牟 靜,楊應(yīng)東,韋雷飛,楊光友*

(1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,四川雅安 625014;2.四川省攀枝花市農(nóng)林科學(xué)研究院畜牧水產(chǎn)所,四川攀枝花 617061)

腦多頭蚴病(俗稱(chēng)腦包蟲(chóng)病)是由帶科、多頭屬(Mu lticeps)的多頭絳蟲(chóng)(M.mu lticeps)的中絳期幼蟲(chóng)(腦多頭蚴Coenurus cerebralis)寄生于牛、羊等有蹄類(lèi)草食動(dòng)物所引起的一種寄生蟲(chóng)病,是危害牛、羊養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的主要寄生蟲(chóng)病之一。本病多發(fā)于腦部,動(dòng)物感染該病后臨床上主要表現(xiàn)以神經(jīng)機(jī)能障礙為主的綜合征[1],感染嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起顱骨萎縮甚至穿孔[2],且感染蟲(chóng)體較多時(shí)包囊會(huì)以皮下和肌肉組織存在[3],此外,幼蟲(chóng)移行至腦部時(shí)造成的損傷為細(xì)菌通過(guò)血腦屏障創(chuàng)造途徑,從而引起繼發(fā)感染[4]。臨床上該病還與腦脊髓絲蟲(chóng)混合感染的報(bào)道[5]。中間宿主為綿羊、山羊、黃牛、水牛和牦牛等有蹄類(lèi)草食動(dòng)物,牛感染多頭蚴病比羊少見(jiàn)[6-7],偶見(jiàn)于馬、駱駝、兔和人,腦多頭蚴的包囊曾在人的胸鎖乳頭肌、腋窩和眼睛中發(fā)現(xiàn)。至1998年,北美洲各國(guó)所報(bào)道的人患該病的病例就達(dá)50多例[8]。該病全年均可發(fā)生,但多見(jiàn)于春天或早夏。一般母羊的患病率高于公羊。該病呈世界性分布,但在以飼養(yǎng)綿羊、山羊?yàn)橹饕?jīng)濟(jì)來(lái)源的非洲及東南亞的發(fā)展中國(guó)家最為常見(jiàn)[9-10]。我國(guó)黑龍江、吉林、甘肅、青海、四川等23個(gè)省區(qū)均有分布,其中尤以新疆、寧夏等地發(fā)病率最高。在寧夏該病對(duì)羔羊致死率為6%～53%,每年造成巨大經(jīng)濟(jì)損失,其危害居羊病之首。因此,鑒于該病給全世界畜牧業(yè)帶來(lái)的巨大損失,已越來(lái)越多的受到各國(guó)的重視。

1 免疫學(xué)

1.1 抗原成分

腦多頭蚴抗原主要有原頭節(jié)可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和囊液抗原3種。孫曉林等[11]通過(guò)二維電泳分析了其抗原成分,3種腦多頭蚴抗原共同多肽斑點(diǎn)3個(gè),原頭節(jié)可溶性抗原和囊壁可溶性抗原共同多肽斑點(diǎn)14個(gè),原頭節(jié)可溶性抗原和囊液抗原共同多肽斑點(diǎn)5個(gè),囊壁可溶性抗原和囊液抗原共同多肽斑點(diǎn)5個(gè)。腦多頭蚴抗原結(jié)構(gòu)相對(duì)較復(fù)雜,囊液和原頭節(jié)分別有31和42條多肽,并且兩者均存在與棘球蚴和細(xì)頸囊尾蚴相同的20 ku和38 ku的多肽。成蟲(chóng)節(jié)片抗原主帶有4條,分子質(zhì)量分別為 73、88、128、134 ku;原頭節(jié)排泄分泌(ES)抗原主帶有2條,分子質(zhì)量分別為33 ku和108 ku。同時(shí),孫曉林還用等電聚焦電泳(IEF)技術(shù),對(duì)自然感染綿羊的腦多頭蚴的頭節(jié)可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和囊液抗原進(jìn)行了分析,分析結(jié)果表明囊液的酯酶同工酶較頭節(jié)和囊壁豐富;3種抗原中脂類(lèi)的電泳帶較少,甚至沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有脂蛋白和糖脂蛋白電泳帶。

1.2 不同抗原成分免疫原性

腦多頭蚴具有較多的抗原成分,每種抗原其免疫原性也不盡一致,有的抗原僅可作為診斷抗原,有些抗原可以作為免疫用抗原。

Verster A等[12]用六鉤蚴分泌抗原免疫羊后,試驗(yàn)分2組,當(dāng)用6 000個(gè)蟲(chóng)卵感染羊,28只羊中僅3只獲得保護(hù)而未被感染;當(dāng)用5 000個(gè)蟲(chóng)卵感染羊,30只羊中就有11只獲得保護(hù)。初步表明六鉤蚴分泌抗原具有較好的免疫原性。用六鉤蚴抗原免疫4周～8周、8周～12周的羔羊可獲得很好的免疫保護(hù);而對(duì)懷孕90 d～120 d母羊用六鉤蚴抗原進(jìn)行免疫,其生產(chǎn)的羔羊與未免疫母羊生產(chǎn)的羔羊?qū)Χ囝^蚴的侵襲均沒(méi)有免疫力。

