謝一輝， 余無雙， 周麗姣， 羅金龍

(1.江西中醫(yī)學(xué)院，江西南昌330004;2.阿斯利康(無錫)貿(mào)易有限公司，廣東 珠海519000)

澤瀉為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥塊莖。性味甘、寒，歸腎、膀胱經(jīng)。用于小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈熱淋澀痛，高血脂［1］。澤瀉的炮制方法自古就有，包括酒浸、酒浸后炙、微炒、酒浸后蒸、清蒸、皂角水浸焙干、蒸焙干、米泔水浸后蒸、米泔浸后炒、鹽水伴、鹽水炒焦、酒炒、酒伴、酒伴烘等炮制方法［2］?，F(xiàn)在臨床使用的澤瀉炮制飲片主要有鹽澤瀉、麩炒澤瀉。中國藥典(2005年版)收載品種為鹽澤瀉，樟幫法主要有麩炒澤瀉和麩炒鹽澤瀉。樟幫法與藥典法澤瀉炮制的區(qū)別在于［3］，樟幫法鹽炙后炒或單純麩炒都要用輔料麥麩炮制，使?jié)蔀a飲片外觀色澤均勻、金黃。然而，飲片外觀美觀均勻是否表明飲片的內(nèi)在質(zhì)量更好?本實(shí)驗以澤瀉有效成分和飲片外觀色澤為指標(biāo)，優(yōu)化各炮制工藝。并定量分析飲片外觀色澤差與飲片內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)系，闡明以飲片外觀色度差作為評判飲片質(zhì)量指標(biāo)的可行性。

1 儀器試劑

Agilent1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司);Diamonsil C18(5 μm，250 mm ×4.6 mm)(DIKMA公司);數(shù)碼照相機(jī):DSC－T70(Sony公司);TN408LC型紅外測溫槍(上海儀迷杰光電技術(shù)有限公司);KQ3200型超聲儀;SZ－96A自動三重蒸餾水器(上海亞榮生化儀器有限公司);DE－3350光照儀(臺北得益工業(yè)儀器有限公司);數(shù)據(jù)挖掘軟件Clementine 8.0(SPSS公司);Adobe Photoshop 9.0;澤瀉藥材產(chǎn)于江西廣昌澤瀉種植基地(由我院褚小蘭教授鑒定);對照品24－乙酰澤瀉醇A(含量98.6%)和23－乙酰澤瀉醇B(含量98.9%)(購自上海海燦化工科技有限公司);甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。

2 評判指標(biāo)的選擇

澤瀉功效主要表現(xiàn)在二個方面:利尿和降脂。澤瀉中四環(huán)三萜類成分以及二萜類成分均有利尿作用，其中以23－乙酰澤瀉醇B的作用最強(qiáng)，并有增加尿量的傾向［4］。四環(huán)三萜類成分也是澤瀉降脂的主要有效成分，其中以24－乙酰澤瀉醇A的作用最強(qiáng)［5］。故這2個有效成分為工藝優(yōu)化的內(nèi)在評判指標(biāo)。

傳統(tǒng)的炮制方法往往以飲片厚薄、顏色、氣味為評判飲片優(yōu)劣的指標(biāo)，在中藥飲片的銷售中，常常也以飲片外觀色澤來判斷其質(zhì)量的好壞。可見飲片外觀色澤是評判中藥飲片的一項重要指標(biāo)。在現(xiàn)行的炮制工藝中，質(zhì)量控制參數(shù)如火候的大小、飲片色澤等的評判都是憑操作人員手摸、眼觀的經(jīng)驗，這雖然能夠相對反映飲片的質(zhì)量、工藝特色，但因其具有相當(dāng)大的主觀性，很難控制飲片質(zhì)量一致性，使得飲片質(zhì)量不穩(wěn)定。本實(shí)驗以飲片外觀色度差和色澤均勻性為評判指標(biāo)，通過對飲片色澤信息的提取，定量描述不同炮制條件下的飲片色澤差，為規(guī)范炮制工藝提供定量依據(jù)。同時分析了飲片外觀色澤與飲片內(nèi)在質(zhì)量的關(guān)系，以及飲片外觀色澤與炮制工藝參數(shù)的關(guān)系。

