柯永堅(jiān)，朱紅軍，肖亮生，黃江玲，馬錦霞

(廣東省汕頭市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 汕頭 515031)

流感嗜血桿菌耐藥性分析

柯永堅(jiān)，朱紅軍，肖亮生，黃江玲，馬錦霞

(廣東省汕頭市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 汕頭 515031)

目的了解我院2008年1月至2010年6月臨床分離的136株流感嗜血桿菌耐藥性及產(chǎn)β-內(nèi)酰氨酶率。方法采用常規(guī)方法進(jìn)行分離培養(yǎng)，并采用法國生物梅里埃公司全自動微生物分析系統(tǒng)VITEK-2compact及配套試劑NHI鑒定卡和V+X、V、X因子進(jìn)行鑒定，用K-B法測定其藥敏結(jié)果,按CLSI2009版判斷結(jié)果,以Nitrocefin試劑做β內(nèi)酰胺酶測定。結(jié)果136株流感嗜血桿菌中產(chǎn)β內(nèi)酰胺酶40株,產(chǎn)酶率29.4%；耐藥主要集中在復(fù)方新諾明(57.4%)、氨芐西林(51.5%)、左旋氧氟沙星(27.9%)；對亞胺培南及頭孢二、三代的敏感率達(dá)100%。結(jié)論流感嗜血桿菌有較高的耐藥率及β內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酶率，臨床上應(yīng)注意正確、合理使用抗菌藥物。

流感嗜血桿菌；耐藥性；β-內(nèi)酰胺酶

流感嗜血桿菌為需氧、革蘭陰性球桿菌，是人類呼吸道感染的常見病原菌，可引起獲得性感染。主要引起人類中耳炎、肺炎、咽炎、及其他呼吸道感染等疾病[1]。隨著流感嗜血桿菌分離率的不斷提高和其耐藥性的不斷上升，其致病性已受到普遍關(guān)注。因此，流感嗜血桿菌的耐藥性和產(chǎn)酶率的分析對臨床具有重要的意義。本文對本院的流感嗜血桿菌感染及藥敏情況作了回顧性分析，為臨床合理用藥和治療提供依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 標(biāo)本為來自我院2008年1月至2010年6月的住院患者及少量門診患者，標(biāo)本主要是痰液?；颊卟杉瘶?biāo)本前均未使用過抗生素或使用抗生素者停藥一周以上。

1.2 試劑 嗜血桿菌分離平板 (HIN巧克力平板)、HTM藥敏培養(yǎng)基 (購自廣東省江門市環(huán)凱貿(mào)易有限公司)，VITEK2NHI試劑卡 (購自法國生物梅里埃公司)，藥敏紙片、Ⅴ+Ⅹ、Ⅴ、Ⅹ 因子均購自英國Oxoid公司。標(biāo)準(zhǔn)菌株流感嗜血桿菌ATCC49247，購自中國藥品生物制品檢定所。

1.2.1 菌株分離與鑒定 送檢標(biāo)本立即接種血平板和HIN巧克力平板,置于35℃，5%CO2培養(yǎng)24～48h，挑取血平板上不生長、HIN巧克力平板上生長的透明或半透明、扁平、濕潤的露滴狀疑似菌落做革蘭染色，革蘭染色呈陰性短小桿菌、部分呈球桿狀、少數(shù)呈細(xì)絲狀等多形態(tài)性。做衛(wèi)星試驗(yàn)，同時(shí)進(jìn)行Ⅴ、Ⅹ、Ⅹ+Ⅴ因子需求試驗(yàn)，根據(jù)菌落形態(tài)、染色鏡檢、衛(wèi)星試驗(yàn)及因子需求試驗(yàn)等特點(diǎn)進(jìn)行菌株鑒定[2]。同時(shí)采用法國生物梅里埃公司全自動微生物分析系統(tǒng)VITEK2-compact及配套試劑NHI試劑卡進(jìn)行鑒定。

1.2.2 β-內(nèi)酰胺酶測定 采用頭孢硝噻吩法,按照說明書操作。將Nitrocefin紙片濕潤，涂上嗜血桿菌菌落，觀察紙片顏色變化，變紅表示β-內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽性，不變色為陰性。

1.2.3 藥敏試驗(yàn) 采用K-B法分別進(jìn)行阿奇霉素、氨芐西林、復(fù)方新諾明、環(huán)丙沙星、頭孢呋辛、頭孢曲松、氯霉素、亞胺培南、左旋氧氟沙星、氨芐西林/舒巴坦等10種藥物的敏感性測定 (AST試驗(yàn))，按CLSI2009版的試驗(yàn)要求和標(biāo)準(zhǔn)來判定試驗(yàn)結(jié)果。質(zhì)控菌株為ATCC49247。

