巫小莉 ，湯勇才，張 程 ，張偉紅，湯習鋒 ，周小棉

(1、廣州醫(yī)學院附屬廣州市第一人民醫(yī)院檢驗科，廣東 廣州 510180；2、廣東醫(yī)學院2005屆學生；3、廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司)

EDTA-K2是血細胞常規(guī)分析的較理想的抗凝劑，但是最近幾年里，有關由于EDTA依賴所引起的血小板假性減少的報道較多，周小棉[1]等人于2007年報道了新鮮配制的5mg/m l丁胺卡那霉素可以使血小板計數(shù)在4h內(nèi)保持穩(wěn)定，如果將此法應用在日常血常規(guī)上，將可有效防止EDTA依賴而引起的血小板假性減少，減少臨床誤診，從而減輕病人的經(jīng)濟負擔，防止醫(yī)療糾紛的發(fā)生。假如批量生產(chǎn)，它的穩(wěn)定期(有效期)究竟有多長？為了探討這個問題，我們用即配新鮮EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管作為測定管，陽普公司批量制作的EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管為對照管，同步計數(shù)因EDTA依賴引起的血小板假性減少患者的血小板數(shù)，觀察批量制作的EDTA-K2丁胺卡那霉素抗凝管的穩(wěn)定期(有效期)，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 EDTA-K2抗凝管、EDTA-K2丁胺卡那霉素管均由廣州陽普醫(yī)療用品有限公司提供；丁胺卡那霉素為廣州白云山天心制藥股份有限公司產(chǎn)品；美國雅培CD-3700血細胞分析儀和配套試劑及質(zhì)控物；OLMPUS顯微鏡;WQF-410付立葉變換紅外光譜儀，北京第二光學儀器廠生產(chǎn)。

1.2 檢測標本 7例廣州市第一人民醫(yī)院住院病人靜脈血，年齡45～75歲，男的4例，女的3例。

1.3 方法 對通過篩查確診為EDTA依賴的患者，采集靜脈血，用EDTA-K2抗凝管、新鮮配制的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管、批量制作EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，分別注入2ml于各抗凝管中，輕輕顛倒搖勻；在全自動血細胞分析儀上分別測定血小板數(shù)量，觀察不同時間(即時、0.5h、1h、2h、3h、4h)各管血小板數(shù)量的變化。

2 結(jié)果

2.1 第一個月：新鮮配制的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管和廠家批量制作EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，4h內(nèi)血小板數(shù)穩(wěn)定；而沒有添加丁胺卡那霉素的EDTA抗凝管最不穩(wěn)定(數(shù)值波動最大)，其血涂片在鏡下可見血小板有明顯的聚集現(xiàn)象。見圖1。

2.2第三個月：新鮮配制的EDTA－丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計數(shù)穩(wěn)定，廠家批量制作的EDTAK2丁胺卡那抗凝管在30min內(nèi)血小板數(shù)保持穩(wěn)定，30min后，呈下降趨勢，血涂片部分血小板聚集；EDTA抗凝管的總體變化趨勢均為隨著時間的延長而血小板計數(shù)下降。見圖2。

2.3 第六個月：自配EDTA－K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計數(shù)穩(wěn)定，其血涂片中的血小板未發(fā)現(xiàn)有聚集現(xiàn)象；廠家抗凝管在1h后緩慢下降，血涂片中有少許的血小板聚集；EDTA抗凝管則最不穩(wěn)定，血涂片有明顯的血小板聚集。見圖3。

2.4 第十三個月：自配EDTA－K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血小板計數(shù)穩(wěn)定，其血涂片亦未見血小板聚集；廠家抗凝管在0.5h內(nèi)開始下降，血涂片中有少許的血小板聚集；EDTA－K2抗凝管則最不穩(wěn)定，血涂片有明顯的血小板聚集。見圖4。

2.5 三個月、十八個月的EDTA抗凝管紅外光譜對比圖：從圖中對比可以看出，兩個生產(chǎn)日期的抗凝管在紅外光譜中存在不同，在吸光度約1100nm和600nm出現(xiàn)了不同的峰值，說明管內(nèi)物質(zhì)發(fā)生了變化，這種變化是否就是造成EDTA－K2丁胺卡那抗凝管的不穩(wěn)定因素，需進一步確證。見圖5。

