孟慶春，李 巖，馬 威，徐 飛

(1.鞍山市第四醫(yī)院 胸外科，遼寧 鞍山 114034； 2.大連醫(yī)科大學(xué) 人體解剖學(xué)教研室，遼寧 大連 116044)

食管癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一，死亡率居常見腫瘤死因的第六位，80%～85%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家，以鱗狀上皮癌為主。西方國家自20世紀(jì)70年代中期以來食管癌腺癌的發(fā)病率顯著增長，成為增長速度最快的惡性腫瘤之一。中國是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家。食管癌的發(fā)病因素與機(jī)制尚不明確，癌變過程涉及多種癌基因的激活與抑癌基因的失活，其中介導(dǎo)同質(zhì)細(xì)胞間黏附的鈣依賴性跨膜糖蛋白上皮鈣黏素基因E-cadherin 的作用值得關(guān)注。本研究采取組織微陣列技術(shù)和免疫組織化學(xué)ABC方法檢測E-cadherin在不同病變食管癌組織中的表達(dá)情況，并分析其與各病理特征之間的關(guān)系，探求E-cadherin表達(dá)與食管癌發(fā)生的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對象

83例食管癌組織均選自鞍山市腫瘤醫(yī)院1999～2008年未經(jīng)放化療的診斷明確的食管癌手術(shù)切除標(biāo)本，術(shù)中同時切取38例癌前與9癌旁非癌組織?；颊咧心行?0例，女性13例，年齡31～78歲，平均年齡(59.8±10.8)歲。鱗癌68例，腺癌15例，高分化27例，中分化40例，低分化16例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例。

1.2 研究方法

根據(jù)腫瘤石蠟標(biāo)本HE染色觀察結(jié)果標(biāo)記取樣組織定位，運(yùn)用組織芯片技術(shù)(由大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省癌癥基因組學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，專利號：02109826.3)，制成的組織微陣列。按照SP試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色，抗體為鼠抗人E-cadherin單克隆抗體(Santa Cruz，Msc-8426，1∶100)DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。以已知陽性組織為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定

E-cadherin免疫組織化學(xué)結(jié)果判定由2位研究人員分別完成而后匯總。染色陽性反應(yīng)為呈現(xiàn)棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞漿中及細(xì)胞膜表面，其膜E-cadherin為功能性鈣黏素，故本實(shí)驗(yàn)主要觀察膜E-cadherin。判定的標(biāo)準(zhǔn)是：細(xì)胞膜上無著色的為陰性(-)；與未加一抗的陰性對照比較，著色略深的為弱陽性(+)，較深的為陽性(++)，明顯加深的則為強(qiáng)陽性(+++)，本研究中，膜E-cadherin(-)與(+)視為下調(diào)表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件，應(yīng)用Kruskal-Wallis 和Mamm Whitney的檢驗(yàn)方法進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié) 果

2.1 膜E-cadherin的表達(dá)情況

膜E-cadherin的表達(dá)(見表1、圖1)在癌旁相對正常組織、癌前病變和食管癌組織中，呈現(xiàn)下調(diào)趨勢，下調(diào)率分別為44.4%、84.2%和94.0%，食管癌組同癌旁正常組和癌前病變組相比較，分別為P=0.000和P=0.006，兩者差異有顯著性意義；在食管癌不同組織病理分型之間，鱗癌較腺癌下調(diào)更為明顯，兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)；癌旁正常組和癌前病變組相比差異有顯著性意義(P=0.002)。

表1 不同病變食管癌組織中膜E-cadherin的表達(dá)情況

1)與癌旁正常組相比P<0.05；2)與癌前病變組相比P<0.05；3)與腺癌相比P<0.05

2.2 膜E-cadherin的表達(dá)與食管癌患者各病理指標(biāo)的關(guān)系

膜E-cadherin表達(dá)未見明顯性別差異 (P=0.125)和年齡差異(P=0.196)；在不同食管癌高、中、低分化的比較中，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.352)；但在不同大、中、小病變中E-cadherin表達(dá)的下調(diào)率分別為75.0%、96.5%和100%，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.011)；食管癌膜E-cadherin下調(diào)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 (P=0.015)；在T3、4組中明顯高于T1、2組(P=0.013)；在Ⅲ-Ⅳ期明顯高于Ⅰ-Ⅱ期(P=0.027)，見表2。

食管鱗癌癌前病變(A )；鱗癌(B)；食管腺癌癌前病變(C)；賁門腺癌(D)圖1 E-cadherin在不同病變食管癌組織中免疫組織化學(xué)染色×200

n膜E-cadherin下調(diào)例數(shù)(%)不變例數(shù)(%)P性別0.125 男7067(95.7)3(4.3) 女1311(84.6)2(15.4)年齡0.196 <604039(97.5)1(2.5) ≥604339(90.7)4(9.3)分化程度0.352 高分化2724(88.9)3(11.1) 中分化4039(97.5)1(2.5) 低分化1615(93.7)1(6.3)病變大小0.011 <4cm129(75.0)3(25.0) 4～8cm5755(96.5)2(3.5) ≥81414(100)0(0)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.015 無3934(87.2)5(12.8) 有4444(100)0(0)浸潤深度0.013 未及漿膜(T1、2)2521(84.0)4(16.0) 侵及漿膜(T3、4)5857(98.3)1(1.7)臨床分期0.027 I-II4338(88.4)5(11.6) III-IV4040(100)0(0)