原頭節(jié)可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和原頭節(jié)ES抗原具有較好的免疫原性,而囊液抗原免疫原性較差。羔羊經(jīng)囊壁粗抗原免疫后能100%抵抗多頭絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵的攻擊感染,而經(jīng)囊液粗抗原免疫后只有3/4的羔羊獲得抵抗力。免疫羊抗體滴度與免疫保護(hù)力之間呈正相關(guān)[13]。而羔羊經(jīng)原頭節(jié)ES抗原和原頭節(jié)可溶性抗原免疫后,有2/3的羔羊能抵抗多頭絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵的攻擊感染,而余下1/3的羔羊大腦中多頭蚴包囊的大小、原頭節(jié)的數(shù)量及其大小均小于未用抗原免疫的對(duì)照組[14]。用多頭絳蟲(chóng)原頭節(jié)、囊壁、囊液層析純化抗原及原頭節(jié)排泄分泌(ES)抗原對(duì)綿羊免疫及攻擊感染多頭絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵后的血清進(jìn)行ELISA檢測(cè),綿羊在3次免疫后,血清抗體效價(jià)迅速升高,第3次免疫后1周～2周達(dá)到峰值,在攻擊蟲(chóng)卵后抗體效價(jià)開(kāi)始下降,但之后抗體效價(jià)仍維持在較高水平。原頭節(jié)可溶性抗原免疫的羊和原頭節(jié)ES抗原免疫的羊其血清抗體總體水平要高于囊壁和囊液抗原免疫的羊,原頭節(jié)ES抗原和原頭節(jié)層析純化抗原的敏感性、特異性要高于囊壁和囊液層析抗原。運(yùn)用酸性α-萘酯酶染色法及姬姆薩染色法染色,綿羊在3次免疫后,T淋巴細(xì)胞數(shù)量有不同程度增加,酸性粒細(xì)胞數(shù)量增加不明顯,但在攻擊感染后都明顯增加,淋巴細(xì)胞數(shù)量在免疫后即開(kāi)始增加,細(xì)胞免疫增強(qiáng)[15-16]。

2 分子生物學(xué)

2.1 分子分類(lèi)

Robin B[17]采用PCR-RFLP方法對(duì)來(lái)自于不同地區(qū)的帶科絳蟲(chóng)(細(xì)粒棘球絳蟲(chóng) Echinococcus granulosus,多房棘球絳蟲(chóng)E.multilocularis,水泡帶絳蟲(chóng)Taenia hydatigena,羊帶絳蟲(chóng)T.ovis,豆?fàn)顜Ы{蟲(chóng)T.pisiform is,多頭多頭絳蟲(chóng) T.mu lticeps和連續(xù)多頭絳蟲(chóng)T.serialis)進(jìn)行了親緣關(guān)系比較,發(fā)現(xiàn)這幾種帶科絳蟲(chóng)的ITS-2序列在種內(nèi)均沒(méi)有明顯的序列差異。同時(shí),該學(xué)者又對(duì)9種帶科絳蟲(chóng)(巨頸帶絳蟲(chóng),水泡帶絳蟲(chóng),豆?fàn)顜Ы{蟲(chóng),羊帶絳蟲(chóng),多頭多頭絳蟲(chóng),連續(xù)多頭絳蟲(chóng),牛帶絳蟲(chóng),豬帶絳蟲(chóng)和亞州帶絳蟲(chóng))的線(xiàn)粒體NADH脫氫酶1和細(xì)胞色素C氧化酶1的基因序列進(jìn)行了比較研究,結(jié)果表明NADH脫氫酶1基因序列差異在5.9%～30.8%之間,而細(xì)胞色素C氧化酶1基因序列差異在2.5%～18%之間。其中多頭多頭絳蟲(chóng)與連續(xù)多頭絳蟲(chóng)、牛帶絳蟲(chóng)和亞州帶絳蟲(chóng)同源性較高。

Varcasia A等[18]比較了薩丁尼亞、意大利的多頭多頭絳蟲(chóng)遺傳變異情況,其N(xiāo)ADH脫氫酶1基因序列差異為1.27%～2.54%,細(xì)胞色素C氧化酶1的基因序列差異為 0.22%～0.67%。Zhang L等[19]對(duì)肯亞帶科絳蟲(chóng)ND1、CO1基因序列比較分析發(fā)現(xiàn),里吉斯絳蟲(chóng)與水皰絳蟲(chóng)的同源性較高,T.madoquae與連續(xù)多頭絳蟲(chóng)、多頭絳蟲(chóng)和牛帶絳蟲(chóng)的同源性較高。

