蔣文俊

1.疫苗質(zhì)量方面的因素

1.1 制苗種毒

在口蹄疫疫苗生產(chǎn)中，通過病毒基因核苷酸序列分析、AC-ELBA和微量血清中和試驗(yàn)測定口蹄疫疫苗毒株和流行毒株的抗原關(guān)系，選擇病毒遺傳進(jìn)化樹中與流行毒株同源性高、免疫原性好、大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中比較穩(wěn)定、適應(yīng)性好的毒株作為疫苗毒株。制苗種毒的穩(wěn)定性決定著疫苗質(zhì)量的穩(wěn)定性，制苗種毒繼代穩(wěn)定性與毒株特性有關(guān)，一株優(yōu)秀的毒株往往需要經(jīng)過反復(fù)篩選、馴化。好的種毒決定著好的疫苗，好的疫苗決定了好的免疫效果。

1.2 傳代細(xì)胞

利用BHK-21傳代細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)口蹄疫病毒的生產(chǎn)工藝已經(jīng)非常常見，病毒的增殖復(fù)制質(zhì)量與傳代細(xì)胞制備質(zhì)量有關(guān)，傳代細(xì)胞制備不僅是疫苗生產(chǎn)的源頭，更重要的是直接影響抗原質(zhì)量。傳代細(xì)胞制備質(zhì)量的均勻、穩(wěn)定是抗原質(zhì)量均勻、穩(wěn)定的基礎(chǔ)。

1.3 病毒滅活

滅活工藝對疫苗質(zhì)量有較大的影響，在滅活過程中要盡可能減少對病毒免疫蛋白的破壞，同時(shí)要確保病毒的徹底滅活，使其喪失感染性。在實(shí)際生產(chǎn)中，滅活劑的選擇、滅活溫度及滅活時(shí)間的控制都決定口蹄疫病毒滅活的效果。

1.4 濃縮工藝

滅活抗原通過截向流超濾或PEG沉淀法進(jìn)行純化和濃縮后，應(yīng)進(jìn)行抗原完整性的檢測，這是影響疫苗效力的關(guān)鍵指標(biāo)。因?yàn)橐呙缰?46S完整病毒粒子的多少決定著疫苗質(zhì)量和免疫效果的好壞。一般認(rèn)為，起主要免疫作用的是完整病毒粒子，疫苗免疫原性與其中的146S抗原含量有密切關(guān)系；12S病毒亞單位含有能產(chǎn)生抗病毒抗體的VPl，但不產(chǎn)生高水平的中和抗體；75S空衣殼在疫苗免疫中所起的作用不是很清楚，一般認(rèn)為75S在疫苗免疫中所起作用不大。

1.5 佐劑

采用不同佐劑對口蹄疫疫苗質(zhì)量也會產(chǎn)生很大影響。油佐劑疫苗可以緩慢地持續(xù)釋放抗原以刺激免疫系統(tǒng)，引發(fā)持續(xù)的免疫反應(yīng)，血清中抗體效價(jià)比較高，但下降比較迅速；leo佐劑疫苗免疫后血清中抗體效價(jià)比較低，但下降比較平緩；水佐劑疫苗已基本淘汰。油佐劑國內(nèi)常用白油和206佐劑，國外報(bào)道的有人工合成硫辛酰胺、WSF(分支桿菌細(xì)胞壁的水溶成分制成)和Montanide ISA25。另外，相同佐劑進(jìn)口和國產(chǎn)質(zhì)量上的差異也會影響疫苗的質(zhì)量。

1.6 乳化穩(wěn)定性

乳化穩(wěn)定性是疫苗免疫后持久刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要因素，所以疫苗出廠前其物理穩(wěn)定性的測定是必不可少的，穩(wěn)定性差的疫苗注射后所產(chǎn)生的抗體滴度和接續(xù)時(shí)間必然受影響。

