姜建萍 劉喜華 杜 秀 陳 晨

摘要: 目的:觀察滇桂艾納香藥材用不同溶劑提取的浸膏灌胃給予小鼠后產(chǎn)生的急性毒 性反應(yīng)和死亡情況。方法:預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)50%?70%乙醇提取物毒性不明顯,無(wú)法測(cè)定半數(shù)致死 量 (LD₅₀),需改作最大耐受量(MTD)試驗(yàn),并且初步確定水提取物半數(shù)致死量(LD₅₀)試驗(yàn)用 藥劑量,正式實(shí)驗(yàn)采用小鼠灌胃給藥的方法測(cè)定水提取物半數(shù)致死量(LD₅₀)和50%?7 0%乙 醇提取物最大耐受量(MTD)。結(jié)果:滇桂艾納香水提取物的LD₅₀為143.1034g生藥/kg ,50%? 70%乙醇提取物MTD分別259.60g生藥/kg?309.68g生藥/kg。結(jié)論:滇桂艾納香毒性較小,臨 床用藥安全,且水提取物毒性大于醇提取物。

關(guān)鍵詞:滇桂艾納香;提取物;急性毒性

中圖分類(lèi)號(hào): R281.4;R996.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼: A 文章編號(hào): 1008-2409(2009)05-0808-03

The test of acute toxicity on different Blumea riparia(Bl.)DC extract/JIANG Jian-ping,LIU Xi-hua,DU Xiu,et al.∥Guangxi Traditional Chinese Medi cal University,Nanning 530001, China

Abstract:Objective:To observe the acute toxicity and the death status of diffe rent solvent extracts of Blumea riparia(Bl)DC. by ig in mice. Methods:The pre -experiment shows that 50% and 70% alcohol extracts can't determine LD₅₀whichhave no obvious toxic effect,so it is necessary to change it with the maximum t olerated dose(MTD)experiment. And the aqueous extract of LD₅₀of medicinedoseis initially difined. The official test determines the aqueous extract of LD₅₀, 50% and 70% alcohol extracts of MTD by ig administration in mice. Results:The a queous extract of Blumea riparia(Bl)DC. of LD₅₀, 50% and 70% alcohol extr actsof MTD were respectively 143.103g/kg,259.60g/kg and 309.68g/kg(equivalently tocrude drug). Conclusion:Blumea riparia(Bl)DC. has very low toxicity but widesafety range in clinical application, and the toxicity of aqueous extract is hi gher than that of alcohol extracts.

Key words:Blumea riparia(Bl)DC.; extract; acute toxicity

滇桂艾納香又名百花九里明?華艾納香,來(lái)源于菊科植物假東風(fēng)草Blumea riparia(Bl.)D C. 的干燥全草,為廣西民間常用壯藥,主要產(chǎn)于廣西西南部和云南東南部[1]。滇桂 艾納香在 廣西有較長(zhǎng)的臨床應(yīng)用歷史,壯醫(yī)認(rèn)為其味微苦淡?性微溫,有活血調(diào)經(jīng)?祛風(fēng)除 濕?止血?利水等作用,用于經(jīng)期提前?產(chǎn)后流血不止?產(chǎn)后浮腫?不孕癥?陰瘡?風(fēng)濕骨 痛等證[2-4]。筆者參照文獻(xiàn)的方法[5,6],用滇桂艾納香水提取物 和50%?70%乙醇提取物進(jìn)行了急性毒性研究,為該藥材的后續(xù)研究做好基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 藥物和動(dòng)物

滇桂艾納香藥材采自廣西龍州,經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室劉壽養(yǎng)副教授鑒定為菊科艾 納香屬植物滇桂艾納香Blumea riparia(Bl.)DC全草。健康昆明種小鼠,體重18~22g,雌 雄各半,由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證:SCXKG桂2003~2003)。

