孟慶春,范治偉,李 巖,馬 威,裴梓峰,徐 飛

(1.鞍山市第四醫(yī)院 胸外科,遼寧 鞍山 114034；2.大連大學(xué) 附屬中山醫(yī)院,遼寧 大連 116001；3.大連醫(yī)科大學(xué) 解剖學(xué)教研室,遼寧 大連 116044)

食管癌是世界上最常見的六大惡性腫瘤之一。中國是世界上食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家,全世界每年新增加的30萬食管癌患者中,約有一半發(fā)生在中國,因而食管癌是中國重點(diǎn)防治的惡性腫瘤之一。食管上皮癌變具有多階段、進(jìn)行性演進(jìn)的特點(diǎn),即經(jīng)歷了由正常黏膜→癌前病變(基底細(xì)胞過度增生,間變和原位癌)→食管癌(早期癌與浸潤癌)的演變過程。食管癌在癌變多階段演進(jìn)中,發(fā)生了諸多分子層面的改變,揭示這些腫瘤相關(guān)基因的改變及其臨床病理學(xué)意義。轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白S100A4是鈣結(jié)合蛋白家族S100蛋白亞家族的成員之一,其與細(xì)胞的增殖與凋亡、細(xì)胞運(yùn)動與粘附、細(xì)胞外基質(zhì)重建、以及血管生成等腫瘤生物學(xué)行為密切相關(guān)[1]。本研究采取組織微陣列技術(shù)和免疫組織化學(xué)ABC方法檢測S100A4在不同病變食管癌組織中的表達(dá)情況,并分析其與各病理特征之間的關(guān)系,探求S100A4表達(dá)與食管癌發(fā)生的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對象

食管癌的癌旁、癌前與癌組織均選自鞍山市腫瘤醫(yī)院1999～2008年未經(jīng)化放療的診斷明確的食管癌手術(shù)切除標(biāo)本?；颊咂骄挲g(59.8±10.83)歲。鱗癌68例,腺癌15例,高分化27例,中分化40例,低分化16例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例。

1.2 研究方法

運(yùn)用石蠟組織芯片技術(shù)制成組織微陣列(由大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省癌癥基因組學(xué)重點(diǎn)實驗室提供,專利號:02109826.3)。按照SP試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化染色,抗體為兔抗人S100A4多克隆抗體(Lab Vision & Neomarkers,Fremont,CA,1∶100),DAB顯色,蘇木精復(fù)染,中性樹膠封片。陽性對照選擇扁桃體組織,陰性對照為PBS代替一抗。

1.3 結(jié)果判定

S100A4免疫組織化學(xué)染色陽性反應(yīng)呈現(xiàn)棕黃色顆粒,定位于細(xì)胞漿中。結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是: 首先在低倍鏡下(10×10)選擇有代表性的區(qū)域,然后在高倍鏡下(10×40)記錄結(jié)果,陽性細(xì)胞<10%為陰性(-),按陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞百分比分成3個等級,10%～25%記為(+),26%～70%記為(++),>70%記為強(qiáng)陽性(+++)[2]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

實驗數(shù)據(jù)采用SPSS 11.0軟件包,應(yīng)用Kruskal-Wallis 和Mamm Whitney的檢驗方法進(jìn)行χ2檢驗,P<0.05為差異有顯著性意義。

2 結(jié) 果

2.1 S100A在不同病變食管癌中的表達(dá)特點(diǎn)

S100A4在癌旁相對正常組織、癌前病變和食管癌組織中的表達(dá)逐漸升高(表1,圖1),表達(dá)率分別為22.2%、26.3%和59.0%,食管癌組同癌旁正常組和癌前病變組相比較,分別為P=0.032和P=0.001,差異具有顯著性意義；在食管癌不同組織病理分型之間,腺癌較鱗癌表達(dá)率更高，差異具有顯著性意義(P=0.015)。

2.2 S100A4的表達(dá)與食管癌患者各病理指標(biāo)的關(guān)系

S100A4表達(dá)的陽性率在男性為54.3%,女性為84.6%,二者差異有顯著性意義 (P<0.05)。但該蛋白的表達(dá)在年齡、分化程度和病變大小的比較中差異無顯著性意義(P>0.05)。本研究所觀察的83例食管癌中,39例未見淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(LN-),S100A4蛋白表達(dá)者18例,陽性率為46.2%；44例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(LN+)的樣本中,31例S100A4表達(dá)陽性(70.5%),淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組S100A4表達(dá)率與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比較差異具有顯著性意義(P<0.05)。S100A4的表達(dá)上調(diào)在T3,4 (65.5%)中明顯高于T1,2 (44.0%),但兩者差異無顯著性意義 (P>0.05)。S100A4表達(dá)的陽性率在Ⅲ～Ⅳ期(70%)食管癌中明顯高于Ⅰ～Ⅱ期(48.8%),兩者差異無顯著性意義(P>0.05)，見表2。

