丁 靖，惠伯棣*

(北京聯(lián)合大學應用文理學院，北京 100191)

番茄及其制品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素含量的C30-HPLC內(nèi)標法定量分析

丁 靖，惠伯棣*

(北京聯(lián)合大學應用文理學院，北京 100191)

目的：建立C30-HPLC內(nèi)標法對番茄及其制品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素進行同步定量檢測方法。方法：色譜條件：固定相：YMC Carotenoid column C30色譜柱 (4.6mm×250mm，5μm)；流動相A：乙腈:甲醇(3:1，V/V)；流動相B：甲基叔丁基醚(MTBE)；流動相A與B中分別添加體積分數(shù)0.05%的三乙胺；洗脫條件：B在0～10min內(nèi)保持30%，在10～20min內(nèi)，B由30%線性增至90%，20～30min內(nèi)B維持在90%；流速：1mL/min；色譜圖檢測波長470nm和450nm；進樣量：20μL；柱溫：室溫。內(nèi)標物為全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛。結(jié)果：此方法的最小定量限為0.01μg/mL。在0.3～0.6μg范圍內(nèi)，內(nèi)標物對全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的相對校正因子分別為1.36和1.22，重復性RSD分別為小于0.50%和0.70%，加樣回收率均在99.00%以上。結(jié)論：應用本方法可對番茄及其制品中的全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素進行定量分析。

番茄紅素；β-胡蘿卜素；8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛；內(nèi)標

番茄及其制品(包括番茄醬和番茄沙司等)已經(jīng)是人類日常生活中必不可少的食物。成熟的番茄果實中含有豐富的類胡蘿卜素，包括大量的番茄紅素和一定數(shù)量的β-胡蘿卜素[1]。

番茄紅素是胡蘿卜素的一種，英文習慣命名lycopene，中文系統(tǒng)命名ψ,ψ-carotene，分子式為C40H50，具有高度開放的不飽和直鏈結(jié)構(gòu)。番茄紅素廣泛地存在于番茄、西瓜、柿子、李子、木瓜、芒果、草莓、柑橘類、杏、和桃以及南瓜、蘿卜、胡蘿卜等水果蔬菜中。其中番茄及其制品中番茄紅素含量最高，據(jù)統(tǒng)計，人體所攝取的番茄紅素80%來自于番茄中。在自然界中除了主要構(gòu)象全反式番茄紅素外，還存在最常見的13-、9-和5-三種單順式異構(gòu)體[2]。不同的異構(gòu)體表現(xiàn)出的生物學功能亦不同。例如：不同的異構(gòu)體在相同濃度下，淬滅單線態(tài)氧的能力也不相同，按能力大小可排列為全反式異構(gòu)體＞13順式異構(gòu)體＞9順式異構(gòu)體[3]。

番茄中存在的β-胡蘿卜素(中文系統(tǒng)命名β, β-胡蘿卜素，英文系統(tǒng)命名β,β-carotene)以全反式構(gòu)型為主(圖1)，完全成熟后體內(nèi)一般含有5%～7%甚至含量更高的順式異構(gòu)體。最常見的順式異構(gòu)包括13-和9-順式異構(gòu)體[4]。當遇熱、光照或酸時，β-胡蘿卜素均可能異構(gòu)化。如在食品中含有β-類胡蘿卜素的全反式異構(gòu)體變成相應的順式異構(gòu)體(9-或13-Z-β-胡蘿卜素)，其作為VA源的活性就會降低，甚至失去VA活性，從而降低了其在食品中作為VA源的營養(yǎng)價值。

圖1 全反式番茄紅素(a)和β-胡蘿卜素(b)的分子結(jié)構(gòu)Fig.1 Molecular structures of all-trans-lycopene andβ-carotene

番茄及其制品被認為是人類番茄紅素營養(yǎng)的主要來源，β-胡蘿卜素(VA源)的重要來源。二者全反式異構(gòu)體的含量是評估番茄及其制品營養(yǎng)品質(zhì)的重要指標[5]。

