張洪宇 趙浩亮 郭強(qiáng)

(山西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科 山西太原 030001)

慢性胰腺炎(CP)是胰腺實(shí)質(zhì)的反復(fù)性或持續(xù)性炎癥致胰腺部分廣泛纖維化或鈣化,或伴有腺泡萎縮,胰腺導(dǎo)管內(nèi)結(jié)石形成,假囊腫形成的一種疾病。

慢性胰腺炎的形態(tài)學(xué)特征是胰腺組織的進(jìn)行性纖維化,胰腺纖維化主要是由于胰腺組織中以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)(extra cellular matrix,ECM)合成與沉積增加,降解減少,兩者失去動(dòng)態(tài)平衡所致[1]。HA是細(xì)胞外間質(zhì)成分的一種大分子葡胺多糖,在細(xì)胞粘附,創(chuàng)傷愈合,腫瘤發(fā)生和血管形成中起重要作用。LN是一種重要的ECM成分,廣泛存在于動(dòng)物及人類(lèi)細(xì)胞基底膜基質(zhì)中。丹參是臨床常用傳統(tǒng)中藥,能改善微循環(huán)、有抗凝、促進(jìn)纖維蛋白溶解,抗氧自由基,抑制血小板聚集,能改善細(xì)胞功能的作用[2]。本研究旨在探討觀察丹參注射液對(duì)實(shí)驗(yàn)性胰腺纖維化血清中HA和LN表達(dá)的影響,初步探討其對(duì)胰腺纖維化的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料

雄性Spraque-Daw ley大鼠,體重200～300g,購(gòu)自山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。三硝基苯磺酸(TNBS)為Sigma公司產(chǎn)品(批號(hào)107K5008)。丹參注射液購(gòu)于福建古天藥業(yè)有限公司,HA和LN試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組和造模 雄性大鼠50只隨機(jī)分成5組:正常組、模型組、丹參大、中、小劑量干預(yù)組各10只。模型組及干預(yù)組采用胰膽管中注入2%三硝基苯磺酸溶液的方法[3],制備慢性胰腺炎模型。造模后,干預(yù)組大鼠術(shù)后72h肌肉注射不同劑量的丹參注射液,正常組、模型組均肌肉注射等量生理鹽水,各組大鼠均術(shù)后第4周處死。

1.2.2 檢測(cè)指標(biāo)和方法 所有觀察對(duì)象抽取靜脈血,分離血清,轉(zhuǎn)離心,取上清液進(jìn)行檢測(cè)。采用光度酶聯(lián)免疫分析法(ELLSA)檢測(cè)正常組,對(duì)照組,干預(yù)組中的HA和LN的含量。部分胰腺組織做病理切片,膠原Ι染色,進(jìn)行纖維化分析。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理,所有數(shù)據(jù)用(±s)表示,含量正常組和干預(yù)組比較采用Dunnett檢驗(yàn),各個(gè)干預(yù)組之間的比較采用LSD-t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 胰腺組織學(xué)觀察

正常組大鼠胰腺無(wú)明顯病理改變,模型組大鼠胰腺明顯萎縮,可見(jiàn)胰腺間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),間質(zhì)膠原纖維增生,胰管增生擴(kuò)張,管周及胰腺小葉內(nèi)纖維化伴炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),腺泡萎縮。干預(yù)組中亦發(fā)生了胰腺纖維化,但較模型組纖維化程度減輕,且隨著丹參干預(yù)組劑量的增加胰腺纖維化程度呈現(xiàn)逐步減輕的趨勢(shì)。

2.2 血清中HA和LN的含量

2.3 丹參干預(yù)組中各劑量組的療效

由上述表1,圖1、2可以看出,小劑量,中劑量,大劑量組對(duì)慢性胰腺炎均有療效,其中以大劑量組的療效最為明顯。

3 討論

圖1 透明質(zhì)酸各組均數(shù)比較線(xiàn)圖

圖2 透明質(zhì)酸各組均數(shù)比較線(xiàn)圖

胰腺纖維化與慢性胰腺炎的關(guān)系十分密切,慢性胰腺炎的主要病理特征是胰腺纖維化,胰腺纖維化可是慢性胰腺炎遷延不愈,二者相互促進(jìn)、相互影響[4]。目前已經(jīng)公認(rèn)氧化應(yīng)激是導(dǎo)致胰腺纖維化的一個(gè)重要因素,其在組織炎癥和修復(fù)的過(guò)程中氧化應(yīng)激激活靜息狀態(tài)的胰腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell,PSC),通過(guò)降低機(jī)體抗氧化能力和增加氧化損傷參與慢性胰腺炎的纖維化過(guò)程。LN屬于結(jié)構(gòu)性蛋白,存在于基底膜的透明層中,在胰腺纖維化是沉淀于胰腺血竇,使胰腺血竇毛細(xì)血管化,增加胰腺血竇阻力,使胰腺血清中LN含量增高[5]HA作為細(xì)胞外基質(zhì)的成分及合成時(shí)的中間產(chǎn)物,其血清濃度可一定程度反應(yīng)細(xì)胞外基質(zhì)的沉積量及活躍程度。因此通過(guò)血清中HA和LN的含量測(cè)定可以判斷胰腺纖維化程度。

丹參有效成分為丹參酮(Ⅰ、ⅡA、ⅡB)、異丹參酮(ⅠⅡA),現(xiàn)代藥理研究表明:丹參具有防止鈣超載,消除氧自由基及改善微循環(huán),作為丹參的主要陳分丹參酮ⅡA是一種新的有效的細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物與DNA相互作用的抑制劑。國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)應(yīng)用各種不同的實(shí)驗(yàn)方法對(duì)心肌肌質(zhì)網(wǎng)膜脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中產(chǎn)生的脂類(lèi)自由基的消除作用研究發(fā)現(xiàn),它對(duì)DNA的保護(hù)作用很可能是通過(guò)消除脂類(lèi)自由基而阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng),抑制DNA合成物的生成,從而減少了后者的細(xì)胞毒性[6]。這些研究都表明丹參酮有促進(jìn)機(jī)體對(duì)氧自由基的代謝、降低自由基水平的作用,其機(jī)理可能是是丹參酮ⅡA通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞中的超氧化物歧化酶(SOD)水平,并通過(guò)這一機(jī)制降低丙二醛(MDA)水平,從而減少細(xì)胞中的氧自由基,保護(hù)細(xì)胞免受損傷。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究不同濃度的丹參注射液對(duì)大鼠慢性胰腺炎的干預(yù),從而探討丹參注射液對(duì)慢性胰腺炎的治療作用。大鼠胰腺組織病理形態(tài)學(xué)改變和膠原纖維染色分析結(jié)果均支持丹參具有改善胰腺纖維化的作用。大鼠慢性胰腺炎模型組中HA和LN含量明顯增高,用大、中、小3種劑量的丹參對(duì)大鼠慢性胰腺炎模型進(jìn)行治療,均能使血清中HA和LN含量降低,其中以大劑量組療效最為明顯,以上均說(shuō)明丹參注射液可以有效延緩胰腺纖維化的發(fā)生,有較好的治療效果。

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表1 不同組各指標(biāo)的均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差

注:與正常組相比,P<0.05;與模型組相比，P<0.05