1.7 單價(jià)苗和多價(jià)苗

從實(shí)際使用效果來看，單價(jià)苗比多價(jià)苗的免疫保護(hù)合格率普遍要高，是否是由于相同單位劑量下單價(jià)苗抗原含量高還是因?yàn)槎鄡r(jià)苗內(nèi)抗體產(chǎn)生的相互影響。由于口蹄疫病毒O型、Asia-1型和A型之間的交叉免疫性很小，在抗體的產(chǎn)生和衰退過程中，幾種抗體的變化是否一致，是否存在不同型的抗原間相互干擾或免疫細(xì)胞對兩種抗原同時(shí)刺激的選擇性，目前還沒有一個(gè)明確說法。

1.8 效力測定

疫苗效力測定一般采用直接動物攻毒測定疫苗保護(hù)率，至少3／4免疫動物獲得攻毒保護(hù)，則該疫苗合格。但在實(shí)踐中，每一批次都進(jìn)行攻毒試驗(yàn)必然會大幅增加疫苗的生產(chǎn)成本，因此，近年逐漸使用微量血清中和試驗(yàn)、液相阻斷ELISA、乳鼠保護(hù)試驗(yàn)等方法替代本動物攻毒試驗(yàn)對疫苗進(jìn)行效力評估。而且研究表明，攻毒保護(hù)率與微量血清中和試驗(yàn)、液相阻斷ELISA和乳鼠保護(hù)試驗(yàn)所測定的抗體水平具有較高的相關(guān)性。所以，不同疫苗評估方法將造成出廠疫苗質(zhì)量的不一，從而引起免疫效果的不同。

1.9 抗原含量

在進(jìn)行豬口蹄疫免疫時(shí)，疫苗選擇很關(guān)鍵，普通苗好還是濃縮苗好，從文獻(xiàn)資料和實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中可以看出，口蹄疫疫苗中的抗原量決定著疫苗的免疫效果，濃縮滅活苗單位體積中的抗原量比普通苗高5～10倍，抗原量越高，免疫反應(yīng)越快，免疫持續(xù)期越長。

2.非疫苗質(zhì)量方面的因素

2.1 免疫程序

合理的免疫程序能最大限度地發(fā)揮疫苗的性能，通過多年的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)證明，除弱毒疫苗只需一次免疫外，現(xiàn)在的滅活疫苗一次免疫效果始終不理想。一般情況下一次免疫后，血清抗體效價(jià)較低且持續(xù)時(shí)間短，不足以抵抗口蹄疫病毒的攻擊；二次免疫后，抗體水平大大提高，免疫持續(xù)期也較長，免疫保護(hù)期可達(dá)6個(gè)月以上。從免疫學(xué)角度看，動物機(jī)體首次接觸外來抗原后，產(chǎn)生的抗體以IgM為主，IgM抗體有5個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，可以在短期內(nèi)中和大量抗原，但是它與抗原的結(jié)合力較弱，在體內(nèi)維持的時(shí)間不長，且不穩(wěn)定；二次接觸相同抗原后，記憶細(xì)胞迅速激活，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的IgG抗體。摸清疫苗在動物體的抗體動態(tài)變化規(guī)律、疫苗在免疫抗體水平高低和持續(xù)期長短上的差異以及掌握動物機(jī)體健康狀態(tài)，根據(jù)不同動物、不同年齡、不同豬場、不同疫苗來確定最適免疫程序。

2.2 母源抗體

豬、牛、羊出生后都能從注射過口蹄疫疫苗的母體獲得不同程度的母源抗體水平，但如果沒有及時(shí)進(jìn)行疫苗免疫，一段時(shí)間(如：新生仔豬30日齡左右，新生犢牛80日齡左右，新生羔羊30日齡左右)之后抗體水平就無法抵抗強(qiáng)毒的攻擊。如果參考斷乳日期并綜合分析后確定首免時(shí)間，應(yīng)會有更好的免疫效果，因?yàn)橐坏嗳?，新生動物母源抗體滴度隨即下降。

2.3年齡差異

不同年齡動物免疫口蹄疫疫苗后抗體消長情況不同，青年動物在免疫后抗體維持時(shí)間較長，而成年動物和幼年動物相對較短。這可能是由于青年動物的體質(zhì)和免疫應(yīng)答比成年動物和幼年動物好。免疫時(shí)應(yīng)根據(jù)具體情況選擇免疫程序，不能為了省事就大小動物一起免疫，因?yàn)檫@樣不僅造成人力、物力和財(cái)力的浪費(fèi)，還會影響免疫效果。