2 結(jié)果

2.1 β-內(nèi)酰胺酶檢測 136株流感嗜血桿菌中檢出40株β-內(nèi)酰胺酶陽性,產(chǎn)酶率為29.4%。

2.2 流感嗜血桿菌的析藥敏結(jié)果見表1。

表1 68例流感嗜血桿菌耐藥性分布

3 討論

流感嗜血桿菌主要寄居于人類上呼吸道黏膜，常引起下呼吸道感染、肺炎等嚴(yán)重疾病，由于流感嗜血桿菌致病性強(qiáng)。其所致疾病大致分為原發(fā)感染和繼發(fā)感染，前者主要屬于外源性感染，通過呼吸道傳播，常見于兒童；后者主要由寄居于上呼吸道的無莢膜菌株所致，常見于老人及免疫功能低下患者。兩類感染均可引起呼吸道本身疾患，亦可引起其他部位的感染，如菌血癥、腦膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎等[3]。同時(shí)，由于環(huán)境污染、藥物濫用及機(jī)體免疫功能下降等多方面原因，流感嗜血桿菌的耐藥率呈逐年上升。

流感嗜血桿菌由于自身缺乏某些酶類 (生長因子)，其生長需要V、X因子的共同存在和5%～8%CO2環(huán)境。本實(shí)驗(yàn)室采用了英國Oxoid公司提供的因子紙片及加入了萬古霉素的HIN培養(yǎng)基,抑制了革蘭陽性菌生長，增加了流感嗜血桿菌的選擇性而提高分離率。但是從以往相關(guān)報(bào)道比較[4]，本院流感嗜血桿菌的分離率偏低。這主要與臨床取材質(zhì)量和送檢的時(shí)間有關(guān)，由于流感嗜血桿菌在離體后存活率低，標(biāo)本應(yīng)在疾病早期采集；采集后應(yīng)在15～30min內(nèi)送檢。

流感嗜血桿菌對各類抗生素的耐藥性與其他細(xì)菌相比雖處于較低水平，但較過去已大大提高。其耐藥率的不斷上升，主要與產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶有關(guān),由表1可見，流感嗜血桿菌對氨芐西林的敏感率為48.5%，而對氨芐西林/舒巴坦的敏感率為88.2%，說明流感嗜血桿菌耐藥機(jī)制主要是由于產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶，水解了氨芐西林分子結(jié)構(gòu)上的β-內(nèi)酰胺環(huán)，使氨芐西林失去活性而耐藥。本院流感嗜血桿菌β-內(nèi)酰胺酶陽性率為29.4%，而國內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道流感嗜血桿菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶率在2.6～45%之間[5]，產(chǎn)酶率基本一致。β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株全部耐氨芐西林，可見，β-內(nèi)酰胺酶陽性能預(yù)測嗜血桿菌對青霉素、氨芐西林、阿莫西林耐藥[6]。而對頭孢二、三代和亞胺培南的敏感率達(dá)100%，臨床可首選這些藥物對流感嗜血桿菌感染進(jìn)行治療。

[1]臧煥平,賴國祥.老年人流感嗜血桿菌相關(guān)呼吸道疾病研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2007,13(2):119-121.

[2]李影林.臨床微生物學(xué)及檢驗(yàn)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:282.

[3]吳春鳳,姜煥好,曾東良,等.2004至2005年我院嗜血桿菌的分離及其耐藥性[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2007,19(1):78-79.

[4]陳民均,謝秀麗,張秀珍,等.北京上海廣州地區(qū)的流感嗜血桿菌分離及藥敏試驗(yàn)[J].中華傳染病雜志,1998,16(4):46.

[5]李雪芬,孔海深,陳東寶,等.流感嗜血桿菌在呼吸道感染意義及耐藥分析[J].上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,1999(14):72-77.

[6]朱澤航,蔡逸婷.人群呼吸道中嗜血桿菌的分布及其耐藥性[J].解放軍預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2007,25(1):13-16.

R378.4+1,R446.5,Q939.92

A

1674-1129(2010)06-0575-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2010.06.017

柯永堅(jiān)，1969年3月出生，男，漢族，大專，主管技師，廣東省惠來縣人，長期從事臨床微生物檢驗(yàn)工作。