類胡蘿卜素的高壓液相色譜分離始于20世紀70年代，至今，在C18固定相上已經(jīng)發(fā)展了一些比較成熟的方法。其缺點是不能實現(xiàn)對類胡蘿卜素幾何異構(gòu)體的分離。C30固定相是近20年在市場上出現(xiàn)的商品，其鍵合鏈長為30個碳，可以實現(xiàn)番茄紅素幾何異構(gòu)體的分離[6]。在本項研究中，嘗試選擇全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛(圖2)為內(nèi)標物，優(yōu)化已建立的對番茄紅素和β-胡蘿卜素全反式異構(gòu)體的C30-HPLC分離方法[6-9]，使內(nèi)標物與目標化合物之間、各個目標化合物之間都可達到理想的分離效果，建立對二者進行定量分析的方法。

圖2 全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的分子結(jié)構(gòu)Fig.2 Molecular structure of all-trans-8'-apo-8'-β-carotenal

1 材料與方法

1.1材料與試劑

食用番茄(應季)、番茄醬和番茄沙司 市購；番茄紅素軟膠囊 新疆紅帆生物科技有限公司。

甲醇、乙腈和甲基叔丁基醚(MTBE)均為色譜純Dikma Technologies公司；三乙胺(AR) 北京益利精細化學品有限公司；丙酮、石油醚(BP：60～90℃)、正己烷、二氯甲烷(AR) 北京化工廠；番茄紅素(L9879，純度為90%～95%)、β-胡蘿卜素參比樣品(C4582，純度≥95%)、全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛(純度＞96% (UV))(所有參比樣品使用前均未進一步純化) Sigma公司。

1.2 儀器與設備

YMC Carotenoid columu C30色譜柱(4.6mm×250mm，5μm) Waters公司；LC-20A和SPD-M20A、HPLC、MultiSpec-1501分光光度計 日本島津公司。

1.3 參比樣品工作液的配制

1.3.1 內(nèi)標物貯備液的配制

準確稱取全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛參比樣品0.01200g(準確到0.00001g)，用正己烷定容到10mL棕色容量瓶中。取1.25mL溶液稀釋定容至50mL棕色容量瓶中。在紫外分光光度計上以正己烷為背景收集200～700nm光譜。測得定溶液中全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的最大吸收波長(λmax)＝455nm，吸光度(A)為0.610663。根據(jù)已有的報道，全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的＝2640(正己烷)[10]，按Beer-Lambert定律計算定溶液的質(zhì)量濃度為92.5μg/mL。定溶液充氮后于-80℃下進行深度凍存。

1.3.2 番茄紅素參比樣品貯備液的配制

精確(至0.00001g)稱取番茄紅素參比樣品0.00100g，加入1mL二氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)移至10mL棕色容量瓶中，用石油醚定容至10mL，配制成100μg/mL的貯備液，保存于-80℃冰箱中。在24h之內(nèi)使用石油醚配成質(zhì)量濃度適當?shù)墓ぷ饕海糜贖PLC分析。

1.3.3 β-胡蘿卜素參比樣品貯備液的配制

精確(至0.00001g)稱取β-胡蘿卜素參比樣品0.00100g，加入1mL二氯甲烷溶解，轉(zhuǎn)移至10mL棕色容量瓶中，用二氯甲烷定容至10mL，配制成100μg/mL的貯備液，保存于-80℃冰箱中。在24h之內(nèi)用二氯甲烷配成質(zhì)量濃度適當?shù)墓ぷ饕?，用于HPLC分析。

1.3.4 混合參比樣品溶液的配制

精確量取全反式番茄紅素、全反式β-胡蘿卜素和內(nèi)標物全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的參比樣品貯備液，用正己烷:丙酮(75:25，V/V)將3種參比樣品混合物溶解、定容于10mL棕色容量瓶中，使得混合溶液中全反式β-胡蘿卜素、全反式番茄紅素和內(nèi)標物最終的質(zhì)量濃度分別為30μg/mL?；旌弦河?80℃下進行深度凍存，用于HPLC分析。

1.4 色譜條件

C30固定相：YMC Carotenoid columu C30色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相A：乙腈:甲醇(3:1，V/V)；流動相B：甲基叔丁基醚(MTBE)；流動相A與B中分別添加體積分數(shù)0.05%的三乙胺；在0～10min內(nèi)，B維持在30%，在10～20min內(nèi)B由30%～90%，在20～30min，B維持在90%；流速：1mL/min；PDA光譜收集范圍：300～600nm；色譜圖監(jiān)測波長：內(nèi)標物和全反式β-胡蘿卜素：450nm，全反式番茄紅素：470nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。