表1 EDTA-K2與EDTA-K2丁胺卡那抗凝管4h內(nèi)血液參數(shù)的比較

3 討論

PTCP是由于血液在EDTA鹽抗凝作用中，EDTA誘導血小板中的特殊蛋白使血小板發(fā)生凝聚而引起，當用全自動血液分析儀檢測時，不能準確計數(shù)血小板，而導致血小板發(fā)生假性減少的現(xiàn)象，據(jù)報道，EDTA導致血小板聚集的原因與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關[2]。

據(jù)國際血液學標準委員會(ICSH)1993年的文件建議，血細胞計數(shù)宜用EDTA鹽抗凝，其他抗凝劑均不適合于血細胞計數(shù)。EDTA與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物,從而阻止血液凝固[3]，因EDTA對血細胞形態(tài)影響很小，特別適用于全血細胞分析，已被臨床廣泛使用。對EDTA敏感而導致血小板假性減少的發(fā)生率雖然只有0.007%～1%，但也一直困擾著臨床。

周小棉[1]等人于2007年報道了新鮮配制的5mg/ml丁胺卡那霉素可以使得血小板計數(shù)在4h內(nèi)保持穩(wěn)定，沿著這個思路，我們做了上述的實驗，希望找到徹底解決問題的方法，圖1表明，廠家批量制作的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，一個月內(nèi)作血小板計數(shù)可穩(wěn)定4h；圖2～4顯示，三個月后(下轉(zhuǎn)第370頁)到一年的EDTA－K2丁胺卡那抗凝管，血小板計數(shù)只能穩(wěn)定30min～1h，這到底是丁胺卡那和EDTA兩種物質(zhì)在一起的化學反應而造成的不穩(wěn)定，還是作為氨基糖甙類抗生素的丁胺卡那霉素半衰期而引起的不穩(wěn)定，抑或是管內(nèi)細菌所引起的不穩(wěn)定(抗凝管沒有經(jīng)過無菌處理)，機理不明了。從圖5的紅外線光譜圖可以看到，在吸光度約1100nm和600nm出現(xiàn)了不同的峰值，說明同一種物質(zhì)在不同的時間還是有差異(由于條件限制，我們只做了第3個月和第18個月的紅外線光譜圖)，這是否就是造成血小板計數(shù)的不穩(wěn)定因素，有待進一步探討。

從實驗結(jié)果見表1可以看出，往EDTA抗凝管內(nèi)加入5mg/ml丁胺卡那霉素可以有效抑制血小板聚集現(xiàn)象，計數(shù)可以穩(wěn)定4h，并且不影響其他血常規(guī)參數(shù)的測定。與周小棉等[1]所報道的可以在4h內(nèi)解聚血小板相符合，但是從實驗結(jié)果我們可以發(fā)現(xiàn)，批量加入丁胺卡那霉素的EDTA抗凝管對不同的患者作用時間有所不同，存在著個體差異，如圖2和圖3的結(jié)果所顯示。圖2與圖3為不同的患者，按預測，第六個月的檢測值應比第三個月的檢測值下降的快，但實際情況并不是我們想象(如圖2、圖3黃色線所示)，而是第三個月的檢測值比第六個月的檢測值下降的更快，就象倍比稀釋的試驗出現(xiàn)的跳管現(xiàn)象，由此可見，患者間存在著個體差異。

由于此類病人較少且難以追蹤，我們在每個時間段只能找到一到兩例病人做實驗，所以結(jié)果并不具有全面的代表性，只能起到一個提示或者說是一個拋磚引玉的作用，希望引起同道們的重視，共同探討研究，找到解決問題的方法。

[1]周小棉,巫小莉,李結(jié)秋,等.丁胺卡那霉素抑制和解離抗凝劑依賴的假性血小板聚集作用研究[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2007,30(3):333-336.

[2]周小棉,鄒 曉.假性血小板減少癥研究進展[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2007,30(9):88-92.

[3]巫小莉,周小棉,鄧穗德,等.EDTA抗凝劑依賴性假性血小板減少癥血小板計數(shù)的研究[J].實用醫(yī)學,2007,23(4):578.