3 討 論

食管癌的發(fā)生多見于發(fā)展中國家的貧困地區(qū)。食管鱗癌發(fā)病率高的地區(qū)表現(xiàn)為社會經(jīng)濟(jì)狀況低下、自然條件艱苦,人民的營養(yǎng)狀況不良、膳食結(jié)構(gòu)單一、醫(yī)療衛(wèi)生條件較差。食管癌發(fā)生形成明顯的高低發(fā)區(qū),長期以來,中國一直是食管癌高發(fā)的國家之一,如河南林縣、磁縣、鹽亭縣等地。吸煙、飲酒、燙食、腌制食品等生活方式均與食管癌的發(fā)生有一定的相關(guān)關(guān)系。食管癌預(yù)后極差,術(shù)后5年生存率僅為10%～15%左右[3,4]。近年來,食管癌的發(fā)生呈現(xiàn)明顯升高的趨勢,但其發(fā)病機(jī)制仍不明確,本研究旨在從分子水平揭示食管癌發(fā)生發(fā)展、侵襲的機(jī)制,為臨床篩選分子診斷與基因治療的指標(biāo)提供分子病理學(xué)基礎(chǔ)。

表1 不同病變食管癌組織中S100A4的表達(dá)Tab 1 S100A4 expression in different pathological changes of esophageal carcinoma (n)

1)與食管癌組相比P<0.05; 2)與腺癌組相比P<0.05

表2 S100A4的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Tab 2 The relationship between S100A4 expression and clinical pathological characteristics

1)P<0.05

轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白S100A4與多種惡性腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān),該基因異常高表達(dá)與癌癥的發(fā)生與進(jìn)展有關(guān),并導(dǎo)致患者預(yù)后不良。有文獻(xiàn)報道,S100A4促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的機(jī)制可能包括調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖與凋亡抑制、增強(qiáng)細(xì)胞的運(yùn)動與減少粘附、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)重建、以及加速血管生成等?，F(xiàn)有大量研究結(jié)果均證實,S100A4在多種腫瘤乃至炎癥纖維性疾病[5]如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌炎、肺動脈高壓中呈現(xiàn)異常高表達(dá),且與患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。本研究以高通量組織芯片為載體,探討S100A4在食管癌中表達(dá)特點(diǎn)、分布模式及其與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系,為食管癌早期診斷候選指標(biāo)的篩選提供必要的基礎(chǔ)實驗依據(jù)。

圖1 S100A在不同病變食管癌組織中免疫組織化學(xué)染色 ×200癌旁上皮(A)；癌前病變(B)；高、中、低分化食管鱗癌(C,D,E)；賁門腺癌(F)Fig 1 Immunohistochemistry stain of S100A4 in different pathological changes of esophageal carcinoma ×200Peri-cancerous epithelium (A)；precancerosis (B)；well,moderately,poorly differentiated esophageal squamous carcinoma (C,D,E)；cardiac adenocarcinoma (F)

本研究的結(jié)果顯示,從癌旁的相對正常組織、癌前食管粘膜損傷到食管癌組織,S100A4蛋白的陽性染色率呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢,即隨著食管癌病變從正常到癌的演進(jìn)過程中,S100A4的表達(dá)顯著增加。這提示S100A4在食管癌演進(jìn)過程中,扮演著重要的角色。S100A4的表達(dá)與腫瘤病理分期之間存在一定的正相關(guān)關(guān)系,這與前人的結(jié)果一致,即S100A4與腫瘤細(xì)胞的侵襲能力正相關(guān)。本研究中食管鱗癌S100A4的表達(dá)率較以往文獻(xiàn)胃癌、胰腺癌、乳腺癌報道略低[6],而該蛋白在食管腺癌中的表達(dá)顯著高于鱗癌。S100A4作為比較公認(rèn)的腫瘤轉(zhuǎn)移的標(biāo)志因子,其高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的高侵襲、高轉(zhuǎn)移與不良的預(yù)后密切相關(guān)[7,8]。本研究的結(jié)果從另一側(cè)面也揭示了腺癌在食管癌中的惡性度更高的分子基礎(chǔ)。

[2] Li Y,Zhang KL,Sun Y，et al.Frequent S100A4 Expression with Unique Splicing Pattern in Gastric Cancers: A Hypomethylation Event Paralleled with E-cadherin Reduction and Wnt Activation[J].Transl Oncol,2008,4: 165-176.

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