1.5 樣品處理

將6個同批次色澤均勻的番茄果實(200～250g)分別切成碎塊，混勻。各取1/4質(zhì)量的碎塊合并放入搗碎機中。搗碎前加入1g碳酸鈉以中和細胞破碎時釋放出的有機酸。搗碎3次，每次90s。準確(至0.0001g)稱取0.5g果實勻漿置于研缽中，加入0.1mL內(nèi)標物儲備液、4倍體積的丙酮和加少量石英砂，研磨、靜置，用滴管小心移出上清液，再加入等體積的丙酮。重復(6次)提取直至上清液和殘渣均為無色。合并收集上清液于分液漏斗中，加入等體積的正己烷和水搖勻后靜置分層，棄去下相。用等體積蒸餾水洗滌上相2～3次。收集上相，用氮氣吹干，充氮氣保存于-80℃冰箱中，24h內(nèi)用于HPLC分析。分析前將提取物用正己烷定容到1mL EP管中，用0.45μm濾膜過濾。所有操作均在暗光下進行，使用棕色玻璃器皿盛放溶液，以阻止目標化合物光敏氧化降解的發(fā)生。

準確(至0.0001g)稱取0.5g番茄沙司，如上所述進行萃取。萃取前加入0.1mL內(nèi)標物儲備液。

準確(至0.0001g)稱取0.2g番茄醬，如上所述進行萃取。萃取前加入0.1mL內(nèi)標物儲備液。

1.6 重復性與回收率評價

將番茄紅素和β-胡蘿卜素貯備液各取出1mL放入10mL容量瓶中，用二氯甲烷定容至10mL，配制成10 μg/mL的工作液。

準確稱取同批次番茄果實勻漿物0.5g，提取之前各加入1.5mL番茄紅素和0.2mLβ-胡蘿卜素工作液，按1.5節(jié)方法處理樣品，進行內(nèi)標法定量分析，重復6次，計算相對標準偏差(RSD)和回收率。

準確稱取0.2g番茄醬和0.5g番茄沙司，提取之前各加入2mL番茄紅素和0.05mLβ-胡蘿卜素工作液、8mL番茄紅素和0.6mLβ-胡蘿卜素工作液進行處理，按照同樣的方法計算相對標準偏差(RSD)和回收率。

1.7 檢測下限測定

按信噪比RSN=2測定并計算內(nèi)標物及全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的檢測下限。

1.8 樣品含水量的測定

準確(至0.0001g)稱取番茄果實勻漿于玻璃表面皿(φ =10cm)中，在70℃負壓(-0.08MPa)干燥箱中烘至質(zhì)量恒定。用減質(zhì)量法稱量樣品干質(zhì)量。每個樣品做6分平行，取平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 全反式番茄紅素、β-胡蘿卜素和全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的色譜行為及光譜特征

圖3為全反式番茄紅素、β-胡蘿卜素和全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的色譜行為。圖4為組分Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的電子吸收光譜。根據(jù)其光譜特征和已有的報道[11]，三者可以定性。圖3、4表明：1)全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛與其他二者有良好分離。全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛組分的保留時間較短，距全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素組分較遠。如果將此方法應用到其他樣品中，如光合組織(含有豐富的葉綠素和多種含氧類胡蘿卜素)提取物和動物血清及肝臟提取物(含有多種含氧類胡蘿卜素)時，全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛組分的檢測信號可不受干擾。2)根據(jù)惠伯棣等[11]的報道，三者中順式異構(gòu)體的比例很少，可以將其作為全反式異構(gòu)體的參比樣品使用；3)全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛的最大吸收波長與全反式-β-胡蘿卜素的接近，二者均可采用450nm為檢測波長。全反式番茄紅素的檢測波長宜為470nm。但在PDA上，同時獲得450nm和470nm的色譜圖是完全可行的。

圖3 參比樣品混合物的HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of mixed reference samples

