容 蓉 邱麗麗 張玉朋 鞏麗麗

(山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南 250355)

高良姜(AlpiniaofficinarumHance)系姜科植物，其干燥根莖，又稱良姜，歷年版的《中國藥典》均有收載。高良姜主要產(chǎn)于廣東、廣西、云南、海南等省，廣東徐聞縣是我國高良姜道地性最強和最集中的產(chǎn)區(qū)。高良姜具溫胃散寒、消食止痛之功效，主治脘腹冷痛、胃寒嘔吐、噯氣吞酸等癥[1]。藥理研究發(fā)現(xiàn)，高良姜具有一定的抗氧化、降血糖、抗癌和促進(jìn)滲透性等作用，對消化系統(tǒng)疾病也有一定的功效[2]。桂蜀華等發(fā)現(xiàn)高良姜揮發(fā)油還具有體外抗真菌活性的作用[3]。

理論上講，決定中藥寒熱藥性的主要依據(jù)是藥效，決定藥效的是中藥所含物質(zhì)成分。寒性、熱性中藥所以能調(diào)理熱證、寒證，應(yīng)具有相應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)[4]。為認(rèn)識確定高良姜藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)，筆者對高良姜揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析測定，分別采用水蒸氣蒸餾法和頂空直接進(jìn)樣技術(shù)對高良姜揮發(fā)性成分進(jìn)行了采集和GC-MS分析，并對分析結(jié)果進(jìn)行了比較。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：氣相色譜儀為GC 6890型，質(zhì)譜儀為MS 5975型，配有7683B自動進(jìn)樣器，7694E頂空進(jìn)樣器，色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(MSD Chemstatation D.03.00.611)，美國安捷倫公司；

高良姜：產(chǎn)自廣東省徐聞縣；

實驗所用試劑均為分析純。

1.2 揮發(fā)性成分的提取

(1)水蒸氣蒸餾法

精密稱取高良姜粉末50 g，過380 μm(40目)篩，加蒸餾水500 mL和玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，按《中華人民共和國藥典》2005年版(一部)附錄XD揮發(fā)油測定法(甲法)連接裝置[1]。自冷凝管上端加水至充滿揮發(fā)油測定器的刻度部分，精密加入3 mL乙酸乙酯于揮發(fā)油測定器刻度上方，置電熱套中加熱提取6 h，至測定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，取出乙酸乙酯層。用乙酸乙酯溶解樣品并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，定容至刻度，用1 g無水Na2SO4干燥，取上清液作為揮發(fā)油供試液，用于GC-MS分析，進(jìn)樣量0.2 μL。

(2)頂空直接進(jìn)樣

精密稱取高良姜粉末0.5 g，過380 μm(40目)篩，然后置于10 mL頂空瓶中密封，置于頂空進(jìn)樣器中。頂空進(jìn)樣條件：樣品瓶加熱溫度為100℃，樣品環(huán)溫度為120℃，傳輸線溫度為140℃，樣品瓶加熱時間40 min，樣品環(huán)平衡時間0.05 min，進(jìn)樣時間1 min。

1.3 GC-MS分析條件

(1)色譜條件 色譜柱：Agilent HP-5 MS (30 m×250 μm，0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度：250℃；載氣：氦氣；柱流量：1.2 mL/min；揮發(fā)油程序升溫條件：初始溫度50℃，以2℃/min升至220℃，再以8℃/min升至280℃，保持5 min；頂空直接進(jìn)樣程序升溫條件：初始溫度50℃，以2℃/min升至110℃，再以1℃/min升至150℃，最后以8℃/min升到300℃，保持5 min。

(2)質(zhì)譜條件 標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜調(diào)諧；離子源溫度：230℃；全掃描數(shù)據(jù)采集模式；溶劑延遲時間：揮發(fā)油分析為2 min，頂空進(jìn)樣為0.1 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 實驗結(jié)果