3 正交實(shí)驗設(shè)計

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)對炮制方法的記載和預(yù)實(shí)驗，采用正交L16(45)表，每個實(shí)驗取澤瀉生飲片250 g，用電炒鍋炮制，用測溫槍測定鍋底溫度，確定樟幫法麩炒澤瀉因素水平為:炮制溫度(180、220、260、300℃)，炒制時間(2、4、6、8 min)，麥麩量(10、25、40、55 g)，蜜量(0、0.125、0.25、0.375 g)。樟幫法麩炒鹽澤瀉工藝因素水平為:炮制溫度(180、220、260、300 ℃)，炒制時間(4、6、8、10 min)，悶潤時間(4、8、12、16 h)，麥麩量(10、25、40、55 g)，鹽水量(15 mL水中含食鹽3、4、5、6 g)。藥典鹽澤瀉工藝因素水平為:炮制溫度(180、220、260、300 ℃)，炒制時間(4、6、8、10 min)，悶潤時間(4、8、12、16 h)，鹽水量(15 mL 水中含食鹽3、4、5、6 g)。

4 飲片炮制與評判檢測的測定

每炮制工藝取生澤瀉飲片48份，每份250 g，分成16組，每組3份，按3項正交實(shí)驗設(shè)計工藝條件，平行炮制3份。每炮制工藝分別制得48份澤瀉炮制飲片樣品。

24－乙酰澤瀉醇A和23－乙酰澤瀉醇B含量的測定［6］:色譜柱:納特(Inertsil ODS－3 C18，5 μL，250 mm×4.6 mm)，流動相:乙腈∶水 =78∶22，檢測波長:208 nm，柱溫:25℃，流速:1.0 mL/min，進(jìn)樣量:20 μL。

飲片外觀色度差和飲片色澤均勻性測定［6］:取炮制飲片，隨機(jī)取出5～10片，在CIE規(guī)定的D65標(biāo)準(zhǔn)光源［7］條件下獲取各批飲片外觀的色澤信息(照片文件)。用Adobe Photoshop9.0分別讀入各批飲片外觀的色澤信息數(shù)據(jù)(照片文件)，讀取飲片的色澤指標(biāo)數(shù)據(jù) L、a、b值。用最新色差公式CIEDE2000計算各批飲片的色度差和飲片色澤均勻性。

5 結(jié)果與分析

以不同工藝的因素為自變量，飲片外觀色度差，飲片色澤均勻性，24－乙酰澤瀉醇A含量，23－乙酰澤瀉醇B含量為評判指標(biāo)，用13.0版SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行相關(guān)性和方差分析，結(jié)果見表1～3。

表1 樟幫法麩炒澤瀉正交實(shí)驗檢測指標(biāo)數(shù)據(jù)的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

表2 樟幫法麩炒鹽澤瀉正交實(shí)驗檢測指標(biāo)數(shù)據(jù)的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

表3 藥典法鹽澤瀉正交實(shí)驗檢測指標(biāo)數(shù)據(jù)的方差分析(Multivariate Tests Pillai Traoe值)

由表1～3可以看出各工藝所選因素都具有顯著性差異。用多元方差分析找出各因素各水平的最佳值，即最佳工藝條件。

樟幫法麩炒澤瀉的炮制工藝確定為:將炒鍋加熱至260℃，加入用蜂蜜拌勻的麥麩40 g(已用0.25 g的蜂蜜攪拌均勻)，炒至麥麩冒煙，再加入生澤瀉片250 g，炮制4 min，表面呈亮黃色取出放涼，篩去麥麩即得。

樟幫法麩炒鹽澤瀉的炮制工藝確定為:取生澤瀉飲片250 g，加入定量的鹽水15 mL(內(nèi)含4 g食鹽)，攪拌均勻，密封悶潤16 h，取出。將鍋燒至260℃，撒入麥麩40 g，待麥麩冒煙后加入悶潤好的鹽澤瀉片，不斷翻炒6 min，表面呈金黃色，取出放涼，篩去麩皮即得。

藥典鹽澤瀉最佳炮制工藝為:取生澤瀉飲片250 g，加入定量的鹽水15 mL(內(nèi)含6 g食鹽)，攪拌均勻，密封悶潤12 h，取出。將鍋燒至300℃，加入悶潤好的生澤瀉飲片，不斷翻炒4 min，取出放涼即得。

用SPSS軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果見表4～6。

表4 樟幫麩炒澤瀉各工藝因素與各評判指標(biāo)的相關(guān)性分析(n=96)

表5 樟幫麩炒鹽澤瀉各工藝因素與各評判指標(biāo)的相關(guān)性分析(n=96)

表6 藥典鹽澤瀉各工藝因素與各評判指標(biāo)的相關(guān)性分析(n=96)

