金領(lǐng)微，陳輝樂，王紅，武敏，劉俊，張瑩，徐佳，何曉靜，楊瞞球

(1.溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院 血液凈化中心，浙江 溫州 325088；2.南方醫(yī)院 腎內(nèi)科，廣東廣州 510515)

晚期氧化蛋白產(chǎn)物(advanced oxidation proteinproducts，AOPP)屬于大分子尿毒癥毒素，是加速維持性血液透析（maintenance hemodialysis，MHD）患者動脈粥樣硬化的原因之一[1]。本研究旨在觀察不同血液凈化方式對AOPP的影響，為臨床預(yù)防MHD患者心血管并發(fā)癥提供新思路?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取我院透析中心患者120例，其中慢性腎小球腎炎54例，糖尿病腎病19例，高血壓腎小球疾病33例，梗阻性腎病8例，多囊腎6例；120例患者中，男73例，女47例；年齡29～76歲，平均(51.851±13.034)歲；透析齡9～139個(gè)月，平均（47.158±41.321）個(gè)月；Kt·V-1值為1.445±0.363；所有患者均無急慢性感染、急性心臟、肝臟、胃腸道及腦血管等嚴(yán)重并發(fā)癥，分為聯(lián)合組血液透析加血液灌流（HD+HP）60例及第7天(168 h)HD治療和血液透析濾過(HDF)組60例。尿毒癥未行血液透析患者（NHD）60例，男33例，女27例；年齡30～77歲，平均(52.861±14.434)歲，其中慢性腎小球腎炎25例，糖尿病腎病9例，高血壓腎小球疾病21例，梗阻性腎病3例，多囊腎2例。健康對照組(CG)20例，男13，女7例，年齡30～68歲，平均(49.342±11.544)歲。各組患者年齡、原發(fā)病、血清白蛋白、透析齡、降壓藥物種類和劑量及Kt·V-1比較差異均無顯著性，具有可比性。

1.2 材料 采用HA130型樹脂血液灌流器(麗珠醫(yī)用材料廠生產(chǎn))；金寶PolyamixTM膜（聚芳醚砜膜）透析器，面積1.4 m2；金寶PolyamixTM膜（聚芳醚砜膜）透析濾過器，面積1.4 m2，后稀釋法；瑞典金寶透析機(jī)，碳酸氫鹽透析液，透析液鈉離子、鉀離子、氯離子的濃度分別為140、2.0、110 mmol·L-1。

1.3 方法 聯(lián)合組采用HP+HD治療，灌流器串聯(lián)在透析器之前，肝素首量為0.7 mg·kg-1，并根據(jù)患者具體情況追加8～10 mg·h-1，上機(jī)后血流量為200 mL·min-1，透析液流量為500 mL·min-1，先灌流加透析2 h后，取下灌流器，再繼續(xù)透析2 h，共4 h。常規(guī)HD組，每周3次；HDF組每周3次全部行HDF治療；HD及HDF肝素首量為0.3～0.5 mg·kg-1，追加6～8 mg·h-1，血流量均為200 mL·min-1。

MHD患者于治療前0、2、168 h分別從動脈端取血4 mL，其中2 mL低溫離心血清，置-70 ℃貯存?zhèn)錂z；另外2 mL檢測白蛋白水平，用于校正因超濾脫水對治療后被測值的影響。

1.4 血清指標(biāo)檢測 AOPP的檢測按文獻(xiàn)[1]的方法加以改進(jìn)，取血清50μL，PBS稀釋至500μL，以PBS 500μL作空白對照，以氯胺2T溶液為標(biāo)準(zhǔn)曲線；4 ℃，12000 r·min-1離心30 min；抽取離心管底層液體100μL，加10μL冰醋酸混勻；以PBS加冰醋酸作空白管；核酸分析儀(Pharmacia Biotech)測340 nm吸光度(A)值；AOPP的濃度以氯胺2T含量表示(單位μmol·L-1)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 定量資料采用配對t檢驗(yàn)或獨(dú)立t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用單因素方差分析，方差不齊采用近似F檢驗(yàn)Welch法。

2 結(jié)果

2.1 治療前各組血AOPP水平的變化 NHD組、HP+HD組、HD組、HDF組患者治療前血AOPP水平均高于CG差異有顯著性(P<0.01)；HP+HD組、HD組、HDF組患者治療前血AOPP水平均高于NHD組，差異有顯著性(P<0.05)；其CG

2.2 各組治療前后比較 HD組AOPP濃度反而升高差異有顯著性（P<0.05）；HP+HD組和HDF組AOPP濃度降低，差異有顯著性(P<0.01)，見表1。

表1 各組治療前后AOPP濃度的變化情況(μmol·L-1)

2.3 透析及灌流治療后兩組各指標(biāo)降低的差值的變化 透析前HP+HD組和HDF組AOPP濃度無顯著性差異（P＞0.05），兩組治療后AOPP濃度下降分別為（64.581±22.376）μmol·L-1、（75.529±15.766）μmol·L-1，降幅分別為35.06%、38.82%，差異有顯著性（P<0.01）；HD治療2 h后升高(17.394±8.784）μmol·L-1，升幅為11.693%，見表1。

