王繼彥,位 鴻,王 蔚,高紅梅,關(guān)樹光,王 沛

(長春中醫(yī)藥大學(xué),吉林長春130117)

高血脂和動脈粥樣硬化是心腦血管疾病發(fā)生的生化和病理學(xué)基礎(chǔ),因此,降血脂和抗動脈粥樣硬化癥藥物的研究一直受到人們的重視。天然甾體化合物具有降血脂作用已有報道[1-2]。德歐血脂平膠囊是以從薯蕷科植物穿龍薯蕷Dioscorea nipponica Makino根莖中提取的有效成分薯蕷皂苷元(diosgenin)為原料制成的中藥一類膠囊制劑,具祛痰降濁,活血通絡(luò)等功效。臨床用于高脂血癥、動脈粥樣硬化癥的治療。筆者在新藥開發(fā)研制過程中,為了有效的控制原料及成品質(zhì)量,建立了有效成分薯蕷皂苷元的高效液相色譜測定方法。

1 儀器與材料

日本SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜,RID-10A示差檢測器(RIU/FS=1×10-6),WDL-95色譜工作站。甲醇為色譜純,其他試劑均為分析純。薯蕷皂苷元對照品購自美國SIGMA公司,批號101H7711,純度為98.68%。德歐血脂平膠囊成品由長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院新藥研究中心提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜分析條件 色譜柱:LUNA SILICA(4.6 mm ×150 mm,5 μ m,Phenomenex公司),流動相:正己烷-醋酸乙酯(88∶12);體積流量:1.0 mL/min;柱溫: 25℃;檢測器:RID-10A示差檢測器(RIU/FS=1× 10-6)。

2.2 對照品溶液的制備 取經(jīng)80℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對照品約250 mg,精密稱定,置25 mL量瓶中,加氯仿稀釋至刻度,搖勻,即得(每1 mL中約含薯蕷皂苷元10 mg)。

2.3 原料藥供試品溶液的制備 精密稱取經(jīng)80℃干燥至恒重的本品適量,加氯仿溶解并稀釋制成每1 mL中約含本品10 mg的溶液,搖勻,即得。

2.4 制劑供試品溶液的制備 取本品裝量差異項下的內(nèi)容物,混合均勻,經(jīng)80℃干燥至恒重后,精密稱取適量,加氯仿溶解并稀釋制成每1 mL中約含本品10 mg的溶液,搖勻,即得。

2.5 線性關(guān)系的考察 精密稱取經(jīng)80℃干燥至恒重的薯蕷皂苷元對照品500 mg,置50 mL量瓶中,加氯仿稀釋至刻度,精密吸取對照品溶液1.25,2.50, 3.75,5.00,6.25,7.50,10.00 mL分別置10 mL量瓶中,加氯仿稀釋至刻度。按上述色譜條件各進(jìn)樣20 μ L測定峰面積,以進(jìn)樣量對相應(yīng)峰面積進(jìn)行線性回歸,計算得回歸方程:Y=404 9X-3.526×103,r= 0.999 8。表明薯蕷皂苷元在25～200 μ g范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液,分別于0,2,4,6, 8,10 h進(jìn)樣,計錄峰面積。結(jié)果供試品峰面積 RSD為1.17%(n=6)。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。2.7 精密度試驗 取供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次測定,結(jié)果峰面積RSD為1.0%(n=6)。

2.8 重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品(批號980210)6份,制備供試品溶液,依上述方法進(jìn)行6次測定,結(jié)果薯蕷皂苷元質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD為0.65%(n=6)。

2.9 回收率試驗 采用加樣回收法。精密稱取已知薯蕷皂苷元含量為94.11%(6次測定平均值)的原料藥(批號980210)5份,每份約100 mg,分別精密添加約100 mg的薯蕷皂苷元對照品,同樣方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)樣,測定峰面積,計算回收率。結(jié)果薯蕷皂苷元的平均回收率為 101.2%, RSD=1.9(n=6)。

2.10 樣品測定 取原料藥薯蕷皂苷元及德歐血脂平膠囊成品(6批),分別制備原料藥及成品供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)行分析,根據(jù)外標(biāo)法測定計算薯蕷皂苷元的含量(圖略)。6批原料藥中薯蕷皂苷元的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為 0.927,0.942,0.926,0.959, 0.941,0.960 g/g;6批成品中薯蕷皂苷元的含量分別為198.1,198.0,202.6,205.5,205.4,202.6 mg/粒(標(biāo)示含量分別為99.1%,99.0%,101.3%,102.8%, 102.7%,101.3%)。

3 討論

3.1 供試品溶液制備的溶劑選擇 由于本制劑屬于中藥新藥分類一類藥,為單體化合物,考慮到在含量測定時對雜質(zhì)的控制,對樣品的溶解度進(jìn)行了測定試驗。按《中國藥典》2005年版一部凡例的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定所要求的方法對樣品和薯蕷皂甙元對照品進(jìn)行了溶解測定,通過用氯仿、苯、醋酸乙酯、乙醇、甲醇等試劑溶解進(jìn)行比較,結(jié)果用氯仿溶解的效果最佳。

3.2 色譜條件的選擇 本測定方法采用的色譜條件是根據(jù)上述樣品的溶解性并在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上經(jīng)實驗改進(jìn)后所確定。薯蕷皂苷元分子結(jié)構(gòu)中雖然有一雙鍵,但僅在紫外末端有弱的吸收,文獻(xiàn)報道有采用示差檢測器[3]或紫外、ELSD法等檢測器[4-6]進(jìn)行檢測,根據(jù)本制劑的具體情況,經(jīng)比較實驗采用了示差檢測器;經(jīng)比較了多種色譜柱后選擇了硅膠柱;流動相為[石油醚(b.p.60～80℃)-異丙醇(12∶1)]?？紤]到石油醚為混合物具不穩(wěn)定性,因而沒有采用文獻(xiàn)的流動相。試驗中曾以正己烷-異丙醇(98∶2);正己烷-醋酸乙酯(80∶20)等條件進(jìn)行試驗,但結(jié)果以正己烷-醋酸乙酯(88∶12)為佳。

3.3 測定結(jié)果 本方法簡便快速,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可為德歐血脂平膠囊的質(zhì)量控制及薯蕷皂苷元的含量測定提供可行的方法。

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