2.2 抗原基因

Gauci C等[20]克隆了腦多頭絳蟲(chóng)六鉤蚴抗原基因Tm16和Tm18,并與GST(谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶)在大腸埃希菌中聯(lián)合表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物加免疫佐劑(Quil A)免疫羊,免疫后每只羊攻擊感染多頭絳蟲(chóng)蟲(chóng)卵5 500個(gè),對(duì)照組的9只羊中有5只攻蟲(chóng)后死亡,而免疫組的20只羊中無(wú)1只死亡,說(shuō)明Tm16、Tm18重組抗原對(duì)綿羊具有較高的免疫保護(hù)性。此外,該學(xué)者在此試驗(yàn)基礎(chǔ)上,隨機(jī)選擇了6個(gè)農(nóng)場(chǎng)的632只10周齡～12周齡的羊進(jìn)行了六鉤蚴重組抗原基因Tm18的免疫保護(hù)田間試驗(yàn),其中對(duì)照組424只,免疫組208只。二次免疫后40多月間,對(duì)照組中有32只羊發(fā)病,而免疫組僅1只羊發(fā)病,統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,兩組羊發(fā)病差異性顯著(χ2=14.08;P ＜0.000 1)。Varcasia A等通過(guò)血清學(xué)分析發(fā)現(xiàn),60只已接種的羊中除1只以外(98%)均能產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)[21]。李永光等[22]用腦多頭蚴原頭節(jié)克隆了該蟲(chóng)硫氧還蛋白過(guò)氧化物酶(TmTpx)基因片段,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒 pGEX-4T-Tm Tpx,成功表達(dá)了43 ku的融合蛋白。表達(dá)產(chǎn)物純化后免疫家兔,采集血清用ELISA測(cè)定抗體效價(jià),發(fā)現(xiàn)兔抗Tm Tpx重組蛋白的抗體能與多頭蚴原頭節(jié)抗原發(fā)生特異性反應(yīng),說(shuō)明該重組蛋白具有較好的免疫原性。

3 診斷

在流行區(qū),可根據(jù)本病特異的癥狀、病史和頭部觸診等作出初步診斷。確診多頭蚴病是很困難的,它容易與其臨床癥狀相同的其他疾病相混淆,如李斯特桿菌病和鼻蠅蛆綜合征等?？縿?dòng)物轉(zhuǎn)圈的方向以及頭偏斜的方向可初步判斷包囊存在的位置。

已報(bào)道血清學(xué)診斷有間接ELISA法、斑點(diǎn)免疫金濾法[23],后者具簡(jiǎn)單、方便和快捷的優(yōu)點(diǎn),在感染后35 d的血清樣本中就能檢測(cè)出抗體。

物理診斷有CT成像技術(shù)、M RI磁力共振成像技術(shù),已成功地應(yīng)用于檢測(cè)腦多頭蚴病以及包囊的確切位置和大小[24]。

分子診斷近年來(lái)應(yīng)用于囊蟲(chóng)病上的診斷技術(shù),如限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)、多重PCR(multip lex PCR)等[25]。

4 防治

藥物奧芬噠唑和100 mL/L的吡喹酮復(fù)方注射液對(duì)該病均有一定的療效,大劑量?jī)?nèi)服丙硫苯咪唑(55 mg/kg,每日1次,連用2 d)也可治愈該病[26]。此外,在給藥方法上,沈秀英等[27]采用藥物增量法與藥物聯(lián)合法治療該病,該法可以較好的解決藥物治療囊蟲(chóng)病過(guò)程中發(fā)生的顱內(nèi)壓增高的問(wèn)題。Ciamak C[28]使用丙硫咪唑、芬苯噠唑和吡喹酮進(jìn)行了羊腦多頭蚴病的藥物療效對(duì)比試驗(yàn),療效最好的是丙硫咪唑(25 mg/kg,口服,連用6 d),其次是芬苯噠唑與吡喹酮的聯(lián)合用藥(100 mg/kg,口服)以及吡喹酮(25m g/kg,口服,連用7 d)。除藥物治療該病以外,采用外科手術(shù)法切除包囊,這也是成功治愈該病的方法之一[29]。

在預(yù)防該病上,首先應(yīng)加大科普宣傳,普及科學(xué)知識(shí),利用多種途徑使村民、牧民了解腦包蟲(chóng)病的傳播、發(fā)生、發(fā)展、預(yù)防的一般常識(shí)。對(duì)易感多頭蚴病的屠宰動(dòng)物嚴(yán)格檢疫,對(duì)病畜尸體進(jìn)行無(wú)害化處理,防止犬吃到帶有多頭蚴的牛、羊等動(dòng)物的腦和脊髓。定期對(duì)犬進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng),對(duì)犬糞進(jìn)行無(wú)害化處理,從而防止或避免犬糞污染牧場(chǎng)飼料及飲水[30]。

5 展望

隨著細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)以及免疫標(biāo)記等技術(shù)的迅猛發(fā)展,對(duì)腦多頭蚴病各方面的研究將會(huì)進(jìn)一步深入。目前,該病只能采用藥物和手術(shù)治療。相信隨著疫苗的研究和開(kāi)發(fā)將會(huì)為該病的控制提供更為行之有效的方法。

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