3 討 論

人的E-cadherin基因CDH1定位于16q22.1，編碼分子量為120 kD的單鏈跨膜糖蛋白，主要位于上皮細(xì)胞膜，是促進(jìn)上皮細(xì)胞間相互黏附和維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的重要蛋白[1,2]，在功能上其作為腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的抑制因子已在許多研究中得到了證實(shí)[3,4]。目前公認(rèn)，細(xì)胞黏附功能的喪失是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的前提條件之一，故E-cadherin被廣泛認(rèn)為是腫瘤進(jìn)展的關(guān)鍵蛋白。當(dāng)E-cadherin表達(dá)降低，尤其是功能性的膜表面的E-cadherin表達(dá)下調(diào)或功能障礙時，細(xì)胞間的黏附能力就會下降，腫瘤細(xì)胞就會彼此松動、分離，進(jìn)而自原發(fā)灶脫落，逐步浸潤深層、并向局部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[5]。因此，E-cadherin表達(dá)下降與腫瘤的侵襲和進(jìn)展密切相關(guān)。

本研究結(jié)果與以往的文獻(xiàn)報道相一致，即在大多數(shù)食管癌，特別是浸潤癌中呈現(xiàn)膜型E-cadherin表達(dá)減少甚至消失。因此，E-cadherin蛋白表達(dá)作為食管癌發(fā)生、發(fā)展、演進(jìn)過程中重要的分子事件，其表達(dá)在癌旁相對正常食管黏膜組織、癌前病變、食管癌組織中呈現(xiàn)逐漸下調(diào)的特點(diǎn)證實(shí)膜上E-cadherin的含量有可能是細(xì)胞去分化程度和腫瘤轉(zhuǎn)移潛能的重要生物學(xué)標(biāo)志，即它減少的程度反映出細(xì)胞去分化的嚴(yán)重性和腫瘤細(xì)胞播散的可能性。

本文結(jié)果中E-cadherin基因表達(dá)未見年齡與性別的差異，但與分化程度和病變大小有關(guān)，分化越低、病變越大則E-cadherin下調(diào)表達(dá)越顯著。而E-cadherin下調(diào)率在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組；在T3、4組中明顯高于T1、2 組；在Ⅰ-Ⅱ期食管癌中明顯高于Ⅰ-Ⅱ期的結(jié)果亦證實(shí)該基因的表達(dá)與食管癌進(jìn)展相關(guān)，可以作為判斷食管癌病變程度以及預(yù)測腫瘤浸潤趨勢的潛在的分子指標(biāo)，具有重要的腫瘤診斷學(xué)意義。

E-cadherin在蛋白水平的下調(diào)與基因突變、轉(zhuǎn)錄抑制以及表觀遺傳學(xué)啟動子區(qū)高甲基化相關(guān)[6-8]。甲基化水平改變可能與飲食特點(diǎn)關(guān)系密切。本研究中，食管癌患者E-cadherin下調(diào)十分明顯，高達(dá)90%以上，這是否與火鍋、燒烤、腌制食品過度攝入所導(dǎo)致的基因啟動子區(qū)高甲基化有關(guān)，值得進(jìn)一步驗(yàn)證、核實(shí)。

[1] Van Roy F,Berx G.The cell-cell adhesion molecule E-cadherin[J].Cell Mol Life Sci,2008,65(23):3756-3788.

[2] Lee HS,Lee HK,Kim HS,et al.Tumour suppressor gene expression correlates with gastric cancer prognosis[J].J Pathol,2003,200(1):39-46.

[3] Horwhat JD,h Baroni D,Maydonovitch C,et al.Normalization of intestinal metaplasia in the esophagus and esophagogastric junction: incidence and clinical data[J].Am J Gastroenterol,2007,102(3): 497-506.

[4] Giudicelli R,Thomas P,Lonjon T,et al.Major pulmonary resection by video-assisted minithoracotomy.Initial experience in 35 patients[J].Eur J Cardiothoracic Surg,1994,8 (1):254.

[5] Cheng XX,Wang ZC,Chen XY,et al.Frequent loss of membranous E-cadherin in gastric cancers: A cross-talk with Wnt in determining the fate of beta-catenin[J].Clin Exp Metastasis,2005,22(1):85-93.

[6] Becker I,Becker KF,Kremmer E,et al.Novel mutation-specific monoclonal E-cadherin antibodies make possible allele differentiation at the protein level in tumors[J].Verh Dtsch Ges Pathol,1999,83:233-239.

[7] Guilford P,Hopkins J,Harraway J,et al.E-cadherin germline mutations in familial gastric cancer[J].Nature,1998,392(6674):402-405.

[8] Wang G,Hu X,Lu C,et al.Promoter-hypermethylation associated defective expression of E-cadherin in primary non-small cell lung cancer[J].Lung Cancer,2008,62(2):162-172.