1.2 藥材不同提取物的制備

1.2.1 水提取物 滇桂艾納香藥材500g,剪碎,煎煮3次,每次加水3000ml ,煎煮時(shí)間分別為1.5h?1h?1h, 合并3次煎液濃縮至160ml,濃度3.125g生藥/ml。

1.2.2 70%乙醇提取物 滇桂艾納香藥材435g,粉碎,加入70%乙醇冷浸2次 ,每次加入乙醇5000ml靜置2d,合并冷 浸液,濃縮,得浸膏55.68g,即相當(dāng)于7.8g生藥/g。

1.2.3 50%乙醇提取物 滇桂艾納香藥材435g,粉碎,加入50%乙醇冷浸2次,每次加入乙醇5000ml靜置2d,合并冷 浸液,濃縮,得浸膏68.39g,即相當(dāng)于6.4g生藥/g。

1.3 方法[5,6]

1.3.1 預(yù)試驗(yàn) 選用18~22 g健康昆明種小鼠,重量最大不能相差4 g,雌 雄各半。每組4只 ,禁食不禁水15h,配制不同濃度的藥物,均按每只小鼠0.4 ml/10g灌胃給藥,摸索出使全 部 小鼠死亡的劑量和全部小鼠不死亡的劑量;50%?70%乙醇提取物以最大濃度灌胃給藥后未見(jiàn) 死亡,改做小鼠最大耐受量(MTD)試驗(yàn)。

1.3.2 LD₅₀的測(cè)定 健康昆明種小鼠60只,按性別?體重隨機(jī)分為6組 ,每組10只,雌雄各 半。其中一組為空白對(duì)照組,其余5組根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,藥材水提取物各組日受試劑量分別 為2 00.00,160.00,128.00,102.40,81.92g生藥/kg,兩相鄰劑量組間的高低劑量比為1∶0. 8 。各組小鼠均按0.4 ml/10g分2次灌胃給藥,2次灌胃間隔時(shí)間為6h,空白組給予等量飲用水 。灌胃 給藥前禁食不禁水約15 h,間隔期間不供食,給藥后常規(guī)飼養(yǎng),給藥后仔細(xì)觀察并記錄給藥 后即刻至14 d內(nèi)小鼠出現(xiàn)的毒性反應(yīng)與死亡情況。

1.3.3 MTD的測(cè)定 健康昆明種小鼠60只,隨機(jī)分為50%乙醇提取物組?70% 乙醇提取物組和 空白對(duì)照組,每組20只,雌雄各半。50%乙醇提取物組:以藥材浸膏可供小鼠灌胃的最大濃 度 (3.245 g生藥/ml),每次按0.4 ml/10g體重,分2次灌胃給藥,2次灌胃間隔6 h,日受試 劑量 為259.60g生藥/kg。70%乙醇提取物組:以藥材浸膏可供小鼠灌胃的最大濃度(3.871 g生藥 /m l),每次按0.4 ml/10g體重,分2次灌胃給藥,2次灌胃間隔6 h,日受試劑量為309.68g生 藥/kg 。對(duì)照組灌胃等量飲用水,余同各給藥組。各組小鼠灌胃前禁食不禁水15 h,間隔期間不供 食 ,給藥后常規(guī)飼養(yǎng),仔細(xì)觀察并記錄給藥后即刻至14d內(nèi)小鼠出現(xiàn)的毒性反應(yīng)與死亡情況。

1.3.4 觀察項(xiàng)目 ①給藥前測(cè)量小鼠體質(zhì)量,給藥后的第3, 7,10,14天 各測(cè)量小鼠體質(zhì) 量1次。②觀察給藥后小鼠的精神?活動(dòng)?食量?飲水量?大小便及存活情況;記錄各組小 鼠的死亡情況,死亡小鼠立即解剖觀察肝?心?脾?肺?腎?胃及小腸等器官的變化。

1.3.5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析 采用改良寇氏法計(jì)算LD₅₀采用SPSS 13.0 軟件統(tǒng)計(jì)分析處理各組數(shù)據(jù)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 LD₅₀試驗(yàn)