2.4 不同動物

豬、牛、羊由于種類、品種不同，注射疫苗后產(chǎn)生抗體的情況也不同。山羊產(chǎn)生抗體的比例較高，牛次之，豬最差。

2.5 注射劑量

實(shí)際注射劑量的準(zhǔn)確性直接會影響疫苗免疫后的效果，嚴(yán)格按照疫苗使用說明書中的劑量注射，確保注射到動物體內(nèi)的疫苗劑量達(dá)到要求。注射前搖動疫苗瓶，以免吸取疫苗時(shí)疫苗不均勻，注射時(shí)注射器和針頭(或塑料軟管)等會殘留一些疫苗，因此抽吸疫苗時(shí)在準(zhǔn)確劑量的基礎(chǔ)上多吸10%左右，保證實(shí)際注射量。

2.6 多種疫苗同時(shí)注射

生產(chǎn)中，由于需要免疫的疫病種類很多，有時(shí)會將口蹄疫疫苗與其他疫苗同時(shí)分點(diǎn)注射(切不可混合后注射)，以節(jié)省人力和物力。但多種疫苗同時(shí)注射，是否會相互干擾各種疫苗抗體的產(chǎn)生，是否存在著順序競爭、分子間競爭；滅活疫苗與弱毒苗同時(shí)注射，滅活苗是否被抑制。如果以上問題沒有確切的答案，在生產(chǎn)中必須同時(shí)注射多種疫苗時(shí)一定要注意，因?yàn)檫@可能對抗體的產(chǎn)生造成不利影響，容易造成免疫效果不好或免疫失敗。

2.7 接種途徑

在口蹄疫的免疫中，多數(shù)廠家推薦的均為肌肉注射，只有弱毒疫苗采用噴霧免疫。肌肉注射時(shí)不同的動物注射部位不同，牛選擇頸部三角區(qū)的中央，羊選擇頸部中1／3處，豬在耳后三指處。近年來，中獸醫(yī)學(xué)者提出穴位(多為后海穴)注射免疫，并且在實(shí)踐中得到一定的認(rèn)可，他們認(rèn)為穴位注射免疫比肌肉注射更容易激發(fā)動物機(jī)體的免疫系統(tǒng)，起到免疫放大作用，產(chǎn)生更強(qiáng)的免疫保護(hù)力，而且安全性高于肌肉注射。但穴位注射效果的確實(shí)性和可操作性仍需進(jìn)一步研究。

2.8 無菌操作

由于注射器械、針頭消毒不徹底或注射部位消毒不嚴(yán)，接種時(shí)沒有一畜一針(頭)，致使動物接種后出現(xiàn)嚴(yán)重的應(yīng)激反應(yīng)、細(xì)菌感染和疾病傳播，影響免疫效果。

2.9 疫苗保存

完善的疫苗冷鏈體系是有效免疫的重要保證，運(yùn)輸、存放時(shí)溫度達(dá)不到疫苗保存要求而勉強(qiáng)保存或突然停電使保存溫度快速上升，造成疫苗破乳或抗原失活，這些都會影響疫苗免疫效果。

2.10 防疫意識普及

要做好群眾的口蹄疫免疫預(yù)防宣傳工作，由于口蹄疫疫苗容易引起免疫反應(yīng)甚至導(dǎo)致個(gè)別死亡，部分地區(qū)因免疫反應(yīng)死亡牲畜的補(bǔ)償工作不到位，使群眾對防疫工作產(chǎn)生抵觸情緒拒絕免疫，甚至與防疫員達(dá)成某種默契，不打針就登記免疫。因此，要加大(中華人民共和國動物防疫法)的宜傳力度，讓廣大養(yǎng)殖戶充分認(rèn)識口蹄疫防制的重要性和必要性，不能因?yàn)楣ぷ髦械囊稽c(diǎn)失誤，影響整個(gè)防疫大局。

2.11 其他

疫苗接種前后7d內(nèi)使用抗病毒藥物及其他藥物或發(fā)生疾病等都可能影響機(jī)體免疫球蛋白的產(chǎn)生。