目前，已用到包括全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛、β-胡蘿卜素的C45類似物、β-胡蘿卜素的C50類似物、(2R,2'R)-2,2'-二甲基-β-胡蘿卜素以及非類胡蘿卜素類的蘇丹紅Ⅰ在內(nèi)的物質(zhì)作為類胡蘿卜素檢測的內(nèi)標物。相比之下，β-胡蘿卜素的C50類似物的低溶解性和易降解性對分析檢測來說不是很理想，并且其最大波長在502nm，距離天然胡蘿卜素的平均最大波長450nm較遠。β-胡蘿卜素的C45類似物和(2R,2'R)-2,2'-二甲基-β-胡蘿卜素目前尚無法商業(yè)獲得，只能通過各實驗室自行合成獲得。蘇丹紅Ⅰ作為非類胡蘿卜素與目標化合物在結(jié)構(gòu)上無相似性，且其具有強烈的致癌作用，對分析人員的健康不利[12-14]。

綜上所述，選擇全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛作為全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的內(nèi)標是具有可行性的。

表1 內(nèi)標物和全反式番茄紅素的相對校正因子Table 1 Relative correction factors of internal standard and all-trans-lycopene

2.2 相對校正因子的測定

絕對校正因子的定義見式(1)：

式中：mi為被測物的質(zhì)量；Ai為在檢測響應信號(峰面積)；fi為單位峰面積所代表的某組分的含量。

相對校正因子的定義見式(2)：

式中：fi和fs分別為被測物和內(nèi)標物的絕對校正因子，fi'表示相對校正因子。在本項研究中，需要分別測定全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素(被測物)對全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛(內(nèi)標物)的相對校正因子。根據(jù)公式(3)計算組分i(全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素)的質(zhì)量濃度：

式中：ρi為樣品中組分i的質(zhì)量濃度；Vi為樣品的進樣體積；Ai為組分i的峰面積；ρs、Vs和As分別為內(nèi)標物的質(zhì)量濃度、進樣體積和峰面積。

2.2.1 相對校正因子的測定

相同質(zhì)量濃度的全反式番茄紅素、β-胡蘿卜素與內(nèi)標物全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛在色譜圖上具有不同的響應值(即峰面積)，并呈現(xiàn)出一定的相關(guān)性，結(jié)果見表1、2。

2.2.2 被測物含量的計算

由表1可知，全反式番茄紅素的相對校正因子為1.36，故可得到樣品中全反式番茄紅素的計算公式：

式中：ρi為樣品中全反式番茄紅素的質(zhì)量濃度，Vi為樣品的進樣體積，Ai為全反式番茄紅素的峰面積；Vs和As分別為內(nèi)標物的質(zhì)量濃度、進樣體積和峰面積。

同樣，全反式β-胡蘿卜素的相對校正因子為1.22，故可得到計算樣品中全反式β-胡蘿卜素的公式：

表2 內(nèi)標物和全反式β-胡蘿卜素的峰面積及相對校正因子Table 2 Relative correction factors of internal standard and all-trans-β-carotene

式中：ρi為樣品中全反式β-胡蘿卜素的質(zhì)量濃度；Vi為樣品的進樣體積；Ai為全反式β-胡蘿卜素的峰面積；ρs、Vs和As分別為內(nèi)標物的質(zhì)量濃度、進樣體積和峰面積。

2.2.3 相對較正因子計算公式的準確性

表3 相對較正因子計算公式準確性(番茄果實)Table 3 Precision for the calculation of relative correction factors (raw tomato)

表4 相對較正因子計算公式準確性(番茄醬)Table 4 Precision for the calculation of relative correction factors (tomato paste)

表5 相對較正因子計算公式準確性(番茄沙司)Table 5 Precision of the calculation of relative correction factors (tomato sauce)

采用標準曲線的方法驗證相對較正因子計算公式(即使用內(nèi)標物代替參比樣品)的準確性。各取番茄紅素和β-胡蘿卜素貯備液，分別用二氯甲烷配制成系列質(zhì)量濃度為100.00、80.00、60.00、40.00、20.00、10.00、0μg/mL的工作液。各取20μL進行HPLC分析，色譜條件見1.4節(jié)。做質(zhì)量濃度-峰面積線性回歸，得到回歸曲線和方程，計算R2值。可得番茄紅素的回歸方程：y=212181x，R2=0.9738；β-胡蘿卜素的回歸方程：y=176817x，R2=0.9853。相對誤差以公式計算質(zhì)量濃度對回歸方程測量濃度的偏差百分比來計算，結(jié)果見表3～5。由表5可得，使用全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛作為內(nèi)標物的番茄果實、番茄醬和番茄沙司中全反式番茄紅素及全反式β-胡蘿卜素的相對誤差全部都小于5%，因此可以說明用內(nèi)標物作為參比樣品替代物來計算番茄及其制品中的全反式番茄紅素和全反式β-胡蘿卜素的計算公式是準確的。

2.3 重復性與回收率分析

表6～8分別為番茄果實、番茄醬和番茄沙司提取物的重復性與回收率分析結(jié)果。其中番茄果實、番茄醬和番茄沙司中全反式番茄紅素的重復性的相對標準偏差(RSD)均小于0.50%，而全反式-β-胡蘿卜素的重復性的相對標準偏差均小于0.70%，故說明系統(tǒng)的重復性良好；同時3種樣品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的加樣回收率均大于99.00%，均有較高的回收率。

2.4 內(nèi)標物的檢測下限

按信噪比RSN＝2計算，檢出下限為0.01μg/mL。2.5番茄及其制品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素質(zhì)量濃度檢測

圖5 番茄果實提取物的HPLC色譜圖Fig.5 HPLC chromatogram of raw tomato extract

表6 重復性與回收率分析(番茄果實，n=6)Table 6 Assessments for reproducibility and recovery rates of the established method (raw tomato, n=6)

表7 重復性與回收率分析(番茄醬,n=6)Table 7 Assessments for reproducibility and recovery rates of the established method (tomato paste, n=6)

表8 重復性與回收率分析(番茄沙司,n=6)Table 8 Assessments for reproducibility and recovery rates of the established method (tomato sauce, n=6)

圖6 番茄醬提取物的HPLC色譜圖Fig.6 HPLC chromatogram of tomato paste extract

圖7 番茄沙司提取物的HPLC色譜圖Fig.7 HPLC chromatogram of tomato sauce extract

表9 不同樣品中反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的含量Table 9 Contents of all-trans-lycopene and all-trans-β-carotene in different samples

由圖5～7可知，番茄紅素和β-胡蘿卜素在番茄加工成番茄醬和番茄沙司過程中反順異構(gòu)的比例(峰面積之比)分別為：番茄紅素由670.34變?yōu)?.33和10.02；β-胡蘿卜素由73.34變?yōu)?.08和30.32，表明異構(gòu)化明顯[15-16]。

根據(jù)公式(4)、(5)可計算出各樣品中所含全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素的量，結(jié)果見表9。

3 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明：運用C30-HPLC色譜系統(tǒng)，以乙腈:甲醇(3:1，V/V)作為流動相A，甲基叔丁基醚(MTBE)作為流動相B，在線性梯度洗脫條件下，內(nèi)標物全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛、番茄紅素和β-胡蘿卜素可以獲得良好的分離，同時三者的最大吸收波長均在450nm附近，且具有相似的光譜特征，故選擇全反式-8'-阿樸-8'-β-胡蘿卜素醛作為參比樣品的替代物可行。使用內(nèi)標物建立的相對較正因子計算公式經(jīng)過驗證，其在計算番茄及其制品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素含量時的相對誤差均小于5%，證明計算公式準確且重復性好。采用內(nèi)標物替代法進行番茄果實及其不同制品中全反式番茄紅素和β-胡蘿卜素含量的測定，方法切實可行，結(jié)果準確，為研究不同異構(gòu)體的生物學功能和效價及生理功能提供了參考。

[1]劉沐霖, 惠伯棣, 龐克諾. 番茄及其制品中番茄紅素含量的C18-HPLC-PDA定量分析[J]. 食品科學, 2007, 28(7): 453-456.

[2]劉沐霖, 惠伯棣, 龐善春. 番茄紅素人工合成品與天然產(chǎn)物的鑒定[J]. 食品科學, 2007, 28(9): 462-466.

[3]李京, 惠伯棣. 幾何異構(gòu)化對番茄紅素淬滅單線態(tài)氧功能的影響[J].食品科學, 2007, 28(8): 104-107.

[4]惠伯棣, 張艷, 葉珊. 鹽生杜氏藻軟膠囊中β,β-胡蘿卜素幾何異構(gòu)體組成的測定[J]. 食品科學, 2008, 29(6): 284-287.

[5]龐善春, 惠伯棣, 劉沐霖. 天然番茄紅素軟膠囊的生產(chǎn)工藝和質(zhì)量控制點分析[J]. 食品科學, 2007, 28(8): 619-624.