按1.3實驗條件，采用GC-MS法對高良姜水蒸氣蒸餾提取的揮發(fā)油和頂空直接進(jìn)樣的揮發(fā)性成分分別分析，以峰面積歸一化法計算揮發(fā)油各組分相對含量。

采用化學(xué)工作站對各峰質(zhì)譜圖進(jìn)行NIST標(biāo)準(zhǔn)譜庫的檢索，并參照相關(guān)文獻(xiàn)[5]進(jìn)行確認(rèn)和人工譜圖解析,查對有關(guān)質(zhì)譜資料,從基峰相對豐度等幾個方面進(jìn)行直觀比較,從而確定高良姜揮發(fā)性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu),結(jié)果見表1。

表1 高良姜揮發(fā)性化學(xué)成分GC-MS分析結(jié)果

2.2 討論

對高良姜揮發(fā)性成分的GC-MS分析結(jié)果表明：采用水蒸氣蒸餾提取(簡稱SD法)的揮發(fā)油分離鑒定出31種化合物，其峰面積之和占總峰面積的69.7%；采用頂空直接進(jìn)樣(簡稱HS法)分析鑒定出31種化合物，占總峰面積的85.5%。兩種提取方法鑒定出16種共有化合物，其中含量較高的有兩種：桉油精(SD法和HS法中含量分別為26.76%和27.53%)以及α，α，4-甲基-3環(huán)己烯-1-甲醇(SD法和HS法中含量分別為6.88%和8.90%)。

SD法和HS法在中藥揮發(fā)性成分分析上有一定的側(cè)重。在高良姜揮發(fā)性成分分析中，有4種成分以SD法更利于檢出：石竹烯(3.19%)，2,6-二甲基-6-(4-甲基-3-戊烯基)-雙環(huán)[3.1.1]庚-2-烯(3.94%)，(s)-6-乙烯基-6-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-(1-甲基亞乙基)-環(huán)己烯(3.06%)和(1s-順-1,2,3,5,6,8a-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲基乙基-環(huán)己烯萘(2.85%)；HS法對以上成分檢出含量很低，甚至無法檢出。而HS法對2種成分檢測到的含量較高：2-異丙烯基-4a,8-二甲基-1，2,3,4,4a,5,6,7-八氫萘(14.10%)和(-)-1,7二甲基-7-(4-甲基-3-戊烯基-三環(huán)[2.2.1.0(2,6)]庚烷(4.99%)，而SD法對二者的檢出量很低。說明HS法在全面檢測中藥揮發(fā)性成分方面可以起到非常好的補充作用。

3 結(jié)語

實驗首次采用HS法分析高良姜揮發(fā)性成分，在藥材用量、樣品制備、分析時間等方面，具有更加簡單、快速、靈敏和無有機溶劑殘留等優(yōu)點。

與SD法提取揮發(fā)油相比，HS法分析檢出的主要揮發(fā)性成分相同，但兩種方法在部分成分分析方面具有一定的側(cè)重性。故筆者建議，研究中藥寒熱藥性的物質(zhì)基礎(chǔ)，若以GC-MS指紋圖譜表征其揮發(fā)性成分，應(yīng)以兩種樣品采集方法并用的模式為宜。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2005年版一部[S]．北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:263，附錄(56).

[2] 黃慧珍,楊丹.高良姜的化學(xué)成分及其藥理活性研究進(jìn)展[J].廣東化工，2009，36(1):77-79.

[3] 桂蜀華,蔣東旭,袁捷.花椒、高良姜揮發(fā)油體外抗真菌活性研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2005,12(8):21-22.

[4] 歐陽兵,王鵬,王振國.關(guān)于中藥寒熱藥性物質(zhì)基礎(chǔ)研究幾個問題的討論[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報,2009,33(5):357-358.

[5] 努爾阿尼也·熱合曼,熱娜·卡斯木,早然木·尼亞孜,等.高良姜揮發(fā)油成分氣相色譜質(zhì)譜分析[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,31(4):441-442.