70600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院 仝武軍 徐 莉 張小麗 70600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院第二療養(yǎng)區(qū) 李 麗

HPLC法測(cè)定風(fēng)痛定膠囊中青藤堿的含量

710600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院 仝武軍1徐 莉3張小麗4710600 蘭州軍區(qū)臨潼療養(yǎng)院第二療養(yǎng)區(qū) 李 麗2

目的 建立風(fēng)痛定膠囊中青藤堿含量HPLC測(cè)定方法。方法 色譜柱為CenturySIL 5 μm C18-BDS分析(4.6 mm×250 mm，5 μm)柱，流動(dòng)相為甲醇:[(乙二胺:水)(1:300)](62:38)，流速為0.5 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為262 nm。結(jié)果 青藤堿在1.06～10.6 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 8，平均回收率為93.38%，RSD為1.94%(n=5)。結(jié)論 此方法準(zhǔn)確可靠，簡(jiǎn)單易行，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

風(fēng)痛定膠囊；青藤堿；高效液相色譜法

風(fēng)痛定膠囊由青風(fēng)藤、黃柏、蒼術(shù)、黃芪等七味中藥組成[1]，本文采用高效液相色譜法測(cè)定方中主藥青風(fēng)藤中青藤堿的含量，方法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

美國(guó)DIONEX P680高效液相色譜儀；PDA 100 photodiode Array detector(二極管陣列檢測(cè)器)，7725i進(jìn)樣閥、chromeleon數(shù)據(jù)處理軟件；色譜柱：Century SILC18-BDS分析柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；R200D電子分析天平；SK250LH型超聲波清洗器。

青藤堿對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)0774-200206)風(fēng)痛定膠囊3批(院內(nèi)自制)。甲醇為色譜醇，水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Century SIL 5 μm C18-BDS分析柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇:[(乙二胺:水)(1:300)](62:38)；檢測(cè)波長(zhǎng)：262 nm；流速：0.5 mL/min；柱溫：26℃；進(jìn)樣量：20 μL[2]。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取青藤堿對(duì)照品適量，用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，制得0.53 mg/mL青藤堿對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取風(fēng)痛定膠囊10粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，置于25 mL容量瓶?jī)?nèi)，加甲醇至刻度，超聲提取30 min，靜置，精密量取上清液4 mL移至5 mL容量瓶?jī)?nèi)，用甲醇定容。搖勻，用微孔濾膜(0.45 μm)濾過(guò)，去續(xù)濾液，即得。

圖1

圖2

2.4 線性關(guān)系考察 精密移取制得的對(duì)照品溶液0.5，1，2，3，5 mL置5 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，依 次 得 到 濃 度 為 0.053 0 mg/mL，0.106 0 mg/mL，0.212 mg/mL，0.530 mg/mL的對(duì)照品溶液。以青藤堿進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=530.371 8X-2.307 2，r=0.999 8(n=5)，表明青藤堿在1.06～10.6 μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，20 μL/次，測(cè)定青藤堿峰面積，RSD為0.9%(n=5)。

2.6 干擾試驗(yàn) 取不含青風(fēng)藤陰性樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液，取對(duì)照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 μL，注入色譜儀，記錄色譜圖，陰性樣品對(duì)測(cè)定無(wú)干擾(圖1～3)。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0，3，6，9，12 h進(jìn)樣20 μL，測(cè)定青藤堿峰面積，其RSD為0.8%(n=5)，供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品5份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣20 μL測(cè)定，青藤堿含量為0.364 mg/粒，RSD=0.7%(n=5)。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

圖3

2.9 加樣回收試驗(yàn) 采用加樣回收法測(cè)定，在已知含量的樣品中分別加入一定體積、已知濃度的青藤堿對(duì)照品，按供試品溶液制備方法操作，按色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果(表1)。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=5)

2.10 樣品含量測(cè)定取樣品照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試液，進(jìn)樣20 μL，測(cè)定峰面積計(jì)算含量，結(jié)果(表2)。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

青風(fēng)藤為風(fēng)痛定膠囊中主藥之一，主要含生物堿，包括青藤堿、雙青藤堿、四氫表小檗堿、尖防己堿和土藤堿等[3]，其中青藤堿含量較高，可作為含量測(cè)定指標(biāo)。

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：取青藤堿對(duì)照品溶液，以甲醇為空白在200～300 nm范圍內(nèi)掃描，顯示在262 nm處有最大吸收，故選擇262 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)，編.中國(guó)藥典(二部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：附錄66.

[2]陳發(fā)奎.常用中藥有效成分含量測(cè)定[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：85-86.

[3]王巖.青風(fēng)藤的研究進(jìn)展[J].中藥材，2002，25(3)：209-211.

2009-07-11)

1005-619X(2009)10-0936-02