給藥后各組小鼠出現(xiàn)不同程度的毒性反應(yīng),相繼出現(xiàn)精神萎靡?活動(dòng)減少 ?呆臥?刺激反應(yīng)低下等中毒癥狀,劑量越高出現(xiàn)越早,癥狀越明顯,最后出現(xiàn)興奮狀態(tài), 間隙性跳躍,最后死亡。小鼠于每次給藥后0.25~1 h開(kāi)始出現(xiàn)死亡,0.5 h為死亡高峰期, 且死亡小鼠主要集中在第二次給藥后,未見(jiàn)性別差異,空白組未見(jiàn)死亡。死亡動(dòng)物解剖后, 肉眼未見(jiàn)臟器異常改變。給藥后第2天開(kāi)始以上癥狀逐漸消失,飲食恢復(fù)正常,第15天處死 未死亡動(dòng)物,解剖觀察小鼠心?肝?脾?肺?腎?胃?腸等臟器肉眼均未見(jiàn)異常。記錄從給 藥開(kāi)始至第14天動(dòng)物死亡情況(見(jiàn)表1)。

結(jié)果顯示灌胃給藥水煎提取物L(fēng)D₅₀為143.1034g生藥/kg,95%可信限為 :130.023~157.023g生藥/kg。

2.2 MTD試驗(yàn)

小鼠灌胃 50%?70%乙醇提取物藥液后共觀察14d。在藥后2h內(nèi)個(gè)別動(dòng)物活 動(dòng)減少,表現(xiàn)較安靜,其余未見(jiàn)異?，F(xiàn)象,給藥第2天起,所有受試動(dòng)物飲食正常,精神狀 態(tài)良好,活動(dòng)靈活積極,體重增加正常,活動(dòng)未見(jiàn)異常,皮毛光滑,大小便未見(jiàn)異常,亦無(wú) 異常分泌物。14d內(nèi)無(wú)一動(dòng)物死亡。第15天處死動(dòng)物后解剖觀察小鼠心?肝?肺?脾?腎 ?胃?腸等臟器肉眼未見(jiàn)明顯病理學(xué)改變。故測(cè)得滇桂艾納香50%乙醇提取物?70%乙醇提取 物對(duì)昆明種小鼠灌胃給藥的日最大給藥劑量分別為259.60g生藥/kg?309.68g生藥/kg。實(shí)驗(yàn) 結(jié)果如表2?表3。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)比較3種不同溶劑提取的滇桂艾納香藥材浸膏發(fā)現(xiàn)不同溶劑提取的藥材浸膏在毒 性方面有差別,水提取的要比50%,70%乙醇提取的毒性大,說(shuō)明該藥材毒性成分主要集中在 水煎提取物中,為水溶性成分。

滇桂艾納香人臨床日用量為15~30g[1],若人平均體重按60kg計(jì)算,人平均日用量 按30g計(jì) 算,灌胃給藥水煎提取物的LD₅₀為143.1034g生藥/kg相當(dāng)于人口服日用量的286倍;5 0%乙醇提 取物的最大耐受量為259.6g生藥/kg相當(dāng)于人口服日用量的519倍;70%乙醇提取物的最大耐 受 量為309.68g生藥/kg相當(dāng)于人口服日用量的619倍。同時(shí)死亡動(dòng)物肉眼觀察主要器官均未見(jiàn) 明 顯異常,存活動(dòng)物亦相同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示滇桂艾納香毒性非常低尤其是乙醇提取物,但是總 體來(lái)說(shuō)該藥材毒性不大,臨床用藥安全。

滇桂艾納香乙醇提取物毒性較低但是是否藥理作用也較好,還有毒性成分主要是什么,有效 成分主要是什么,都未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道,這些都有待于進(jìn)一步研究。

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(收稿日期: 2009-07-23)

[責(zé)任編輯 王慧瑾 鄧德靈]