàn)證試驗(yàn)與正交驗(yàn)結(jié)果一致，說明提取工藝穩(wěn)定。

表5 醇提最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

本研究結(jié)果表明，用乙醇回流提取的丹參和郁金中脂溶性成分為棕褐色，質(zhì)量佳。由于藥渣中還含有水溶性成分，通過水煎煮提取，還可提高肝康顆粒的功效。

[1]張 軍，劉 璐，賴小平，等.丹參制劑的研究現(xiàn)狀及其開發(fā)的幾點(diǎn)思考[J].中草藥，2001，32（10）：954－955.

[2]徐淑卿，孫艷秋，陳桂范.用正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選丹參脂溶性成份的提取工藝[J].中成藥，1999，21（3）：152－153.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄ⅥD.