蘇永恒,張榕杰,冶保獻(xiàn)

1)河南省疾病預(yù)防控制中心理化實(shí)驗(yàn)室鄭州 450016 2)鄭州大學(xué)化學(xué)系鄭州 450001△男,1979年12月生,本科,主管技師,研究方向:衛(wèi)生檢驗(yàn),E-mail:uplc@hotmail.com

多菌靈,化學(xué)名稱為2-(甲氧基甲酰氨基)-苯并咪唑,屬于苯并咪唑類藥物[1],廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果等農(nóng)作物的病害防治工作。多菌靈化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,能被植物的種子、根和葉吸收,殘效期較長,對人、畜均有一定毒性,可引起抽搐、精神恍惚、惡心、嘔吐、胸悶和頭暈等中毒癥狀[2],因此研究測定多菌靈殘留的方法很有必要。目前對于多菌靈的提取富集方法主要有:液液萃取法[3]、固相萃取法[4-5]和二氧化碳超臨界萃取法[6]等;測定方法主要有分光光度法[7]、毛細(xì)管電泳法[4]、氣相色譜法[8]、液相色譜法[9]及液相色譜-質(zhì)譜法[10-11]等,而對于采用固相萃取前處理方法以及液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定相結(jié)合的方法尚未見報道。作者根據(jù)多菌靈的性質(zhì),建立了一種簡單、快速和靈敏的測定蔬菜、水果中殘留多菌靈的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析方法,并應(yīng)用于實(shí)際樣品中多菌靈殘留量的測定,取得了滿意的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑 ACQUITY UPLC-Quattro Premier XE超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀(UPLC-MS/MS,美國Waters公司),配有電噴霧離子源(ESI);固相萃取裝置,離心機(jī)等。Oasis HLB固相萃取柱(美國Waters公司),用前依次用3 m L甲醇和3m L水進(jìn)行活化。多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品(德國Dr.Ehrenstorfer GmbH),甲醇、乙腈均為色譜純試劑(美國Fisher公司)。

1.2 前處理方法 取市售的茄子、蘋果的可食部分粉碎,勻漿,加入甲醇振蕩提取,離心后,取上清液通過經(jīng)活化過的Oasis HLB固相萃取柱富集凈化后,先用3mL水洗,棄去洗脫液,再用3 mL甲醇洗脫,收集洗脫液,濾膜過濾后上UPLC-MS/MS儀測定。1.3 UPLC-MS/MS測定條件 色譜條件:色譜柱為Waters UPLCBEH(2.1mm×50mm,1.7μm),流動相為水:乙腈(體積比為60:40),流速為0.25 mL/min,柱溫為30℃,進(jìn)樣體積為5.0μL。質(zhì)譜條件:ESI,正離子電離模式電離。質(zhì)譜掃描方式:多反應(yīng)離子監(jiān)測(MRM)。毛細(xì)管電壓為3.0 kV,離子源溫度為 120℃,脫溶劑氣溫度為 350℃,脫溶劑氣流量為600 L/h,碰撞氣流量為0.25 mL/m in。

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的選擇 通過加標(biāo)富集的方法測試J.T.Baker C18(500 mg,6 m L)、Oasis HLB(60 mg,3 mL)、Cleanert PEP(60mg,3m L)、ProElut PXC (60mg,3m L)和OasisMCX(60mg,3mL)等幾種固相萃取柱的凈化富集效果。在弱酸性條件下,C18柱的回收率為67%～78%,PXC、MCX和PEP的回收率達(dá)到80%～96%,而Oasis HLB對多菌靈的回收率達(dá)到 95%～102%。多菌靈為弱堿性化合物,弱酸性條件下性質(zhì)穩(wěn)定,因此選用Oasis HLB固相萃取柱作為測定多菌靈時的前處理固相萃取柱。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 色譜柱的選擇 選擇包括普通C18、陽離子交換十八烷基硅膠柱(1:4)和Waters UPLC BEH色譜柱在內(nèi)的幾種常用的商品色譜柱來進(jìn)行篩選,實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn) C18柱分離多菌靈時出現(xiàn)明顯托尾現(xiàn)象,而用陽離子交換十八烷基硅膠柱(1:4)和Waters UPLC BEH時能得到最為理想的峰型,其中以Waters UPLC BEH C18色譜柱的響應(yīng)值為最高,故最終選擇Waters UPLC BEH色譜柱來分離多菌靈。

2.2.2 流動相的選擇 對常用的揮發(fā)鹽水溶液-乙腈、水-乙腈流動相體系進(jìn)行了比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn) 2種流動性體系都能對多菌靈進(jìn)行有效地分離,而采用水-乙腈做流動相時多菌靈的響應(yīng)值更高。這可能是由于質(zhì)譜采用的 ESI電離源為正離子電離模式,多菌靈在乙腈-水體系中比在緩沖鹽中更容易電離,有利于正離子的形成。

2.3 質(zhì)譜條件的優(yōu)化 采用流動注射的方式,分別對毛細(xì)管電壓、源溫度、脫溶劑氣溫度、脫溶劑氣流量、錐孔電壓以及碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。多菌靈測定質(zhì)譜參數(shù)見表 1,多菌靈子離子質(zhì)譜圖和多菌靈空白樣品加標(biāo)總離子圖見圖 1、2。

表1 多菌靈MRM模式測定質(zhì)譜參數(shù)

2.4 方法的線性和檢出限 稱取10.0 mg多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解于10.0m L容量瓶中,得到1.0 g/L的標(biāo)準(zhǔn)儲備液,使用時用甲醇稀釋成 0.005～1.000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液,按標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度由低到高注射進(jìn)入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測定,以質(zhì)量濃度對定量離子峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果顯示,峰面積與多菌靈質(zhì)量濃度在0.005～1.000mg/L范圍具有良好的線性關(guān)系,儀器檢測限為1.0μg/L,線性回歸方程為Y=668 971X-461.701,R2=0.999 2。

2.5 方法的準(zhǔn)確度和精密度 以回收實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率表示準(zhǔn)確度,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)表示方法的精密度。根據(jù)上述方法對 3種基質(zhì)(茄子、蘋果、桔子)的空白陰性樣品分別進(jìn)行3個水平(20、50及 100μg/kg)的加標(biāo)實(shí)驗(yàn),每個水平設(shè)6個平行,結(jié)果見表2。

表2 蔬菜、水果中多菌靈加標(biāo)回收率和RSD(n=6)

2.6 實(shí)際樣品測定 根據(jù)上述方法,隨即抽取市場上的茄子和蘋果 2種樣品 12份進(jìn)行測定,具體測定結(jié)果見表3。

表3 茄子和蘋果實(shí)際樣品中多菌靈測定結(jié)果 μg/kg

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