[6]惠伯棣, 李京, 裴凌鵬. 應用C30-HPLC-PDA分離與鑒定番茄紅素幾何異構(gòu)體[J]. 食品工業(yè)科技, 2006(7): 49-54.

[7]惠伯棣, 李京, 孫拿拿, 等. 番茄和胡蘿卜中類胡蘿卜素的C30與C18 HPLC分離[J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2006(4): 289-292.

[8]李京, 惠伯棣. 秋橄欖果實中番茄紅素含量與幾何異構(gòu)體組成分析[J]. 食品工業(yè)科技, 2006(10): 64-65.

[9]李京, 惠伯棣. 番茄紅素在體內(nèi)代謝中的幾何異構(gòu)體組成變化[J]. 食品科學, 2008, 29(9): 591-594.

[10]VASQUEZ-CAICEDO A L, SRUAMSIRI P, CARLE R, et al. Accumulation of all-trans-β-carotene and its 9-cis and 13-cis stereoisomers during postharvest ripening of nine thai mango cultivars[J]. Agric Food Chem, 2005, 53: 4827-4835.

[11]惠伯棣, 劉沐霖, 龐克諾, 等. 食品中類胡蘿卜素幾何異構(gòu)體組成的C30-HPLC檢測[J]. 中國食品添加劑, 2007(2): 201-210.

[12]KHACHIK F, SPANGLER C J, SMITH J C, Jr. Identification, quantification, and relative concentrations of carotenoids and their metabolites in human milk and serum[J]. Anal Chem, 1997, 69: 1873-1881.

[13]KHACHIK F, BEECHER G R. Application of a C-45-P-carotene as an internal standard for the quantification of carotenoids in yellow/orange vegetables by liquid chromatography[J]. J Agric Food Chem, 1987, 35: 732-738.

[14]XU F, YUAN Q F, DONG H R. Determination of lycopene and βcarotene by high-performance liquid chromatography using sudan I as internal standard[J]. Journal of Chromatography B, 2006, 838: 44-49.

[15]劉翔, 惠伯棣, 張爽, 等. 中式烹飪對番茄中類胡蘿卜素組成的影響[J]. 食品科學, 2008, 29(11): 98-101.

[16]惠伯棣, 李京, 裴凌鵬, 等. C30-HPLC-PDA分離與鑒定β,β-胡蘿卜素幾何異構(gòu)體[J]. 食品科學, 2006, 27(10): 252-255.

Quantification of All-trans-lycopene andβ-Carotene from Tomato and Its Products by Internal Standard Method on C30-HPLC

DING Jing，HUI Bo-di*
(College of Applied Arts and Science, Beijing Union University, Beijing 100191, China)

Objective: To establish a simultaneous determination method for all-trans-lycopene and β-carotene by internal standard on C30-HPLC. Methods: Stationary phase, YMCTMCarotenoid column C30 (4.6 mm×250 mm, SOD-5μm, Waters); mobile phase A, CH3CN-MeOH (3:1, V/V); mobile phase B, MTBE; both A and B with the addition of 0.05% triethylamine; elution, 30% B in 0-10 min, a linear increase of mobile phase B from 30% to 90% in 10-20 min and 90% mobile phase in 20-30 min; flow rate, 1 mL/min; PDA wavelength range, 300-600 nm; monitoring wavelength, 470 nm and 450 nm; injection volume, 20μL; column temperature, room temperature. Results: Minimum detection limit of this method was 0.01μg/mL. In the range of 0.3-0.6μg internal standard, relative correction factor of internal standard to all-trans-lycopene andβ-carotene were 1.36 and 1.22, respectively. The relative standard deviations of reproducibility experiments were 0.50% and 0.70%, respectively. The recovery rates of this method were higher than 99.00%. Conclusion: The established method is suitable for the determination for all-trans-lycopene andβ-carotene in tomato and its products.

lycopene；β-carotene；8'-apo-8'-β-carotenal；internal standard

TS201.2

A

1002-6630(2010)24-0348-07

2010-09-10

“十一五”國家科技支撐計劃項目(2008BAI58B06)

丁靖(1983—)，女，碩士研究生，研究方向為類胡蘿卜素化學及生物化學。E-mail：ading1110@126.com

*通信作者：惠伯棣(1959—)，男，教授，博士，研究方向為類胡蘿卜素化學及生物化學。E-mail：bodi_hui@ygi.edu.cn