表4～6顯示，各個炮制工藝中，炮制溫度和炮制時間都是主要影響因素，而麥麩量、蜜量或鹽水量影響程度小。結(jié)合各因素與指標(biāo)的相關(guān)圖分析，可得到以下結(jié)果:

23－乙酰澤瀉醇B的含量與炮制溫度和炮制時間一般都為非常顯著性負(fù)相關(guān)。而炮制溫度和炮制時間與24－乙酰澤瀉醇A的含量有時為正相關(guān)，有的為負(fù)相關(guān)或不相關(guān)。澤瀉在炮制過程中成分會發(fā)生變化。23－乙酰澤瀉醇B的含量減少，24－乙酰澤瀉醇A的含量增加。這主要受炮制溫度和時間二個因素影響。由炮制溫度或炮制時間對24－乙酰澤瀉醇A或23－乙酰澤瀉醇B相關(guān)圖譜可知，炮制溫度和炮制時間總體上是使23－乙酰澤瀉醇B含量降低，但是，炮制溫度在各工藝最佳炮制溫度之內(nèi)，23－乙酰澤瀉醇B含量下降不多，炮制時間4至6 min之間，23－乙酰澤瀉醇B含量變化不大。但超過最佳炮制溫度或最佳炮制時間，23－乙酰澤瀉醇B的含量迅速下降。24－乙酰澤瀉醇A的含量隨炮制溫度升高而升高，但溫度超過最佳炮制溫度后，含量開始下降。炮制時間在6 min之內(nèi)，含量影響不大，但炮制時間過長，24－乙酰澤瀉醇A的含量迅速下降。

飲片色度差與澤瀉中有效成分顯著性負(fù)相關(guān)，飲片色度均勻性與澤瀉中有效成分顯著性正相關(guān)，說明飲片外觀色澤越接近最佳顏色、飲片外觀色澤越均勻，其有效成分的含量越高。可見，炮制過程通過控制飲片色澤來控制炮制時間有一定的科學(xué)道理。

各工藝中24－乙酰澤瀉醇A的含量與23－乙酰澤瀉醇B的含量都非常顯著性正相關(guān)，揭示炮制過程中23－乙酰澤瀉醇B的含量雖然在不斷下降，但只要控制好炮制溫度和炮制時間，是可以使有效成分均達(dá)到最大。

按各工藝最佳條件平行炮制10批，統(tǒng)計結(jié)果見表7。

表7 3種不同工藝飲片各測定值的基本統(tǒng)計數(shù)據(jù)(n=10)

數(shù)據(jù)顯示，各工藝飲片有效成分含量、水分和浸出物的平均值差異較小，經(jīng)T檢驗3者之間沒有顯著性差異，但它們之間有效成分含量的標(biāo)準(zhǔn)差和含量分布范圍有顯著差異。其順序為:藥典鹽澤瀉＞樟幫法鹽澤瀉＞樟幫法麩炒澤瀉，說明工藝的穩(wěn)定性存在差異，3者比較麩炒澤瀉最優(yōu)?；曳?、飲片色度差和飲片色澤均勻性的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差都存在顯著差異，麩炒澤瀉明顯優(yōu)于麩炒鹽澤瀉和鹽制澤瀉。表明澤瀉炮制工藝中加麥麩，可使各批次飲片的質(zhì)量差異性減小，質(zhì)量相對穩(wěn)定可控。這可能是由于藥典法鹽澤瀉由于沒有加入輔料，飲片局部受熱不均，使飲片有效成分的變化產(chǎn)生比較大的浮動。而樟幫法均加麥麩，飲片受熱均勻，有效成分不易被破壞，含量略高，同時麥麩的煙霧有利于使飲片迅速變成金黃色。

［1］中國藥典［S］.一部.2005.

［2］葉定江，張世臣主編.中藥炮制學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社.1999:336.

［3］龔千峰主編.樟樹中藥炮制全書［M］.江西科學(xué)技術(shù)出版社.1990:10.

［4］楊新波，黃正明，曹文斌，等.澤瀉提取物對正常及四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的影響［J］.中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志，2002，8(3):24－26.

［5］友廣教道(日).澤瀉的研究［J］.國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊，1997，19(5):58－59.

［6］謝一輝，余無雙，羅金龍，等.澤瀉飲片外觀色澤信息研究［J］.中草藥，2010，41(4):555－559.

［7］湯順青主編.色度學(xué)［M］.北京:北京理工大學(xué)出版社，1990.