2.4 HP+HD治療前后AOPP濃度與時(shí)間關(guān)系 HP治療后AOPP水平下降，停止HP治療隨時(shí)間延長AOPP水平逐漸升高，差異有顯著性（P<0.01），見表1。

3 討論

AOPP是Witko Sarsat在1996年首先發(fā)現(xiàn)報(bào)道的一種尿毒癥毒素，是近年研究的熱點(diǎn)[2]。我們研究發(fā)現(xiàn)NHD組、HP+HD組、HD組、HDF組患者血清AOPP濃度升高，且透析組患者血清AOPP濃度高于NHD組，隨腎衰進(jìn)展AOPP逐漸升高，與文獻(xiàn)[3]報(bào)道相一致。其原因是慢性腎衰竭早期體內(nèi)即已出現(xiàn)氧化和抗氧化系統(tǒng)失衡，氧化應(yīng)激增強(qiáng)，并與腎衰竭同步進(jìn)展；而在維持性血液透析階段，透析膜的生物不相容性和內(nèi)毒素入血導(dǎo)致補(bǔ)體反復(fù)被激活活化單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，介導(dǎo)炎癥因子釋放使之產(chǎn)生更多的活性氧簇和含氯氧化物如次氯酸人為引發(fā)了更為強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激，攻擊、氧化體內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸殘基，產(chǎn)生具有雙酪氨酸的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致蛋白氧化損傷，各種蛋白質(zhì)氧化的終末產(chǎn)物總稱為AOPP[4-5]。

氧化損害可以發(fā)生于各種蛋白質(zhì)，故AOPP相對分子質(zhì)量高低不等，其分為高相對分子質(zhì)量(HMW 595200 Iu)和低相對分子質(zhì)量(LMW，59520 Iu)兩種，前者主要是氧化的白蛋白，后者主要是受損蛋白的集合體。蛋白質(zhì)一旦被氧化損害即不可逆，其功能將發(fā)生變化。AOPP在體內(nèi)外均可激發(fā)單核細(xì)胞的呼吸爆發(fā)，刺激單核細(xì)胞合成，釋放大量促炎性細(xì)胞因子如IL-1、IL-6、TNF-α等，促發(fā)細(xì)胞炎癥效應(yīng)，并同時(shí)激發(fā)中性粒細(xì)胞的呼吸爆發(fā)，導(dǎo)致更強(qiáng)的氧化應(yīng)激，正反饋增加自身的形成并增強(qiáng)對單核細(xì)胞的效應(yīng)，進(jìn)而造成慢性腎衰竭的全身微炎癥狀態(tài)，是慢性腎衰竭免疫功能紊亂、動脈粥樣硬化性心血管病變、透析相關(guān)性淀粉樣變等長期并發(fā)癥發(fā)生過程中的重要致病環(huán)節(jié)[6-7]。

本研究表明，HD對AOPP無效果，與文獻(xiàn)[8]報(bào)道相一致，而且本資料中透析器膜是聚酰胺高分子合成的，合成膜具有更多的吸附蛋白作用。HDF和HP單次治療只清除一部分毒素，透析間期再次上升。HD不但不能清除AOPP，經(jīng)HD治療后AOPP反而升高，HD患者由于免疫細(xì)胞與透析液中污染的內(nèi)毒素接觸而被活化，活性氧的生成進(jìn)一步增加；同時(shí)透析過程中維生素C等水溶性抗氧化物質(zhì)丟失以及維生素E的活化障礙均可加重氧化應(yīng)激；另外，AOPP的相對分子質(zhì)量較大，HD難以清除。

HA130型血液灌流器采用一種新型的中性合成樹脂，其吸附能力取決于組成的縱橫交錯(cuò)的微孔結(jié)構(gòu)，平均孔徑達(dá)13～15 nm，含130 g樹脂，達(dá)1000～1500m2比表面積，從而決定了其巨大吸附容量，通過物理吸附及疏水基團(tuán)的相互作用而發(fā)揮其吸附作用，對中分子物質(zhì)具有較強(qiáng)的非特異性吸附，其暴露于血液的吸附表面積遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于血液透析器的表面積，所以可有效清除AOPP，本研究能證實(shí)其HD+HP組單次吸附AOPP比HD組有效果，但效果有限，說明HP能吸附一部分高分子物質(zhì)[8]。有文獻(xiàn)報(bào)道AOPP的水平并沒有隨HP次數(shù)的增加而逐漸下降，估計(jì)雖然每次HP使AOPP水平很快下降，但透析間期AOPP水平的增長抵消了其清除效率[9]。

本研究結(jié)果還提示，HDF清除AOPP下降幅度大于HP清除下降幅度，效果更佳，與文獻(xiàn)[9-10]報(bào)道相一致，HDF能清除大分子。HDF采用高分子聚酰胺膜合成透析膜，具有孔徑比HD膜孔徑大，因此有較高的通透性，并在HD的基礎(chǔ)上增加了對流作用，加強(qiáng)了大中分子的清除，濾器較高的超濾率有利于蛋白質(zhì)沉積于透析膜表面，而且合成膜具有更多的吸附蛋白作用。HDF對AOPP的清除不僅僅依賴于膜孔徑的機(jī)械屏障作用，膜的吸附作用可能更為重要，所以對AOPP的清除雖然HDF比HP更有效，但是還不能完全清楚AOPP。

本研究證實(shí)常規(guī)MHD不能清除AOPP，有文獻(xiàn)報(bào)道隨著時(shí)間的推移，AOPP有升高的趨勢[9]。因AOPP能加速動脈粥樣硬化，所以有條件者采取HDF或者HD+HP取代HD治療尿毒癥將有望減少AOPP積蓄，延緩尿毒癥患者心血管并發(fā)癥的發(fā)生。不能進(jìn)行HDF的單位，間斷行血液灌流治療也不失為一種補(bǔ)救措施。但長期HDF和HD+HP治療MHD患者的可行性還有待于進(jìn)一步研究。

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