肖琛聞 鮑國(guó)連 韋 強(qiáng) 劉 燕 季權(quán)安

鴨疫里氏桿菌病又稱(chēng)鴨傳染性漿膜炎，是由鴨疫里氏桿菌(RA)引起的鴨、鵝、火雞等多種禽類(lèi)的一種急性或慢性傳染病。1～8周齡鴨敏感，惡劣環(huán)境條件可以促發(fā)感染。發(fā)病率為5%～90%，病死率高達(dá)80%，慢性耐過(guò)鴨主要表現(xiàn)神經(jīng)性癥狀，導(dǎo)致殘鴨和僵鴨。RA疫苗分滅活苗、弱毒活苗和亞單位菌苗等。高福等在研制RA福爾馬林滅活苗的基礎(chǔ)上，制得了礦物油佐劑滅活苗，最低保護(hù)率為75%，但注射部位有微弱的不吸收硬結(jié)。蘇小運(yùn)等研制的鋁膠滅活苗一免后7～10d保護(hù)率為50%，20d后保護(hù)率為75%，保護(hù)率出現(xiàn)較慢。弱毒苗的缺點(diǎn)是容易造成細(xì)菌在被免動(dòng)物體內(nèi)返毒，危害更大；亞單位菌苗雖然能夠提供較好的保護(hù)力，但其存在潛在的不確定性，因而暫時(shí)仍不能推廣?，F(xiàn)在還沒(méi)有理想的鴨疫里氏桿菌疫苗。

很多研究報(bào)道中藥復(fù)方也可作為佐劑，有增強(qiáng)疫苗免疫的效果，例如當(dāng)歸補(bǔ)血湯、四君子湯、玉屏風(fēng)散、小柴胡湯等。本研究試圖將玉屏風(fēng)散、四君子湯以及兩者之合方玉風(fēng)君子湯用于鴨疫里氏桿菌滅活濕苗中，觀察其免疫佐劑效果，為新型鴨疫里氏桿菌疫苗的開(kāi)發(fā)提供新的思路。

(1)玉屏風(fēng)散的水煎劑(YPF)

取黃芪90g、白術(shù)60g、防風(fēng)30g，加水540ml(按每克生藥加水3ml)，冷水浸泡30 min。煮沸后90℃慢煎40

min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，二煎加水360 ml(按每克生藥加水2 ml)，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至150ml，濃度為1.2g／ml。

(2)四君子湯的水煎劑(SJZ)

取黨參40g、白術(shù)18g、茯苓18g、甘草12g，混合加水264ml，煮沸后90℃慢煎40min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，二煎加水176 ml，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至100ml，濃度為0.88g／ml。

(3)玉風(fēng)君子湯(YFJZ)

黃芪90g、白術(shù)60g、茯苓30g、防風(fēng)30g、黨參30g、甘草10g，混合加水750ml，煮沸后90℃慢煎40 min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，二煎加水500ml，煮沸后，90℃慢煎40min，趁熱過(guò)濾，濾液自然滴盡，合并濾液，95℃水浴濃縮至250ml，濃度為1 g／ml。

試驗(yàn)結(jié)果表明在免疫后3周，合方組能夠顯著提高鴨對(duì)于鴨疫里氏桿菌的抗體水平。玉屏風(fēng)散能夠提高鴨對(duì)于RA抗體的產(chǎn)生水平，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，四君子湯似乎對(duì)細(xì)菌苗的免疫并無(wú)佐劑作用。

有文獻(xiàn)報(bào)道玉屏風(fēng)散或四君子湯能夠提高動(dòng)物特異性或特異性免疫反應(yīng)，本研究所得結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道并不符。分析原因可能有以下幾點(diǎn)：①本研究中所使用的為細(xì)菌性疫苗，玉屏風(fēng)散或四君子湯的佐劑效果不佳或許與此有關(guān)，兩方對(duì)于病毒性疫苗的免疫效果更佳；②服用劑量不一樣可能是造成佐劑效果不明顯的原因之一。

本研究中只有合方對(duì)鴨RA抗體產(chǎn)生起顯著性作用，研究發(fā)現(xiàn)，合方對(duì)于鴨疫里氏桿菌疫苗的免疫主要在體液免疫方面發(fā)揮佐劑作用，在細(xì)胞免疫作用并不十分明顯，然而在流式細(xì)胞研究中我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)有趣的現(xiàn)象：即所有試驗(yàn)組（除四君子湯組外）CD4+、CD8+細(xì)胞百分比同對(duì)照組相比有所下降但試驗(yàn)組CD4+／CD8+比值卻高于對(duì)照組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。CD4+／CD8+的比值增高，說(shuō)明受免動(dòng)物的細(xì)胞免疫有增強(qiáng)趨勢(shì)。但為什么絕對(duì)百分比有所下降，分析原因可能與本研究中受免動(dòng)物在5日齡時(shí)就給藥有關(guān)，雛鴨在生長(zhǎng)初期免疫系統(tǒng)并沒(méi)有完全發(fā)育，在這時(shí)給雛鴨服用具有免疫調(diào)節(jié)功能的中藥或許反而對(duì)雛鴨的免疫系統(tǒng)發(fā)育造成一種負(fù)影響。免疫系統(tǒng)的生長(zhǎng)在其后階段對(duì)于中藥具有某種依賴(lài)性，因此如何選擇一個(gè)給藥最佳時(shí)間成為今后研究的又一課題。

體重試驗(yàn)表明，所有試驗(yàn)組方劑對(duì)于鴨的生長(zhǎng)無(wú)副作用。因此，可以對(duì)本研究中的合方玉風(fēng)君子湯在鴨疫里氏桿菌疫苗上的佐劑運(yùn)用方面作進(jìn)一步研究。